DNGR-1通过F-肌动蛋白锚定抗原机制调控肿瘤免疫编辑
摘要
1型经典树突状细胞（cDC1）在获取并交叉呈献肿瘤抗原以启动CD8+T细胞应答中发挥核心作用。然而，这种抗原呈递是否对特定新抗原具有选择性尚不明确。DNGR-1（CLEC9A）是cDC1表面一种特异性识别死亡细胞暴露的F-肌动蛋白的受体，可促进细胞相关抗原的交叉呈递。本研究通过构建DNGR-1缺陷小鼠模型，结合化学致癌剂诱导的肿瘤发生模型，首次证实DNGR-1依赖的抗原交叉呈递途径通过优先呈递源自突变F-肌动蛋白结合蛋白的新抗原，显著影响肿瘤的免疫原性塑造和免疫编辑进程。
引言
细胞毒性CD8+T细胞的活化在很大程度上依赖于cDC1高效的新抗原交叉呈递和交叉修饰能力。小鼠模型研究表明，cDC1对于免疫原性肿瘤的排斥、过继性T细胞疗法的成功以及免疫检查点抑制剂疗效至关重要。人类癌症数据分析也显示，肿瘤微环境中cDC1的丰度与患者生存期改善及免疫治疗反应呈正相关。DNGR-1作为cDC1的特异性标志物，通过识别死亡细胞暴露的F-肌动蛋白，触发吞噬体破裂，从而促进死亡细胞相关新抗原进入MHC I类分子加工呈递途径。尽管在移植瘤模型中DNGR-1缺陷小鼠仍能控制肿瘤生长，但本研究提出假说：在化学致癌这种长期肿瘤发生过程中，DNGR-1可能通过塑造新抗原景观发挥更重要作用。
结果
DNGR-1缺陷加速化学致癌进程
为评估DNGR-1在天然免疫监视中的作用，研究团队用化学致癌剂3-甲基胆蒽处理野生型、DNGR-1敲除、RAG1敲除（缺乏T、B细胞）及BATF3敲除（缺乏cDC1）小鼠。结果显示，DNGR-1敲除小鼠肿瘤发生时间显著早于野生型，中位时间分别为95天与113天。在氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠诱导的结肠癌模型中，DNGR-1缺陷小鼠也表现出更高肿瘤负荷。这些结果提示DNGR-1是化学诱导肿瘤发展的免疫屏障组成部分。
DNGR-1缺失导致肿瘤免疫原性增强
通过将MCA诱导的原代纤维肉瘤细胞系移植至次级野生型宿主，研究人员发现源自DNGR-1敲除小鼠的肿瘤细胞系中67%可被免疫系统控制/排斥，而野生型来源仅42%被排斥。这种排斥作用依赖于CD8+T细胞，且在BATF3敲除宿主中消失，但在DNGR-1敲除宿主中仍可发生，表明DNGR-1在原发性肿瘤发展过程中塑造免疫原性，但在移植后抗肿瘤免疫中非必需。
突变景观分析揭示F-肌动蛋白结合蛋白新抗原富集
全外显子测序显示，虽然各组间总体肿瘤突变负荷无显著差异，但生物信息学预测发现，与野生型相比，DNGR-1敲除和RAG1敲除来源肿瘤中源自F-肌动蛋白结合蛋白的强新抗原显著富集。作为对照，微管结合蛋白来源新抗原在各组间分布无差异。通过RMA-S MHC I类分子结合实验验证，13个候选肽段中9个确实可与H-2Kb或H-2Db结合。体内免疫实验进一步证实，其中两个肽段能有效诱导CD8+T细胞应答。
F-肌动蛋白锚定抗原增强DNGR-1依赖性交叉呈递
为验证抗原与F-肌动蛋白结合是否促进交叉呈递，研究团队构建了表达OVA模型抗原与F-肌动蛋白结合肽LifeAct或失活突变体的HeLa细胞。体外实验表明，死亡细胞中与F-肌动蛋白锚定的抗原交叉呈递效率显著高于非锚定抗原，且该过程可被DNGR-1阻断抗体完全抑制。使用F-肌动蛋白特异性affimer也得到一致结果。体内免疫实验进一步证实，注射表达LifeAct-OVA的死亡细胞可诱导更强OVA特异性CD8+T细胞扩增，且在分泌型凝胶溶素缺陷小鼠中该差异更为显著。
讨论
本研究通过化学致癌模型证明，cDC1通过DNGR-1介导的交叉呈递途径优先呈递F-肌动蛋白相关新抗原，从而塑造肿瘤免疫编辑格局。这种抗原选择性源于F-肌动蛋白锚定可增强死亡细胞抗原保留及DNGR-1途径呈递效率。值得注意的是，人类癌症中也存在针对突变细胞骨架蛋白的T细胞应答，提示该机制临床相关性。研究结果不仅阐明免疫编辑新机制，也为优化肿瘤疫苗设计提供思路——通过靶向F-肌动蛋白关联抗原可能增强抗肿瘤免疫。
方法
实验使用C57BL/6背景的DNGR-1敲除、RAG1敲除、BATF3敲除及野生型小鼠。通过MCA皮下注射或AOM/DSS肠道给药诱导肿瘤。原代肿瘤细胞系经胶原酶消化建立，接种次级宿主评估免疫原性。全外显子测序采用Twist Mouse Exome panel，突变调用使用Strelka2，新抗原预测通过pVACtools流程完成。体外交叉呈递实验使用Mutu DC细胞系或FLT3L培养的原代cDC1，通过OT-I T细胞IFN-γ分泌评估呈递效率。统计学分析采用R或GraphPad Prism完成，肿瘤生长曲线比较使用双因素ANOVA。
