瓦伦蒂娜·D·古萨罗娃（Valentina D. Gusarova）|伊万·V·利亚戈斯金（Ivan V. Lyagoskin）|马克西姆·B·德格特列夫（Maksim B. Degterev）|亚历山大·V·罗迪奥诺夫（Alexander V. Rodionov）|奥尔加·L·埃夫多基莫娃（Olga L. Evdokimova）|拉希姆·R·舒库罗夫（Rahim R. Shukurov）
制药分析部门，JSC “GENERIUM”，弗拉基米尔大街14号，沃尔金斯基区，佩图申斯基区，弗拉基米尔州，601125，俄罗斯
摘要
由俄罗斯IBC Generium公司开发的GNR-087是一种与托珠单抗（Tocilizumab）参考产品具有生物相似性的候选药物。对GNR-087与托珠单抗参考产品在结构和功能上的相似性进行了全面的分析评估，这是逐步评估过程中的一个步骤，采用了先进的分析技术。评估时考虑了适当的产品质量属性，包括那些已知会影响作用机制、疗效和安全性的属性。研究表明，GNR-087具有与托珠单抗相同的氨基酸序列和高阶结构、相似的N-糖基化模式以及翻译后修饰特征，并且具有相同的生物活性。属性上的细微差异（特别是某些类型糖类的含量）被认为在临床上无关紧要，这一点通过生物学和功能测试得到了证实。比较相似性的评估结果证明了GNR-087与托珠单抗参考产品具有高度的分析可比性。GNR-087（商品名Complarate®）于2024年在俄罗斯联邦获得许可，用于治疗类风湿性关节炎。
引言
“生物类似物”一词指的是“已经获准上市的原始生物制剂的活性物质版本”，根据全面的比较研究，该版本在质量特性、生物活性、安全性和疗效方面被证明与参考制剂具有可比性[1]。
分析测试一直是确认可比性的基础，最初用于同一治疗产品在不同工艺变更后的情况。在工艺变更后，通常使用有限的测试来证明产品质量未发生变化。随着生物类似物的出现和应用的增加，所需的分析数据变得更加广泛，包括翻译后修饰的分析以及大量生产批次的比较。比较分析和功能表征是必要的，以确认生物类似物的活性成分在结构和功能上与参考制剂相似，因此预计生物类似物将具有相同或非常相似的治疗效果。如今，由于主要监管机构发布了明确的技术指南[2]、[3]、[4]，比较研究大大简化了。这些指南包含了一组用于正确评估可比性的敏感正交分析方法的建议，以及基于风险的分析数据权重系统[5]、[6]、[7]。对于生物类似物产品，由于生产过程的不同，有时甚至使用不同的细胞系[8]，往往无法获得与参考制剂完全可比的治疗产品。基于风险的方法是一种有效的方法，用于确定生物类似物的哪些物理化学特性是关键质量属性（CQAs），并对产品的疗效、安全性、药代动力学和免疫原性有直接影响。对于关键质量属性，不允许生物类似物与参考制剂之间存在任何差异，并且必须证明生物类似物在预先规定的阈值范围内与参考制剂高度匹配[9]、[10]、[11]。对于权重较低的数据，生物类似物与参考制剂之间的差异可以更大（例如，单克隆抗体的C末端赖氨酸去除、N末端焦谷氨酸的形成）。关于蛋白质的各种翻译后修饰（如糖基化、氧化、脱酰胺等）如何影响临床特性的证据不断积累，这使得在新药开发和生物类似物开发中能够采取主动的方法。随着越来越灵敏和准确的体外方法的出现，可以在不使用动物实验的情况下对治疗产品进行表征和比较，从而加快了开发进程并降低了成本。综上所述，上述方法为建立治疗产品的可比性提供了极其可靠的工具。
此前已经提出了几种托珠单抗的生物类似物，并且成功地证实了它们与原研托珠单抗在物理化学和生物学上的相似性，这些信息可在公开的科学文献中找到[12]、[13]、[14]。2017年，S. Miao及其同事发表了第一篇专门讨论所提出的托珠单抗生物类似物与参考制剂比较特性的科学文章[12]。作者通过测试广泛的物理化学参数和生物活性（包括结合活性和效力），证明了由中国Hisun Pharmaceutical公司开发的HS628与原研托珠单抗（Actemra®）的相似性。尽管在比较的托珠单抗制剂中发现了电荷异构体和糖基化模式的细微差异，但这些差异并未导致功能特性的变化[12]。2024年进行了广泛的分析评估，包括44批原研托珠单抗产品（16批来自中国，16批来自欧盟，12批来自美国）和10批候选生物类似物BAT1806/BIIB800（由中国广州的Bio-Thera Solutions Ltd生产）[13]。BAT1806/BIIB800在大多数关键质量属性上与RoActemra®/Actemra®具有可比性，包括关键活性参数（例如，可溶性IL-6R结合能力和抑制IL-6介导的细胞增殖能力）。虽然发现了糖基化程度、聚集水平、糖基化模式和电荷变异体分布的细微差异，但这些差异在临床上被认为无关紧要[13]。最近的一项研究由Solti及其同事进行[14]，比较了Gedeon Richter Plc生产的RGB-19的静脉注射和皮下注射制剂与欧盟来源的RoActemra®。与上述提出的托珠单抗生物类似物一样，RGB-19在所有关键质量属性上也显示出高度的可比性。糖基化、唾液酸化水平以及带电变异体和片段的分布的细微差异并未影响生物活性或结合特性，因此也被认为在临床上无关紧要。
关于作为托珠单抗（Actemra®，霍夫曼-拉罗氏公司）生物类似物开发的GNR-087，在I期（NCT06481202）和III期（NCT06475508）临床试验中证实了GNR-087与托珠单抗RP的临床可比性。本文重点介绍了GNR-087的全面分析和功能表征，以确定其与托珠单抗参考制剂（RP）的可比性。该分析涵盖了所有用于临床试验的GNR-087批次。GNR-087批次与大约5年内采购的托珠单抗RP批次进行了比较。用于相似性分析的方法选择基于GNR-087和托珠单抗RP的结构和功能，重点关注对生物活性至关重要的质量特性，包括与可溶性和膜结合形式的白细胞介素6受体（分别为sIL-6R和mIL-6R）的结合能力，以及通过抑制IL-6信号通路测得的效力。制定了相似性评估计划，以将生物类似物GNR-087的质量属性与预定义的评估标准进行比较，确保任何发现的GNR-087与托珠单抗RP之间的差异都能按照全球监管指南的要求进行识别和评估[2]、[3]、[4]、[6]、[7]。这里展示的结果证明了GNR-087与托珠单抗RP的相似性。
分析样本
分析样本
分析测试计划及其使用的方法在支持信息（SI）中的表S1中进行了总结。我们采用了30多种结构和功能方法来确认GNR-087与托珠单抗RP的分析可比性，这些方法基于文献中关于IgG1产品生物类似性评估的通用实践[15]、[16]，以及针对托珠单抗生物类似物的具体研究[12]、[13]、[14]。
GNR-087（JSC “GENERIUM”，沃尔金斯基，俄罗斯）的总数量
结果与讨论
GNR-087与托珠单抗RP的物理化学和功能可比性的分析测试计划及方法见SI中的表S1。我们使用了初级和正交方法来评估每个质量参数，以及最先进的方法。应用于每个等级组的风险评估策略和相应的评估标准见表S2和表2，其中包含了从关键结构和功能评估中获得的数据
结论
GNR-087作为托珠单抗的生物类似物被开发出来。采用了大量先进的、灵敏的正交方法来评估GNR-087与托珠单抗RP之间的分析和功能可比性。比较分析表明，GNR-087在结构和功能上与托珠单抗RP相似。GNR-087在初级结构、高阶结构、分子量分布等方面都与托珠单抗RP相似
利益冲突
作者声明没有利益冲突。
资助
作者报告称，本工作由JSC “GENERIUM”资助。
CRediT作者贡献声明
奥尔加·L·埃夫多基莫娃（Olga L. Evdokimova）： 撰写——审稿与编辑、可视化、方法学、研究。伊万·V·利亚戈斯金（Ivan V. Lyagoskin）： 撰写——初稿、验证、监督、方法学、研究、形式分析。瓦伦蒂娜·古萨罗娃（Valentina Gusarova）： 撰写——审稿与编辑、撰写——初稿、可视化、验证、监督、方法学、研究、形式分析、概念化。亚历山大·V·罗迪奥诺夫（Alexander V. Rodionov）： 可视化、方法学、研究。马克西姆·B·德格特列夫（Maksim B. Degterev）： 方法学、研究。
利益冲突声明
作者声明没有已知的可能会影响本文所述工作的财务利益或个人关系。
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