新型转基因大鼠模型NTac:SD-Oxtem1(cre)Sage的构建与表征：催产素能神经元中Cre重组酶的特异性表达及其在神经科学研究中的应用价值

本研究针对缺乏可靠工具精准操控催产素能神经元的难题，开发了在Sprague-Dawley大鼠催产素(OXT)基因位点插入P2A-Cre序列的转基因模型NTac:SD-Oxtem1(cre)Sage

在神经科学领域，催产素(Oxytocin, OXT)作为一种重要的神经肽，不仅参与分娩、哺乳等生理过程，更在社交行为、焦虑调节、药物成瘾及疼痛调控中发挥关键作用。尽管已有多种动物模型用于研究OXT系统，但能够精准操控催产素能神经元的遗传工具仍显不足，尤其在大鼠模型中更为稀缺。由于大鼠在神经行为学研究（特别是药物自我给药实验）中具有独特优势，开发一种能特异性表达Cre重组酶的OXT基因工程大鼠模型，成为领域内亟待解决的关键问题。

为此，研究团队通过CRISPR-Cas9基因编辑技术，成功构建了NTac:SD-Oxt^em1(cre)Sage转基因大鼠模型。该模型在大鼠OXT基因3'端插入P2A自切割肽序列与Cre重组酶编码区，实现Cre在催产素能神经元中的特异性表达。研究人员采用多重技术验证模型有效性：通过基因分型PCR确认转基因整合；利用病毒载体介导的floxed报告基因表达验证Cre功能活性；采用qRT-PCR和免疫组化分析OXT、血管加压素(AVP)及其受体表达；通过体重监测、旷场实验、5选择序列反应时任务(5CTV)和海洛因自我给药等行为学范式系统评估表型。

研究结果显著：

分子表达特征：转基因大鼠脑区和脊髓中OXT、AVP及其受体mRNA水平与野生型无差异，但免疫组化显示下丘脑室旁核(PVN)和视上核(SON)中OXT免疫反应性降低15-18%，而脊髓中雌性转基因大鼠AVP免疫反应性升高10%。

Cre功能验证：病毒载体介导的floxed tdTomato报告基因在PVN和脊髓中特异性表达，且与OXT免疫标记共定位率达80%；采用floxed caspase3进行神经元消融后，成功实现PVN、脊髓背角和腹外侧导水管周围灰质(vlPAG)中OXT能神经元的特异性削减。

行为表型分析：转基因与野生型大鼠在体重增长、旷场探索活动、注意力表现（5CTV任务中位提示持续时间MCD）及海洛因自我给药的获得、剂量效应曲线和消退阶段均无差异。但在线索诱导的复吸模型中，雄性转基因大鼠的反应显著降低，提示OXT系统可能参与性别特异性的成瘾记忆机制。

该研究的创新性在于首次提供了功能完备的OXT-Cre大鼠模型，并通过多维度数据证实其神经肽表达稳定、行为表型未受显著干扰。模型成功实现了对OXT能神经元的精准标记和操控，为深入研究OXT在疼痛、成瘾、社交等生理病理过程中的神经环路机制提供了不可替代的工具。论文发表于《Neuroscience》，为后续靶向OXT系统的转化研究奠定了坚实基础。