炎症是机体免疫系统对抗感染和损伤的重要防御反应，但不受控制的慢性炎症却是癌症、心血管疾病、自身免疫病和神经退行性病变等多种重大疾病的共同土壤。巨噬细胞作为炎症反应的“哨兵”，在识别脂多糖（LPS）等危险信号后，会通过Toll样受体（TLR）激活核因子κB（NF-κB）等关键通路，进而大量释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）等促炎因子，以及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和环氧化酶-2（COX-2）等炎症介质。虽然临床上常用甾体和非甾体抗炎药控制炎症，但其肝毒性、胃肠道损伤等副作用限制了长期应用。因此，从天然产物中寻找高效低毒的抗炎成分成为研究热点。
花青素作为广泛存在于花卉和果实中的水溶性色素，已被报道具有抗肥胖、抗糖尿病、抗癌及抗炎等多种生物活性。无梗五加（Eleutherococcus sessiliflorus）作为一种传统草药，其果实富含花青素。然而，其中特定成分矢竹菊素-3-O-香豌豆糖苷（cyanidin-3-O-lathyroside）的抗炎作用与机制尚不明确。为此，发表于《Journal of Functional Foods》的这项研究，首次系统阐释了该化合物在LPS诱导的巨噬细胞炎症模型中的抑制作用及其分子机制。
研究团队采用70%甲醇酸性提取、正丁醇分段以及中压制备色谱等技术，从无梗五加果实中分离得到矢竹菊素-3-O-香豌豆糖苷，并通过高分辨质谱（HR-ESI-MS）和核磁共振（NMR）鉴定了其结构。在细胞实验中，以小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7为模型，使用LPS（0.5 μg/mL）诱导炎症反应，并设定了8至65 μM的化合物处理组。通过阿尔玛蓝（AlamarBlue）法评估细胞活性，显微镜下观察细胞形态变化，实时荧光定量PCR（qPCR）检测炎症因子mRNA表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定细胞因子蛋白分泌，格里斯（Griess）法分析一氧化氮（NO）水平，蛋白质免疫印迹（Western blot）考察NF-κB通路关键蛋白表达与磷酸化，并通过免疫荧光观察p65核转位。
3.1. 化合物分离与鉴定
从无梗五加果实中成功分离出矢竹菊素-3-O-香豌豆糖苷，经质谱与核磁共振数据确认其分子式为C26 H29 O15 ，结构为氰定-3-O-木糖基(1→2)半乳糖苷。
3.2. 细胞活性与形态学影响
化合物在8–260 μM浓度范围内对RAW 264.7细胞及人真皮成纤维细胞（HDF-a）均无毒性。形态学观察发现，LPS刺激4小时后细胞即出现活化形态（体积增大、伪足形成），而65 μM矢竹菊素-3-O-香豌豆糖苷预处理可显著延迟此现象，至16小时才见明显活化。
3.3. 促炎基因表达抑制
qPCR结果显示，LPS显著上调iNOS、COX-2、TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达。矢竹菊素-3-O-香豌豆糖苷在32与65 μM浓度下能明显抑制这些基因的表达，其中对TNF-α的抑制效果甚至强于阳性对照地塞米松（Dexamethasone, 1 μM）。
3.4. 细胞因子分泌减少
ELISA检测表明，化合物处理可剂量依赖性地降低细胞上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的蛋白水平，16 μM即可显著抑制TNF-α，而65 μM对IL-1β与IL-6亦有明显抑制作用。
3.5. iNOS与COX-2蛋白及活性调控
Western blot显示iNOS与COX-2蛋白表达在LPS诱导后升高，化合物处理组呈下降趋势但无统计学显著性。然而，功能性检测中，16 μM以上浓度可显著减少NO产量（iNOS活性指标），65 μM能降低前列腺素E2 （PGE2 ，COX-2产物）水平。
3.6. NF-κB信号通路抑制
免疫荧光与细胞组分Western blot分析揭示，矢竹菊素-3-O-香豌豆糖苷能抑制IκB-α磷酸化，减少磷酸化p65（p-p65）向核内转移。核质分数值分析显示，65 μM处理组的核/浆p-p65比值显著降低，表明NF-κB转录活性受到遏制。
本研究首次报道矢竹菊素-3-O-香豌豆糖苷可通过阻断NF-κB信号通路，在转录与蛋白水平抑制关键促炎因子及介质表达，从而缓解LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。该发现不仅深化了对无梗五加药用价值的认识，也为开发基于花青素的天然抗炎制剂提供了重要的候选化合物与理论依据，在功能食品和炎症性疾病辅助治疗领域具有广阔前景。
打赏
