Juni Handajani | Regina T.C. Tandelilin | Heriati Sitosari | Rezmelia Sari | Dyah Irnawati | Puteri Shafinaz Abdul-Rahman | Intan D. Septiani | Nafisa A. Puspa
印度尼西亚加查马达大学牙科学院口腔生物学系
**摘要**
**研究目的**
本研究旨在评估绿茶提取物制成的纳米凝胶（NanoEmulgel）是否能够促进并加速唇部黏膜擦伤的愈合过程。
**研究方法**
研究共使用了34只Wistar品种的大鼠，随机分为两组：一组使用Aloclair Plus凝胶作为阳性对照，另一组则使用绿茶提取物制成的纳米凝胶。使用圆形取样工具在唇部黏膜上制造了一个直径为3毫米的伤口，并每天一次将20微升的纳米凝胶涂抹于伤口处，持续4天。在实验动物被处死后的第1天、第3天、第7天和第14天收集组织样本，并将其封存于石蜡中。同时，还观察了纳米凝胶对大鼠背部皮肤是否引起过敏反应。研究者评估了过敏反应情况、伤口直径、血管灌注情况以及环氧化酶-2（COX-2）的表达水平，并从临床和组织学角度对结果进行了分析。通过统计分析方法比较了各组之间的差异。
**研究结果**
结果表明，绿茶提取物制成的纳米凝胶具有良好的耐受性，未发现任何过敏反应的迹象。在第5天观察到血管灌注显著增加；而COX-2的表达在第3天达到峰值，随后伤口逐渐缩小。
**结论**
研究结果表明，这种绿茶提取物纳米凝胶通过促进新血管的形成、调节炎症反应及减少伤口直径，有效加速了唇部黏膜擦伤的愈合过程。
**引言**
创伤性溃疡是由机械性、热力性、化学性或电性损伤引起的口腔黏膜病变，其发病率约为83.6%。1 深度溃疡表现为上皮缺失形成的白色或红色区域，中央常有黄色纤维素渗出物，边缘呈红色，形状多为圆形且大小不一。2 口腔黏膜损伤会刺激基底表皮层、成纤维细胞和上皮周围毛细血管中的COX-2表达，COX-2催化产生包括血栓烷和前列腺素在内的炎症介质。无论是急性还是慢性口腔溃疡都会触发愈合过程。3, 4, 5, 6 口腔黏膜的愈合过程与皮肤愈合有所不同，主要体现在解剖结构和微环境方面：唾液能保持黏膜湿润并维持pH值在5.5–7之间，从而促进更快速且纤维化程度较低的愈合。愈合过程包括止血、炎症、增殖和成熟三个阶段，其中炎症阶段对于控制损伤范围和清除坏死组织、促进增殖至关重要。6, 7 口腔黏膜愈合可通过草药疗法加速，相比合成药物而言草药副作用较小。具有促进愈合作用的草药成分多来自天然物质（如绿茶）。新鲜嫩叶因富含活性物质和维生素而被用于此目的；绿茶中的主要活性成分是表没食子儿茶素3-没食子酸酯（EGCG），约占总儿茶素含量的60%。研究表明EGCG具有抗炎作用，可抑制口腔黏膜溃疡处炎症介质的合成，从而加速愈合。8, 9, 10, 11 然而，草药的疗效受其活性成分的生物利用度、溶解度和在口腔黏膜中的稳定性限制。这些成分易被唾液分解，且因分子量大难以渗透黏膜层。纳米技术正被用于提升草药的稳定性和溶解度。纳米凝胶是一种纳米乳液与水凝胶系统的结合体，有望提高活性成分在颊部黏膜上的停留时间和稳定性。12, 13 本研究通过测量过敏反应、伤口大小和COX-2表达水平，评估了绿茶提取物纳米凝胶对创伤性颊部溃疡愈合的疗效。研究的新之处在于同时监测了过敏反应、伤口直径和局部灌注情况，形成了较为完整的多维度数据集。
**材料与方法**
本研究获得了加查马达大学牙科学院伦理委员会的批准（许可证编号：65/UN1/KEP/FKG-RSGM/EC/2025）。茶叶由PT Pagilaran Indonesia提供（许可证编号：009/D.a/Dir/IV/2025）。加查马达大学生物学院植物系统学实验室确认这些茶叶属于Camellia sinensis（L.） Kuntze品种。所有材料和茶提取物纳米凝胶的制备工作在泗水药学院完成（许可证编号：4185/UN1/KG.1/PT/2025）。COX-2抗体购自美国Novus Biologicals公司，免疫组化试剂盒购自美国Elabscience公司。用于苏木精-伊红染色的化学试剂由加查马达大学牙科学院提供。实验对象为34只Wistar大鼠。
**茶提取物及纳米凝胶的制备**
先将新鲜茶叶与茎部分离并切片，晒干后粉碎。接着过滤并称重茶叶，加入96%酒精静置3天后进行多次过滤。将过滤后的茶末在50°C下蒸发、施加200 mbar的压力并在40 rpm下搅拌。茶提取物纳米凝胶的制备工作在泗水药学院完成，最终制得浓度为10%的产品。
**实验过程**
34只Wistar大鼠被随机分配到实验组或对照组。每只大鼠肌肉注射0.1毫升酮胺镇静后，使用3毫米 biopsy punch在颊部黏膜上制造溃疡。实验组使用纳米凝胶，对照组使用Aloclair Plus®凝胶，每天一次、每次20微升。治疗期间动物在第1天、第3天、第5天和第14天接受麻醉处理。根据伦理规范，在给予两倍剂量酮胺后处死大鼠。分别在第1天、第3天、第5天和第14天采集组织样本进行观察。
**数据分析**
结果显示，绿茶提取物纳米凝胶未引起过敏反应；第5天血管灌注显著改善，COX-2表达在第3天达到峰值，伤口逐渐缩小。
**结论**
绿茶提取物纳米凝胶通过促进新生血管生成、调节炎症反应和减小伤口直径，有效加速了颊部黏膜擦伤的愈合过程。该过程通过将样本两次浸入二甲苯中各2分钟来继续进行，以去除任何剩余的酒精，从而使组织显得更加明亮和清晰。最后一步是安装样本并覆盖上盖玻片。
**免疫组化染色**：
首先，将切片通过浸入二甲苯（两次，每次5分钟）进行脱蜡处理，然后通过一系列不同浓度的酒精来去除蜡质：100%（两次，每次3分钟）、95%（3分钟）、80%（3分钟）和70%（3分钟）。排水后，将切片放入铺有湿纸巾的保湿箱中以防止干燥。通过向每个切片滴加3%的H2O2并在室温下孵育10分钟来阻断内源性过氧化物酶，随后用磷酸盐缓冲盐（PBS）清洗三次，每次2分钟。为了降低背景染色，再加入正常的山羊阻断缓冲液，并在37°C下孵育30分钟。最后，以1:100的稀释比例加入50 μL的兔多克隆anti-COX-2抗体（Novus Biologicals，美国），然后在4°C下孵育过夜。抗体孵育24小时后，用PBS清洗切片三次（每次2分钟）。将切片的反面用纸巾擦干，然后加入多聚过氧化物酶-抗小鼠/兔IgG（E-IR-R217B），并在室温或37°C下孵育20分钟，再用PBS清洗三次。染色是通过将切片浸入1:20的3,3'-二氨基苯嗪（DAB）显色剂溶液中5分钟来完成的，直至出现棕褐色或黄褐色，表示阳性信号，同时监测以避免过度染色。用蒸馏水清洗切片以去除任何剩余的试剂。随后，用Mayer's hematoxylin对切片进行复染，在室温下孵育3分钟，并用蒸馏水清洗以确保所有残留的hematoxylin被彻底冲洗掉。脱水是通过将切片浸入一系列不同浓度的酒精溶液（70%、80%、95%和100%）中，并两次浸入二甲苯中各2分钟来完成的。最后一步是清洁切片，加入一滴 mounting medium，然后覆盖上盖玻片。将切片放置24小时以确保mounting medium完全固化。阳性COX-2表达表现为细胞质或核周区域的棕色/DAB染色。
**植物化学筛选**：
植物化学筛选显示，茶提取物中含有黄酮类、皂苷、单宁、萜类、甾醇和生物碱。茶提取物的总酚含量为194.72 mg gallic acid equivalents (GAE)/g提取物，总黄酮含量为191.67 mg quercetin equivalents (QE)/g提取物。这两个值都属于植物提取物的高类别，范围大约在190–195 mg/g之间。这些结果表明，使用来自印度尼西亚PT Pagilaran的茶叶制备的提取物富含酚类和黄酮类化合物。几乎相等的酚类和黄酮类水平表明，提取物中的酚类成分主要包含黄酮类（儿茶素、茶多酚）。
**绿茶提取物纳米乳液的稳定性**：
通过将制备物分别在4°C ± 1°C下储存24小时和40°C ± 1°C下储存24小时来测试其稳定性。进行了12天的物理稳定性测试，包括感官特性（颜色、气味和形状）、pH值、涂抹性和均匀性分析（表1）。
**评估结果**：
- **颜色**：棕绿色
- **气味**：典型的茶香
- **质地**：半固态（凝胶）
- **pH值**：5.48
- **均匀性**：均匀
- **涂抹能力**：6厘米
**傅里叶变换红外光谱（FTIR）结果**：
图1显示了基础制剂和绿茶提取物纳米乳液的FTIR结果。下载高分辨率图像（295KB）和完整尺寸图像。
- 样本G1（基础）显示出特征性的矩阵带（C–O、弱的CO和芳香/酰胺）以及大约3369 cm−1处的弱OH带。样本G2（纳米乳液+茶提取物/EGCG）产生了额外的和/或移位的峰，OH带更明显（约3325 cm−1），CO峰更突出（约1701 cm−1），并且1600–1500 cm−1区域的峰强度和数量增加（芳香/酰胺）。FTIR光谱显示了基础制剂（EGCG/茶提取物）和纳米乳液基质（表面活性剂/酯/C–O）的特征性芳香酚类特征，以及活性成分与载体之间可能的氢键/物理相互作用。结果表明：(1) G2中的OH带更宽/更强烈（约3325 cm−1），支持了酚类成分（EGCG/茶提取物）在纳米乳液中的存在以及EGCG与载体基质之间的氢键作用；(2) G2中出现了强烈的CO峰（1701 cm−1），而在G1中并不明显，表明可能出现了新的羰基成分或羰基环境的变化；(3) G2中1610–1540 cm−1区域的强度增加与结合芳香结构（儿茶素）的含量增加和/或载体材料中酰胺的变化一致。
**粒径分析**：
图2显示了绿茶提取物纳米乳液的粒径分析结果。下载高分辨率图像（201KB）和完整尺寸图像。
绿茶提取物纳米乳液的粒径处于中纳米到亚微米范围，中位粒径（D50）为282 nm。粒径分布呈中等窄度（多分散指数为0.228），这一值通常适用于纳米乳液制剂（多分散指数< 0.3表示相对良好的粒径分布）。
**大鼠背部皮肤过敏反应的临床观察**：
将绿茶提取物纳米乳液和阳性对照物（Aloclair Plus®）涂抹在大鼠背部皮肤上4天后，未观察到过敏反应。临床观察结果见图3。
**组织长期使用观察**：
在大鼠背部皮肤上应用绿茶提取物纳米乳液和阳性对照物（Aloclair Plus®）4天后，未观察到过敏反应。KP1和KP2分别代表第1天和第4天的治疗组；K(+)1和K(+)2分别代表第1天和第4天的阳性对照组（Aloclair Plus®）组。第4天后对大鼠背部皮肤组织的苏木精-伊红（hematoxylin–eosin）染色显示，治疗组和对照组均无炎性细胞或肥大细胞的浸润。
**伤口直径**：
应用绿茶提取物纳米乳液和阳性对照物后，口腔黏膜创伤性溃疡的伤口直径见图5。下载高分辨率图像（205KB）和完整尺寸图像。应用绿茶提取物纳米乳液后，治疗组的伤口直径随时间显著减小（根据Tukey检验）。使用Shapiro–Wilk检验测试伤口直径和灌注数据的正态性，p> 0.05表明数据分布为正态分布。Levene's检验显示方差齐性（p> 0.05）。双向方差分析（ANOVA）的结果见表2和表3。
**双向ANOVA测试结果**：
- **组间效应测试**：
- **因变量**：纳米乳液茶对伤口直径的影响（mm）
- **来源**：III型平方和 df 平均平方 FS Sig.
- **校正模型**：15.210a 91.690 30 6.990 0.000
- **截距**：67.822 167.822 123 20.153 0.000
- **组别**：20.000 10.000 0.074 0.792
- **天数**：1 15.139 43.785 687.504 0.000
- **组别×天数**：20.071 40.018 3.205 0.062
- **误差**：0.055 100.006
- **总计**：83.087 20
- **校正后的总计**：15.265 19a R平方 = 0.996（调整后R平方 = 0.993）
- **组间效应测试**：
- **因变量**：纳米乳液茶对灌注的影响（PU）
- **来源**：III型平方和 df 平均平方 FS Sig.
- **校正模型**：1382 398.951a 915 359 9.883 6.732 0.000
- **截距**：608 864 26.128 160 886 426.128 266 8.399 0.000
- **组别**：3 947 20.583 194 720.583 4.151 0.051
- **天数**：3 119 343 8.205 429 835 9.551 13.076 0.000
- **组别×天数**：3 942 40.163 423 560.041 1.033 0.407
- **误差**：684 527.584 302 281 7.586
- **总计**：629 533 52.663 40
- **校正后的总计**：206 692 6.535 39a R平方 = 0.669（调整后R平方 = 0.569）
**讨论**：
植物化学筛选发现，来自印度尼西亚PT Pagilaran的茶提取物中含有黄酮类、皂苷、单宁、萜类、甾醇和生物碱。茶提取物的总酚含量为194.72 mg GAE/g提取物，总黄酮含量为191.67 mg QE/g提取物，这两个值均属于较高水平。这些结果表明，使用该茶提取物制备的制剂富含酚类和黄酮类化合物。几乎相等的酚类和黄酮类含量表明提取物中的酚类成分主要为黄酮类（儿茶素、茶多酚）。
绿茶提取物纳米乳液的稳定性通过在4°C ± 1°C下储存24小时，然后在40°C ± 1°C下储存24小时来测试。物理稳定性测试持续了12天，包括感官特性（颜色、气味和形状）、pH值、涂抹性和均匀性的分析。
**组织学观察**：
应用绿茶提取物纳米乳液和阳性对照物（Aloclair Plus®）4天后，大鼠背部皮肤未出现过敏反应。苏木精–伊红染色显示，治疗组和对照组均无炎症细胞或肥大细胞的浸润。
**结论**：
- 绿茶提取物纳米乳液的稳定性在4°C ± 1°C和40°C ± 1°C下分别储存24小时后仍然稳定。
- FTIR光谱结果显示，绿茶提取物纳米乳液具有典型的芳香酚类特征。
- 粒径分析表明，绿茶提取物纳米乳液的粒径为亚微米级别（中位粒径D50为282 nm）。
- 临床观察显示，应用绿茶提取物纳米乳液和阳性对照物4天后，大鼠背部皮肤无过敏反应。
- 组织学观察和数据分析表明，绿茶提取物纳米乳液对伤口愈合有积极影响。本研究获得的结果支持了先前的发现，即纳米乳液递送系统能够实现脂溶性活性成分的控释和局部保留，这可以减少皮肤细胞直接接触高浓度成分的机会，从而降低刺激的可能性。将活性成分封装在纳米乳液中可以减弱生物活性分子与表皮的接触，减少即时的刺激反应。本研究中制备的茶提取物纳米乳液含有高水平的黄酮类化合物和单宁，这些化合物被认为具有抗炎和抗菌作用。此外，绿茶中的多酚成分，特别是表没食子儿茶素3-没食子酸酯，具有抗炎特性，可能减弱局部炎症反应，从而在局部应用后不会出现明显的刺激或红斑。先前的研究也表明，绿茶提取物中含有大量的儿茶素、黄酮类化合物和单宁。茶叶中的植物化学成分具有抗炎和抗菌作用，可以减少局部炎症信号和微生物对刺激的贡献。茶叶中的EGCG可以调节炎症通路（如NF-κB），抑制促炎细胞因子的产生，并通过减少红斑和白细胞募集来发挥组织保护作用。Aloclair Plus®是一种舒缓性口腔黏膜凝胶，具有公认的耐受性，在本研究中被用作阳性对照。阳性对照组和治疗组获得了相似的临床结果，表明纳米乳液的局部安全性至少与已接受的局部制剂相当。Aloclair Plus由芦荟、透明质酸钠、甘草酸和聚维酮制成，这些成分都被认为具有抗炎作用。在本研究中，我们将局部应用限制在最初的4天内，以专门针对受伤后3-5天内的炎症期。这一设计旨在测试早期抗炎作用是否能够在减少对增殖和重塑过程干扰的同时带来持续的愈合改善。局部治疗每天进行一次，持续四天，以便在黏膜伤口愈合的早期炎症和增殖期集中给药，同时尽量减少重复麻醉和处理带来的压力。选择纳米乳液作为载体是因为其黏附性和控释特性，能够在单次每日应用后延长活性成分的局部停留时间，并保持治疗浓度；因此，预计较短的用药疗程能够产生持续的局部药效，这可以在之后的时间点（第1天、第3天、第5天、第7天和第14天）进行评估。这种设计平衡了伦理考虑、实际可行性以及COX-2调节和血管生成的生物学时机，这两者对伤口收缩至关重要。
两组（阳性对照和治疗组）的伤口平均直径（图5、图6）从第1天到第14天都有所减小，表明在两种条件下伤口都在愈合。几乎在所有观察时间里，治疗组的伤口直径都比对照组小。在早期阶段（第1-3天），治疗组的伤口缩小速度更快，表明绿茶纳米乳液在缩短炎症后期和促进向增殖期过渡方面发挥了作用。在增殖期（第3-7天），第5天和第7天的显著差异进一步证实了使用绿茶制剂可以加速伤口收缩和肉芽组织形成。在重塑期（第7-14天），到第14天时两组伤口都进一步缩小直至闭合。应用茶提取物纳米乳液后伤口闭合的机制可以归因于：（1）茶儿茶素的抗炎作用，例如EGCG，可能减少了促炎细胞因子的表达并降低了中性粒细胞的浸润，从而加速了从炎症期向增殖期的过渡；（2）茶成分的抗氧化作用，保护上皮细胞和成纤维细胞免受氧化损伤，支持细胞增殖和迁移；（3）茶成分（包括黄酮类化合物/单宁）的抗菌作用，减少了阻碍愈合的微生物；（4）使用纳米乳液作为茶成分的载体，可能使得纳米颗粒更好地渗透和保留，同时实现活性成分的控释和更长时间的暴露，从而增强了最初的治疗效果。此前的研究已经证明茶提取物具有抗炎作用，EGCG在伤口愈合过程中起到抗氧化作用。茶儿茶素的应用对活性氧（ROS）具有防护作用，从而加速伤口愈合。茶黄酮也可能具有抗菌作用，有助于伤口闭合。此外，先前的研究表明，茶提取物凝胶可以通过减少炎症细胞（中性粒细胞和巨噬细胞）的数量并增加修复细胞（成牙本质细胞）的数量来减轻牙齿漂白过程中的副作用。茶提取物纳米乳液是有效的纳米颗粒载体，可增强局部渗透和保留效果，同时实现活性成分的控释和更长时间的暴露，从而增强最初的治疗效果。在本研究中，应用茶提取物纳米乳液后伤口直径的减小速度比对照组更快。类似地，先前的研究也证明了纳米乳液作为载体在治疗口腔黏膜创伤性溃疡方面的有效性，例如应用菠萝茎提取物和人类脱落 deciduous 条件培养基（SHED-CM）中的干细胞后的效果。
伤口愈合过程需要血液灌注，以确保伤口部位有足够的氧气和营养物质，促进免疫细胞浸润，并清除废物和渗出物，从而控制愈合的速度和质量。灌注在伤口愈合的每个阶段都起着重要作用。在止血阶段灌注减少，然后在炎症阶段增加，直到增殖阶段达到峰值。在重塑阶段灌注趋于稳定。图7显示，治疗组的颊黏膜伤口灌注量比对照组增加，尤其是在第3天和第5天，表明应用茶提取物纳米乳液在伤口愈合的早期和增殖期增加了局部血流。本研究的结果表明早期血管生成有所增加。第3-5天的灌注峰值与血管生成的激活和新毛细血管的形成一致，这有助于在增殖期期间供应氧气和营养物质。茶纳米乳液促进颊黏膜伤口愈合的机制可以解释如下：（1）茶成分或其生物活性因子可能增加了促血管生成因子（如VEGF和TGF-β）的表达或生物活性，从而加速内皮细胞的募集和增殖；（2）茶提取物纳米乳液的抗炎作用可能调节了微循环，儿茶素（包括EGCG）减少了水肿和微血管淤滞，从而恢复了有效的灌注并促进了组织形成阶段的过渡；（3）纳米乳液配方可能增强了茶提取物活性成分的生物利用度，纳米级尺寸和凝胶基质增强了局部保留和渗透，使活性成分的控释时间延长。本研究的结果与先前的研究一致，这些研究表明茶提取物具有抗炎作用，EGCG在伤口愈合中起到抗氧化作用。茶儿茶素的应用对活性氧具有防护作用，从而加速伤口愈合。茶黄酮也可能具有抗菌作用，有助于伤口闭合。此外，先前的研究表明，茶提取物凝胶可以通过减少炎症细胞（中性粒细胞和巨噬细胞）的数量并增加修复细胞（成牙本质细胞）的数量来减轻牙齿漂白的副作用。茶提取物纳米乳液被认为是有效的纳米颗粒载体，能够提高局部渗透和保留效果，同时实现活性成分的控释和更长时间的暴露，从而增强最初的治疗效果。在本研究中，应用茶提取物纳米乳液后伤口直径的减小速度比对照组更快。类似地，先前的研究也证明了纳米乳液作为载体在治疗口腔黏膜创伤性溃疡方面的有效性，例如应用菠萝茎提取物和人类脱落 deciduous 条件培养基（SHED-CM）中的干细胞后的效果。
伤口愈合过程需要血液灌注，以确保伤口部位有足够的氧气和营养物质，促进免疫细胞浸润，并清除废物和渗出物，从而控制愈合的速度和质量。灌注在伤口愈合的每个阶段都起着重要作用。止血阶段灌注减少，然后在炎症阶段增加，直至增殖阶段达到峰值。在重塑阶段灌注趋于稳定。本研究的结果表明，与对照组相比，治疗组的颊黏膜伤口灌注量有所增加，特别是在第3天和第5天，这表明应用茶提取物纳米乳液在伤口愈合的早期和增殖期增加了局部血流。本研究的结果表明早期血管生成有所增加。第3-5天的灌注峰值与血管生成的激活和新毛细血管的形成一致，这有助于在增殖期期间供应氧气和营养物质。茶纳米乳液促进颊黏膜伤口愈合的机制可以解释为：（1）含有茶成分或其生物活性因子的纳米乳液可能增加了促血管生成因子（如VEGF和TGF-β）的表达或生物活性，从而加速了内皮细胞的募集和增殖；（2）茶提取物纳米乳液的抗炎作用可能调节了微循环，儿茶素（包括EGCG）减少了水肿和微血管淤滞，从而恢复了有效的灌注并促进了组织形成阶段的过渡；（3）纳米乳液配方可能增强了茶提取物活性成分的生物利用度，纳米级尺寸和凝胶基质增强了局部保留和渗透，使活性成分的控释时间延长。本研究的结果与先前的研究一致，这些研究表明茶提取物凝胶可以在使用40%过氧化氢进行牙齿漂白后减少牙髓中的血管数量。我们的结果还得到了先前的研究的支持，这些研究表明局部纳米乳液能够加速伤口模型的再上皮化、肉芽组织形成和血管生成，从而可能在早期和增殖期增加灌注和血管生成。纳米乳液配方可能通过促血管生成机制（如VEGF和TGF-β的表达增加以及内皮细胞的募集）增强了治疗组织的血管化和新毛细血管的生成。
图8和图9显示了治疗组与对照组相比COX-2水平随时间的变化情况。第1天时两组的COX-2水平相似，但到第3天时两组都升高，其中治疗组的水平略高。然后第5天时治疗组的COX-2水平显著下降，第7天时治疗组的水平再次下降。组间和不同时间点之间的显著差异表明治疗组的COX-2介导的炎症得到加速缓解。这一结果表明，受伤后早期的COX-2上调反映了急性炎症反应，这有助于止血和早期细胞募集。第3天COX-2的峰值与促血管生成和增殖事件前的活跃炎症信号一致。第5天治疗组COX-2的显著下降表明炎症提前消退，向增殖阶段转变。第7天治疗组COX-2水平的降低表明炎症消退并进入了组织重塑阶段。本研究的结果与先前的研究一致，这些研究表明茶提取物凝胶在使用40%过氧化氢进行牙齿漂白后可以减少牙髓中的炎症。茶提取物纳米乳液对COX-2表达、灌注和血管生成的影响可以通过以下机制解释：（1）茶提取物中的儿茶素调节炎症和COX-2，特别是EGCG具有抗炎作用，降低了诱导性炎症酶（包括COX-2）的表达，从而加速了从炎症到增殖的过渡并减少了长期的炎症血管通透性；（2）茶提取物纳米乳液的抗炎作用可能调节了微循环，儿茶素减少了水肿和微血管淤滞，恢复了有效的灌注并促进了组织形成阶段的过渡；（3）纳米乳液配方提高了茶提取物活性成分的生物利用度，纳米级颗粒和凝胶基质增强了局部保留和渗透，使活性成分的控释时间延长，从而在关键的早期增殖窗口期内保持了促血管生成刺激。本研究的结果与先前的研究一致，这些研究表明茶提取物凝胶可以在使用40%过氧化氢进行牙齿漂白后减少牙髓中的血管数量。我们的结果还得到了先前的研究支持，这些研究表明局部纳米乳液可以加速伤口模型中的再上皮化、肉芽组织形成和血管生成。纳米乳液配方通过促血管生成机制（如VEGF和TGF-β的表达增加以及内皮细胞的募集）增强了治疗组织的血管化和新毛细血管的生成。
图8和图9展示了治疗组与对照组相比COX-2水平随时间的变化情况。第1天时两组COX-2水平相似，但到第3天时两组都升高，治疗组的水平略高。然后第5天时治疗组的COX-2水平显著下降，第7天时明显降低。组间和不同时间点之间的显著差异与治疗组中COX-2介导的炎症加速消退一致。这一结果表明，受伤后早期的COX-2上调反映了急性炎症反应，这有助于止血和早期细胞募集。第3天COX-2的峰值与促血管生成和增殖事件前的活跃炎症信号一致。第5天治疗组COX-2的显著下降表明炎症提前消退，向增殖阶段转变。第7天治疗组COX-2水平的降低表明炎症消退并进入了组织重塑阶段。本研究的结果与先前的研究一致，这些研究表明茶提取物凝胶在使用40%过氧化氢进行牙齿漂白后可以减少牙髓中的炎症。茶提取物纳米乳液对COX-2表达、灌注和血管生成的影响可以通过以下机制解释：（1）茶提取物中的儿茶素调节了炎症和COX-2，特别是EGCG具有抗炎作用，降低了促炎酶（包括COX-2）的表达，从而加速了从炎症到增殖的过渡；（2）茶提取物纳米乳液的抗炎作用可能调节了微循环，儿茶素减少了水肿和微血管淤滞，从而恢复了有效的灌注并促进了组织形成阶段的过渡；（3）纳米乳液配方提高了茶提取物活性成分的生物利用度，纳米级颗粒和凝胶基质增强了局部保留和渗透，使活性成分的控释时间延长，维持了促血管生成的刺激作用。本研究的结果与先前的研究一致，这些研究表明茶提取物凝胶可以在使用40%过氧化氢进行牙齿漂白后减少牙髓中的血管数量。我们的结果还得到了先前的研究支持，这些研究表明局部纳米乳液可以加速伤口模型中的再上皮化、肉芽组织形成和血管生成。COX-2 产生的 PGE2 具有促进血管生成和炎症的作用，因此暂时性、局部地减弱过度的 COX-2/PGE2 信号传导可能会促进组织的恢复和修复，同时保留愈合所需的早期血管生成信号。未来的研究应该量化组织中的 PGE2 水平、COX-2 酶活性水平以及下游的血管生成介质（如 VEGF），以确认纳米乳剂中的 EGCG 与观察到的组织学和灌注变化之间的机制关联。本研究的结果对于临床开发具有实用性，并有助于根据可持续发展目标（SDG 3“良好的健康与福祉”）改善公共卫生：(1) 更好的口腔黏膜伤口愈合可以减少疼痛、感染风险和功能恢复时间，从而支持个人健康和生活质量；(2) 局部作用、安全且价格合理的剂型（茶提取物纳米乳剂）可以扩大初级和社区医疗服务中有效伤口护理的覆盖范围，符合 SDG 3 的目标，以减少可预防疾病的发病率并确保人们能够获得优质的基本医疗服务；(3) 经验证的安全性（无过敏反应）和加速愈合的效果支持进一步的研究以及将其纳入口腔健康促进计划。目前安全性评估的一个局限性是用于初步过敏反应筛查的样本量较小。虽然这些动物没有出现临床或组织学上的刺激征象，但由于样本量不足，无法排除较少见或延迟的过敏反应。为了解决这个问题，我们将进行后续测试，包括使用空白纳米乳剂作为对照组，并增加每组的样本数量（n = 4–6），同时进行体外刺激和致敏试验。这些额外研究将提供所需的统计功效和相关监管数据，以便在临床应用前全面了解该制剂的局部安全性特征。
**结论**
绿茶纳米乳剂不会引发过敏反应，并通过快速调节炎症和促进血管生成来加速组织修复。结果显示，第 3 天 COX-2 水平达到峰值，随后在第 5 天显著下降，这与灌注量的增加相吻合。这些效应表明，茶提取物纳米乳剂加速了从炎症阶段向增殖阶段的过渡，改善了局部微循环，并可能促进了组织修复。
**伦理批准**
本研究已获得加查马达大学 Soedomo 牙科学院研究伦理委员会的批准（批准函编号：65/UN1/KEP/FKG-RSGM/EC/2025）。
**作者贡献**
JH、IDS 和 NAP 构思并设计了实验，完成了研究工作，提供了研究材料，并收集和组织了数据。JH、RTCT 和 HS 分析和解读了数据。JH、RS、DI 和 PSAR 撰写了文章的初稿和最终稿。所有作者都对最终稿进行了严格审查并给予了认可，对稿件的内容和相似性指数负责。
