靶向 Globo H 的 CAR T 细胞在胃肠道肿瘤模型中的抗肿瘤活性与安全性：CD28 与 41BB 共刺激结构的临床前评估

摘要

背景

嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法已经改变了血液系统恶性肿瘤的治疗方式，但其对实体瘤的疗效仍受到多种限制，其中之一是如何识别能够最大程度降低靶点和非靶点毒性的肿瘤特异性抗原。Globo H是一种与肿瘤相关的糖鞘脂，存在于多种上皮恶性肿瘤中，包括胃肠道癌症，而在正常组织中的表达量很低。我们研究了基于MBr1分子的Globo H特异性CAR T细胞的临床前活性。

方法

使用SFG逆转录病毒载体对健康捐赠者的外周血T细胞进行了基因工程改造，这些载体编码了第二代CAR蛋白，这些CAR蛋白包含一个基于MBr1的单链可变区、一个FLAG标签、一个CD8α铰链区和一个跨膜区，以及一个CD3ζ信号结构域，还可能包含CD28（CAR CD28）或41BB（CAR 41BB）共刺激结构域。在IL-7和IL-15的帮助下进行体外扩增后，对这些T细胞进行了抗原依赖性的细胞毒性、分化和抑制性受体表达等方面的检测，并在多次NCI-N87肿瘤细胞挑战实验中进行了验证。抗肿瘤活性在携带NCI-N87胃癌或OE33食管腺癌细胞异种移植的NSG小鼠模型中进行了评估。

结果

两种CAR构建体都能识别并杀死表达Globo H的肿瘤细胞系，并在多次NCI-N87肿瘤细胞挑战实验中保持了细胞毒性。尽管细胞毒性相当，但两种构建体表现出不同的表型特征：CAR 41BB T细胞主要来源于分化程度较低的细胞群，而CAR CD28 T细胞则表现出更强的效应器细胞分化能力以及更明显的抑制性受体共表达，尤其是在CD4⁺CAR⁺细胞中。CAR 41BB T细胞在NCI-N87和OE33异种移植模型中能够延缓肿瘤生长，且未出现明显的毒性反应。而在NCI-N87模型中，CAR CD28的给药则导致了严重的系统毒性。

结论

这些发现为Globo H靶向CAR T细胞在胃肠道癌症模型中的抗原依赖性抗肿瘤活性提供了临床前证据。虽然基于41BB的CAR构建体表现出良好的表型特征和抗肿瘤活性，且未出现明显的毒性，但基于CD28的构建体所导致的严重系统毒性突显了进一步研究毒性生物学决定因素的必要性。