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为了缩短western blot的时长,Bio-Rad公司近日宣布推出新型的5分钟封闭液 –EveryBlot Blocking Buffer。与市场上的其他封闭液相比,这种产品能够带来更高的信号和更低的背景,从而提高western blot的灵敏度。
Western blot是一个漫长的过程,每一步都显得那么漫长。就封闭而言,人们通常用脱脂奶粉或BSA封闭一小时。若是轻易缩短封闭时间,恐怕会造成高背景,影响实验结果的观察。
为了缩短western blot的时长,Bio-Rad公司近日宣布推出新型的5分钟封闭液 –EveryBlot Blocking Buffer。与市场上的其他封闭液相比,这种产品能够带来更高的信号和更低的背景,从而提高western blot的灵敏度。
以往,在尝试检测新的蛋白靶点时,研究人员通常需要优化多个参数,包括封闭液的使用。比如,有些封闭液适合化学发光检测,有些封闭液适合荧光检测,而还有一些靶点,对封闭液有着特殊的要求。
现在有了EveryBlot,这一切都不是问题了。EveryBlot封闭液适合广泛的靶点,带来了高灵敏度和低背景,适用于化学发光和荧光检测。此外,这种封闭液大大加快了实验进程,能够将以往一小时的封闭时间缩短至五分钟。
据Bio-Rad的产品经理Paul Liu介绍,EveryBlot封闭液适用于所有检测方法,经检验与广泛的蛋白靶点兼容,因此人们在尝试用western blot检测新蛋白时,无需再担心封闭液是否合适。
研究人员曾对比EveryBlot和脱脂奶粉的封闭效果。通过化学发光检测HEK 293细胞中的三个靶点时,他们用脱脂奶粉封闭30分钟,或用EveryBlot封闭5分钟。之后对两张印迹采用相同的处理,并以相同的参数进行成像。结果如下图所示,EveryBlot在化学发光检测中表现出更高的灵敏度和更低的背景。
此外,EveryBlot封闭液也不会干扰磷酸化蛋白的检测。研究人员曾在检测AKT2和EGFR蛋白磷酸化的过程中使用EveryBlot封闭液,结果如下图所示。
EveryBlot封闭液的优点
▪ 5分钟的封闭时间,加快了免疫检测的进程
▪ 带来高信号和低背景,因此灵敏度更高
▪ 防止非特异性结合,从而提高灵敏度
▪ 与各种检测方法以及磷酸化靶点兼容,无需优化
(生物通 薄荷)
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