蛋白检测方法多，NanoDrop 帮忙测

生物通首页 > 今日动态 > 正文

蛋白检测方法多，NanoDrop 帮忙测

时间：2023年11月15日

来源：基因有限公司

编辑推荐：

NanoDrop One/Onec通过应用方法选择和直观的蛋白编辑而获得高质量的结果，同时强大的Acclaro™智能样品检测系统可以提供样品污染信息。

NanoDrop One/One^C

超微量分光光度计NanoDrop One/One^C可以进行准确可重复的蛋白定量。与核酸样品不同，蛋白质的吸收光特性取决于氨基酸组成。

NanoDrop One/One^C通过应用方法选择和直观的蛋白编辑而获得高质量的结果，同时强大的Acclaro™智能样品检测系统可以提供样品污染信息。

蛋白检测界面

常用的蛋白检测方法：

一、A280法

检测280nm处吸收的纯化蛋白质的浓度

●A280法：直接进行纯化蛋白的定量，可从预置的样品类型中选择最合适的消光系数，或可以预先设置并保存样品类型。

●当用A280直接进行蛋白检测时，可以从被污染的蛋白样本中检测到DNA或苯酚的污染物，使检测结果更准确。

可检测的样品类型：

二、A205法

检测205nm处吸收的纯化蛋白质的浓度。

●A205法：对多肽或无色氨酸和酪氨酸的包含肽键的其他蛋白进行定量。

可检测的样品类型：

三、比色法

●比色法：从程序菜单中选择合适的比色方法，如Bradford, BCA, Lowry和Thermo Scientific™ Pierce™ 660 nm Protein Assay。

●比色法蛋白分析需要使用标准曲线。

1. BCA法

●蛋白质BCA法分析采用二辛可宁酸(BCA)作为Cu+的检测试剂，BCA与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混合一起即成为苹果绿，即BCA工作试剂。在碱性条件下，BCA与蛋白质结合时，蛋白质将Cu²⁺还原为Cu⁺，一个Cu⁺螯合二个BCA分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。

对于每个检测的样品标准品，此应用显示可见吸光度光谱和结果摘要。在检测屏幕上向左滑动也可显示标准曲线。

标准曲线以图形显示所选样品的检测标准品、计算的标准曲线，以及检测的吸光度和计算的浓度之间的关系。一条水平线将Y轴上的样品吸光值连接到标准曲线。一条垂直线将该点连接到X轴上的样品吸光值。

R²值表示标准曲线拟合标准品數据点的程度(1.0 表示完美拟合:也就是说，所有的点恰好处于曲线上)

2. Bradford法

●蛋白质Bradford法用考马斯亮蓝(CBB)测定蛋白质含量，属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质一色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0~1000ug/ml,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

Bradford法检测标准曲线界面

3. Lowry 法

●蛋白质Lowry 法根据蛋白质分子中含有的肽键在碱性溶液中与Cu2+螯合形成蛋白质铜复合物，此复合物中的酪氨酸和苯丙氨酸残基使酚试剂的磷钼酸盐磷钨酸盐还原，产生蓝色化合物，该蓝色化合物在波长650nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，根据蛋白样品的吸光度，计算蛋白样品的蛋白质含量。Lowry法可检测的范围是0.2-2mg/ml。

Lowry 法检测标准曲线界面

4. Pierce 660法

●蛋白质Pierce 660法蛋白检测基于酸性条件下具有专利技术的染料金属复合物与蛋白的结合，导致染料吸收最大值（在 660 nm 下测得）的转变。该染料-金属复合物为红褐色，在与蛋白结合后变为绿色。这种颜色的变化是由于染料在低 pH 值时的脱氢导致的，而蛋白内的带正电荷的氨基酸残基和带负电的染料-金属复合物的相互作用促进了这一过程。因此，该染料主要与蛋白中的碱性残基（例如组氨酸、精氨酸和赖氨酸）相互作用，而与酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸相互作用程度相对较小。

Pierce 660法检测标准曲线界面

基因有限公司作为美国Thermo公司中国区授权代理商，为您提供国内NanoDrop系列产品的技术咨询、产品选配、售后培训及维护服务。

基因有限公司成立于1992年，是一家提供生命科学科研仪器、试剂耗材和技术服务的综合服务商。基于“Gene Brightens Every Life•BioTech Connects the World“---“基因燃亮生命•生物技术连接世界”的愿景，专注于生命科学领域前沿技术的引进和推广，致力于推动该领域国内科研机构硬件水平及实验方案的革新与升级。同时，公司也一直致力于自主品牌的科研设备的研发与生产，拥有一系列通用性强、互补性高的自主品牌产品。公司的服务网络遍及全国各地十多个大中城市，拥有包括仪器销售，试剂与耗材销售，市场与技术支持，维修，客服，物流等多个部门组成的完整服务体系。我们希望通过不懈努力，为您的成功铺路搭桥，也为中国的生命科学事业赶超世界先进水平尽一己之力。欲了解更多信息，请访问www.genecompany.cn。