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仔细选择Cas13变体和递送方法可以最大限度地减少附带RNA降解。
CRISPR-Cas13在转录组扰动和治疗应用中存在非特异性RNA降解的可能性,这引起了人们的关注。我们发现,只有在RfxCas13d表达量很高的情况下才会出现非特异性活性。
在转录组规模和组合筛选中使用低拷贝数的RfxCas13d,我们实现了高特异性的RNA敲低,而没有广泛的非特异性活性。
此外,对高保真Cas13变体的分析表明,其非特异性活性的降低可能是由于其整体核酸酶活性的减弱。
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