AdipoRon通过AMPK/PPARα信号通路调控脂质代谢缓解LMH细胞脂毒性损伤的机制研究

本研究揭示了AdipoRon通过激活AMPK/PPARα信号通路，调控脂质代谢关键基因表达，缓解混合脂肪酸诱导的LMH细胞脂毒性损伤的作用机制，为禽类脂肪肝疾病的靶向干预提供了新策略。

禽类脂肪肝疾病是家禽生产中常见的代谢性疾病，其特征是肝细胞内脂质过度沉积，导致肝细胞脂肪变性、功能障碍甚至死亡。长期饲喂高能低蛋白日粮、营养不均衡或慢性应激等因素均可导致家禽肝脏脂肪合成增加、脂肪酸氧化减少，引发肝细胞脂质沉积和氧化应激，进而诱发脂肪肝疾病，严重影响家禽健康和生产性能。

为解决禽类脂肪肝疾病的防治问题，沈阳农业大学动物科学与兽医学院的研究团队开展了一项关于AdipoRon（一种脂联素受体激动剂）缓解LMH细胞脂毒性损伤的机制研究。研究人员利用混合脂肪酸（油酸OA+棕榈酸PA）处理LMH细胞建立脂毒性损伤模型，通过CCK-8法检测细胞活力，Oil Red O染色观察脂滴沉积，检测甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）含量以及谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）活性，并采用实时荧光定量PCR、Western blotting和非靶向脂质组学技术，系统探讨了AdipoRon对LMH细胞脂质代谢的调控作用及其分子机制。

研究采用细胞培养、CCK-8细胞活力检测、Oil Red O染色、生化指标检测（TG、TC、GPT、GOT）、实时荧光定量PCR、Western blotting和非靶向脂质组学分析等关键技术方法，其中LMH细胞购自海星生物科技股份有限公司。

混合脂肪酸（OA+PA）诱导LMH细胞脂代谢紊乱和脂毒性损伤

研究首先确定用0.30 mM OA+0.15 mM PA处理LMH细胞24小时可成功建立脂毒性损伤模型。与对照组相比，模型组细胞脂滴沉积显著增加，TG和TC含量显著升高，GPT和GOT活性明显上升，表明混合脂肪酸处理成功诱导了LMH细胞的脂代谢紊乱和细胞损伤。

AdipoRon缓解混合脂肪酸（OA+PA）诱导的LMH细胞脂代谢紊乱和细胞脂毒性损伤

通过CCK-8实验确定AdipoRon的适宜干预浓度为20、40和60 μM。研究发现AdipoRon干预可显著减少LMH细胞中的脂滴沉积，降低TG和TC含量，并降低GPT和GOT活性，其中40 μM AdipoRon干预效果最为显著。

AdipoRon干预对LMH细胞脂代谢相关基因和脂联素调控脂代谢关键信号分子表达的影响

AdipoRon干预显著降低了脂肪酸合成相关基因ACC（乙酰辅酶A羧化酶）、FAS（脂肪酸合酶）、SCD-1（硬脂酰辅酶A去饱和酶-1）和SREBP-1（固醇调节元件结合蛋白-1）的mRNA表达水平，同时提高了脂肪酸β-氧化相关基因ACOX-1（酰基辅酶A氧化酶1）和CPT-1（肉碱棕榈酰转移酶1）的表达。Western blotting结果显示，AdipoRon干预增加了AdipoR1、AdipoR2、AMPK和p-AMPK的蛋白表达水平。

抑制和激活AMPK信号对AdipoRon缓解LMH细胞脂毒性损伤的影响

使用AMPK拮抗剂Compound C和激动剂AICAR进一步验证AMPK信号通路在AdipoRon作用中的关键角色。Compound C处理逆转了AdipoRon对脂质沉积的改善作用，而AICAR则协同增强了AdipoRon的效果，表明AdipoRon主要通过激活AMPK信号通路发挥其保护作用。

抑制和激活AMPK信号对LMH细胞脂质组成的影响

非靶向脂质组学分析显示，混合脂肪酸处理显著增加了鞘脂（如HexCer-NS、HexCer-AP）、甘油磷脂（如PG、PEtOH、PE）和酰基肉碱等脂质分子的水平。AdipoRon干预可逆转这些变化，而Compound C处理则拮抗了AdipoRon的作用，AICAR处理则进一步增强了AdipoRon对脂质代谢的调节作用。KEGG通路富集分析表明，这些差异脂质分子主要富集于鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、脂肪酸转运、PPARα激活基因表达等通路。

研究结论与讨论

本研究系统阐明了AdipoRon通过激活AMPK/PPARα信号通路，调控脂质代谢关键基因表达，减少脂质合成，促进脂肪酸氧化，从而缓解混合脂肪酸诱导的LMH细胞脂毒性损伤的作用机制。AdipoRon通过调节鞘脂、甘油磷脂、酰基肉碱等脂质代谢，降低神经酰胺、鞘磷脂等毒性脂质的积累，维持细胞膜结构完整性和功能稳定性，最终减轻肝细胞损伤。这些发现为基于脂联素及其受体的靶向干预策略防治禽类脂肪肝疾病提供了新的理论依据和实践指导。该研究成果发表在《Poultry Science》期刊，对家禽健康养殖和脂肪肝疾病的防治具有重要意义。