编辑推荐：
这种方法可以用来插入一个完整的正常或“野生型”替代基因，不管病人的特定突变是什么样的，它都可以作为一种疾病的全面疗法。
研究亮点：
研究人员已经开发出一种改进的方法，可以更准确地将大片段的DNA序列(如整个正常的替代基因)插入细胞中
这一进展可能会导致具有广泛临床应用技术的发展，修复不同的致病突变
许多遗传疾病是由散布在整个基因上的不同突变引起的，为每个患者的突变设计基因组编辑方法是不切实际的，而且成本高昂。
麻省总医院(MGH)的研究人员最近开发了一种优化方法，可以提高将大DNA片段插入基因组的准确性。
这种方法可以用来插入一个完整的正常或“野生型”替代基因，这可以作为一种疾病的全面治疗，而不考虑患者的特定突变。
这项工作涉及对一类新技术的优化，即CRISPR相关转座酶（CAST），这是一种很有前途的工具，用于大规模的DNA插入，可以通过一个可重编程的引导RNA轻松定向到所需的基因组部位。
然而，在自然状态下，CAST对于基因组编辑应用来说具有不理想的特性，即产品纯度不高（长时间内只有预定的DNA序列被插入到基因组中），以及在基因组中的非预定位点上出现不必要的脱靶整合率相对较高。
由麻省理工学院和MGH的研究生Connor Tou和高级作者Ben kleinver博士领导的团队，在他们发表在《自然生物技术》上的研究中，通过使用蛋白质工程方法修改CAST系统的特性来解决这些缺点。
他们发现，在CAST中添加一种称为切痕归巢内切酶（nicking homing endonuclease，生物通注）的酶，可以显著提高产品纯度，达到预期的插入点。
对CAST结构的进一步优化导致DNA插入在预期的基因组靶点上具有高整合效率，大大减少了不必要的脱靶位点的插入。
研究人员将新的改进系统称为“HELIX”，这是 Homing Endonuclease-assisted Large-sequence Integrating CAST-compleX的缩写。
“这是一种可推广的方法，可用于将各种CAST系统修改为更安全、更有效的版本，具有高产品纯度和全基因组特异性，”Tou说。
“通过结合新见解，我们创造了靶向整合特异性超过96%的HELIX系统，而自然存在的野生型CAST系统约为50%。我们还确定HELIX在人类细胞中保持其优势特性。”
Kleinstver指出，这项技术的应用可能超出了恢复致病突变个体正常健康基因的能力。
“此外，可编程DNA整合可以促进细胞工程，在目标位置安装大型基因序列可以赋予细胞新的能力，同时避免传统随机整合方法带来的安全性、有效性和制造问题。”
生物通微信公众号
生物通 版权所有
