**摘要**
达帕格列氟嗪（Dapagliflozin）是一种钠-葡萄糖共转运蛋白-2（SGLT-2）抑制剂，主要用于通过降低血糖水平来治疗2型糖尿病。除了其抗糖尿病作用外，它还表现出心脏保护和肾脏保护效果，以及抗氧化、抗炎和抗癌活性。将达帕格列氟嗪封装在纳米载体中是一种创新策略，可以改进现有疗法并开发靶向治疗。这种制剂可以提高溶解度和稳定性，增强上皮细胞通透性和生物利用度，并减少潜在的副作用。本研究调查了封装在壳聚糖纳米颗粒中的达帕格列氟嗪在细胞和分子层面的效应，重点关注结肠（Caco-2）细胞。研究结果表明，游离形式的达帕格列氟嗪显著降低了细胞活力，而封装形式则保持了较高的细胞活力。此外，封装后的药物有效降低了活性氧水平，保持了其抗氧化活性。游离形式的达帕格列氟嗪并未增加Nrf2、NFκB或HO-1信号通路的表达。相比之下，封装在壳聚糖纳米颗粒中后，这三个通路的表达均有所增加，表明其可能参与了这些信号机制的调节。
**图解摘要**
达帕格列氟嗪是一种具有抗氧化和抗炎特性的SGLT2抑制剂，被封装在壳聚糖纳米颗粒中以增强对肠道细胞的靶向递送。在Caco-2细胞中，封装形式不仅保持了细胞活力，还降低了活性氧水平，并比游离药物更有效地激活了保护性通路（Nrf2、NFκB、HO-1）。这些结果突显了壳聚糖作为有前景的载体的作用，并表明像达帕格列氟嗪这样的SGLT2抑制剂可能为肠道炎症提供新的治疗方法。
**1. 背景**
纳米技术是在纳米尺度（1–100纳米）上操纵物质的科学，它能够开发出具有独特性质的新材料和设备，在包括医学、电子和能源在内的多个领域具有变革潜力[1]。在生物医学研究中，纳米技术通过纳米制造和高分辨率显微镜等先进技术，促进了纳米结构系统的设计，从而改善了诊断、药物递送和治疗效果[2]。例如，使用纳米颗粒可以通过封装和特殊配方提高生物活性化合物的溶解度、稳定性和生物利用度[3]。其中，壳聚糖纳米颗粒（CNPs）因其良好的生物相容性、生物降解性和亲水性而被广泛使用。CNPs作为药物和基因递送的有效载体，能够实现靶向肿瘤治疗并改善各种给药途径的治疗效果[4]。SGLT2抑制剂（SGLT2i）是一类主要用于治疗2型糖尿病（T2DM）的药物，除了降低血糖水平外，还在保护心血管和肾脏健康方面具有显著优势[5]。SGLT2i通过抑制肾脏中葡萄糖和钠的重吸收发挥作用。从2013年到2017年，美国食品药品监督管理局（FDA）批准了四种SGLT2i（卡格列氟嗪、达帕格列氟嗪、恩格列氟嗪和厄他格列氟嗪）用于管理T2DM。多项临床试验（如EMPA-REG OUTCOME、CANVAS、EMPEROR-Reduced、EMPEROR-Preserved和SOLOIST-WHF）显示，这些药物在糖尿病和非糖尿病人群中都带来了益处[6-10]。最近，科学界通过体外实验和临床前研究，开始探索SGLT2i的额外潜在益处和效应。达帕格列氟嗪是第二种获得FDA批准的SGLT2i，于2014年获得批准，比卡格列氟嗪晚一年。最初，它被批准用于T2DM患者，但现在它是四种可用SGLT2i中唯一一种也被批准用于心血管和肾脏疾病患者。具体来说，2020年，达帕格列氟嗪被批准用于治疗射血分数降低的成人心力衰竭患者，无论是否患有T2DM。近年来，由于科学进步及其多样的治疗效果，人们对达帕格列氟嗪的研究兴趣显著增加。当前的研究正在探讨其在调节炎症、氧化应激和细胞凋亡方面的作用机制，以及其在非糖尿病人群中的潜在益处。因此，达帕格列氟嗪在现代治疗策略中的作用日益受到认可。将纳米颗粒（NPs）与SGLT2i结合是一种有前景的方法，旨在提高治疗效果并减少T2DM管理的不良反应。NPs能够作为药物载体，通过提高溶解度、稳定性、上皮细胞通透性和生物利用度来改善这些药物的药代动力学特性，同时延长半衰期并降低毒性。本研究的目的是调查封装在壳聚糖纳米颗粒（CNPs）中的达帕格列氟嗪在细胞和分子层面的效应，特别关注细胞相容性、上皮细胞反应以及关键信号通路的调节。
**2. 方法**
**2.1 合成含或不含达帕格列氟嗪的壳聚糖纳米颗粒**
壳聚糖纳米颗粒采用离子凝胶化方法合成，使用三聚磷酸钠（TPP）或柠檬酸钠（SC）作为交联剂。在前一种情况下，纳米颗粒的制备方法如Bellou等人所述[13]。简要来说，使用0.2% w/v的壳聚糖溶液（调整至pH 5）作为储备溶液。通过将TPP溶液（2.5 mg/mL，溶于超纯水中）逐滴加入壳聚糖储备溶液中，按照CS:TPP重量比2:1的比例，最终体积为1.4 mL，制备空白壳聚糖纳米颗粒。然后将CS-TPP溶液在1000 rpm和30°C下孵育10分钟。混合物在14,000 rpm下离心20分钟；弃去上清液，沉淀物用超纯水洗涤两次，最后冻干。对于封装达帕格列氟嗪的壳聚糖纳米颗粒的合成，遵循上述方法并进行轻微修改。首先，将达帕格列氟嗪（10 mM，溶于DMSO）加入壳聚糖储备溶液（0.2% w/v）中，使最终达帕格列氟嗪浓度为0.1 mM，总体积为1.4 mL。CS–Dapagliflozin混合物在1000 rpm和30°C下孵育10分钟。随后按照之前的方法添加TPP；但在这种情况下，离心后保留上清液以测定达帕格列氟嗪的封装效率。对于使用柠檬酸钠作为交联剂的壳聚糖纳米颗粒的合成，采用类似的方法[14]。将柠檬酸钠二水合物（7.5 mg/mL，溶于超纯水中）逐滴加入1% w/v的壳聚糖溶液（pH 5）中，按照CS:SC重量比3.3:1的比例，最终体积为1.4 mL。混合物在900 rpm和25°C下孵育30分钟，然后在14,000 rpm下离心20分钟，并按上述方法洗涤两次。对于达帕格列氟嗪的封装，将化合物（100 mM，溶于DMSO）加入壳聚糖溶液中，使最终浓度为2.44 mM，然后在900 rpm和25°C下孵育30分钟，之后加入柠檬酸钠。所有制备的纳米颗粒均在4°C下保存直至使用。为了测定达帕格列氟嗪的封装效率，分别测量达帕格列氟嗪溶液（0.1 mM和2.44 mM，对应CS-TPP和CS-SC纳米颗粒）的初始吸光度以及相应上清液的吸光度（最终吸光度），在275 nm处进行光谱测量。然后根据公式（1）计算达帕格列氟嗪的封装效率（EE %）。
**2.2 细胞**
Caco-2细胞（一种从结直肠腺癌患者结肠组织中分离出的贴壁细胞系，ATCC-HTB-37）在不含丙酮酸钠的营养培养基（Sigma-Aldrich D5796）中培养。细胞在添加了10%胎牛血清（FBS）、1% L-谷氨酰胺和1%青霉素-链霉素的Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）中，在标准培养条件（37°C，5% CO2）下维持。Caco-2细胞被用作肠道上皮屏障的体外验证模型[15]，以评估达帕格列氟嗪制剂的细胞相容性。
**2.3 细胞活力-细胞毒性测定**
使用MTT测定法评估细胞活力。将Caco-2细胞接种在96孔板中（每孔1×10^4个细胞），孵育24小时后，用不同浓度的达帕格列氟嗪及其制剂处理24或48小时。对照组用相当于每个达帕格列氟嗪浓度的二甲基亚砜（DMSO）处理。加入3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯四唑溴化物溶液（MTT——储备溶液3 mg/mL），并在37°C下孵育3小时。随后小心去除上清液，并加入二甲基亚砜（DMSO）以溶解甲酚蓝晶体。使用分光光度计（Infinite 200 Pro，Tecan，瑞士）在540 nm（定量）和690 nm（背景校正）处测量吸光度。根据ISO 10993-5:2009标准，细胞活力超过80%被视为无细胞毒性[16]。
**2.4 克隆形成测定**
为了确保细胞的最佳完整性和功能，将细胞以每孔1×10^3个细胞的密度接种在6孔板中，孵育24小时，然后暴露于不同浓度的达帕格列氟嗪及其制剂中24小时。对照组用相当于每个达帕格列氟嗪浓度的DMSO处理。处理后，弃去上清液，并加入新鲜的培养基。细胞在定期监测和更换培养基的情况下维持12天。用6%（v/v）戊二醛（25%）和0.5%（w/v）结晶紫固定和染色细胞，然后计数存活分数（SF）[17]。
**2.5 流式细胞术**
**2.5.1 活性氧（ROS）的形成**
将Caco-2细胞接种在6孔板中（每孔150×10^3个细胞），孵育3小时以允许细胞粘附。然后用达帕格列氟嗪及其制剂处理24小时。孵育后，去除上清液，用磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤细胞一次。加入胰蛋白酶进行细胞分离，收集细胞并在PBS中离心（3000 rpm，5分钟）。沉淀物重新悬浮在冷的Hanks平衡盐溶液（HBSS）中。为了检测ROS，细胞在黑暗条件下与2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFDA，2.5 μM）一起孵育。如有必要，加入H2O2（0.1 mM）以诱导ROS的产生。30分钟后，加入碘化丙啶（PI）（Biolegend 421,301）（1 mg/mL），并将样品置于冰上直至进行流式细胞术分析（Partec ML，Partec GmbH，德国）。
**2.5.2 细胞凋亡/坏死测定**
将Caco-2细胞接种在12孔板中（每孔5×10^4个细胞），孵育24小时，然后用达帕格列氟嗪及其制剂处理24小时。第二天，收集上清液，并用PBS洗涤孔板。使用胰蛋白酶分离细胞，并用PBS收集细胞。计数细胞以确保每个样本含有恰好1×10^5个细胞。样品离心（3000 rpm，5分钟），然后弃去上清液。沉淀物重新悬浮在100 μL的Annexin V结合缓冲液中（Biolegend 422201）。在黑暗条件下加入Annexin V（Biolegend 640906）和PI（Biolegend 421301）（各5 μg/mL），轻轻涡旋并在室温下孵育15分钟。在流式细胞术分析之前，加入500 μL的Annexin V结合缓冲液和400 μL的PBS。样品置于冰上直至进行流式细胞术分析（Partec ML，Partec GmbH，德国）。
**2.5.3 细胞周期测定**
将Caco-2细胞接种在6孔板中（每孔100×10^3个细胞），孵育24小时，然后用达帕格列氟嗪及其制剂处理24小时。处理后，去除上清液，用PBS洗涤细胞两次。用胰蛋白酶分离细胞，并收集细胞在PBS中。细胞离心（3000 rpm，5分钟），然后沉淀物重新悬浮在冰冷的PBS中，再次离心。然后加入绝对乙醇并涡旋，将沉淀物固定。样品在−20°C下保存至少7天。分析当天，细胞离心，重新悬浮在PBS（950 μL）中，并与PI和RNase（25 μg/mL）一起孵育30分钟，在黑暗条件下。样品置于冰上直至进行流式细胞术分析（Partec ML，Partec GmbH，德国）。
**2.6 西部印迹**
将Caco-2细胞（7.5×10^5个）接种在培养皿中，用达帕格列氟嗪及其制剂处理24小时，然后用PBS洗涤。细胞刮下，收集在冰上，并用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解。裂解液超声处理并离心（14,800 rpm，20分钟，4°C），使用BCA蛋白测定试剂盒（Thermo Fisher Scientific）测定蛋白质浓度。将等量的蛋白质（20–30 μg）与Laemmli缓冲液混合，在100°C下变性4分钟，然后通过SDS-PAGE（180 V，2小时）分离。蛋白质通过湿转移法（200 mA，90分钟，4°C）转移到PVDF膜上，用ponceau S染色，洗涤，并用5% BSA在Tris缓冲盐水中（含Tween 20）封闭（90分钟）。膜在4°C下与针对NF-κB（Cell Signaling Technology 8242）、HO-1（Cell Signaling Technology 43,966）、NRF2（Cell Signaling Technology 12,721）和α-Tubulin（Santa Cruz Biotechnology sc-5286）的一抗孵育过夜。洗涤后，加入HRP结合的二抗（Cell Signaling Technology 7074）在室温下孵育1小时。蛋白质条带是通过增强化学发光（ECL）方法（Bio-Rad 1705061）检测到的，信号强度使用ImageLab软件和ChemiDoc MP成像系统进行分析。
2.7 统计分析
所有数据均以平均值±标准差的形式呈现。平均值之间的统计显著性通过Student's t检验进行评估。p值小于0.05被视为具有统计显著性。
3 结果
3.1 达帕格列净在壳聚糖纳米颗粒中的包封
对于包封达帕格列净的壳聚糖纳米颗粒（CNPsDapa），达帕格列净的包封效率为35%；而对于使用三聚磷酸盐（TPP）作为交联剂的壳聚糖纳米颗粒（TPPCNPsDapa），达帕格列净的包封效率为23%。
3.2 细胞活力
所有纳米颗粒的溶剂均使用1%（w/v）的醋酸。在评估纳米颗粒的细胞毒性之前，首先在Caco-2细胞中对其毒性进行了评估，结果显示24小时和48小时后的细胞活力均超过80%，表明溶剂引起的毒性很小。游离的达帕格列净表现出剂量和时间依赖性的细胞毒性（图1a）。24小时后，200 μg/mL浓度下的细胞活力为76%，而48小时后，从50 μg/mL开始细胞活力下降，分别降至65%和38%。相比之下，CNPs对细胞活力几乎没有影响（图1b），在所有条件下细胞存活率均超过80%，仅在200 μg/mL时降至75%。同样，TPPCNPs也没有显示出显著的细胞毒性，在所有测试浓度下细胞活力均保持在80%以上。达帕格列净在CNPs和TPPCNPs中的包封改变了其细胞毒性特征。这两种制剂（图1d,e）均未表现出剂量或时间依赖性的毒性，在大多数条件下的细胞活力均约为80%。只有在200 μg/mL的TPPCNPsDapa中，48小时后的细胞活力降至70%。
图1：通过MTT测定法显示不同处理浓度对Caco-2细胞活力在24小时和48小时培养后的影响。各个面板对应特定的处理组：(a) 达帕格列净，(b) CNPs，(c) TPPCNPs，(d) CNPs–达帕格列净，(e) TPPCNPs–达帕格列净。细胞活力以相对于未处理对照细胞的百分比表示。数据以独立实验的平均值±标准差的形式呈现。
3.3 Caco-2细胞的克隆形成能力评估
克隆形成测定通过评估测试物质对细胞增殖的影响来评估其长期细胞毒性。壳聚糖纳米颗粒的浓度分别为10 μg/mL、50 μg/mL和100 μg/mL，而达帕格列净的浓度分别为1 μg/mL、10 μg/mL和100 μg/mL。达帕格列净仅在100 μg/mL浓度下显著降低了细胞存活率，使活力下降了50%，而较低浓度则没有影响（图2a）。这些发现与MTT结果一致，表明在高浓度下发生了不可逆的损伤。
3.4 活性氧（ROS）的形成
活性氧水平通过流式细胞术进行评估，使用H2O2作为氧化应激诱导剂。Caco-2细胞暴露于H2O2后，对照组中的ROS水平增加了近20%（p < 0.05）（图3）。游离的达帕格列净在1 μg/mL和2.5 μg/mL浓度下分别降低了ROS 20%和15%（p < 0.05），但在10 μg/mL浓度下ROS水平增加了15%（p < 0.05）。在氧化应激下，1 μg/mL和2.5 μg/mL浓度的达帕格列净分别降低了ROS 12%和6%（p < 0.05），而在10 μg/mL浓度下ROS增加了13%（p < 0.05）（图3a）。10 μg/mL浓度的CNPs降低了ROS 6%，而TPPCNPs的影响可以忽略不计（图3b）。在氧化应激下，两种纳米颗粒都使ROS降低了6%。
3.5 细胞凋亡和坏死分析
流式细胞术使用Annexin V和PI检测细胞凋亡和坏死。游离的达帕格列净（35 μg/mL）使细胞凋亡增加了12%（总凋亡率为20%），但没有引起坏死。65 μg/mL和100 μg/mL浓度的CNPs分别导致了轻微的细胞凋亡增加（3%）和坏死（5%和3%）。CNPsDapa（100 μg/mL）的影响最小，与单独使用CNPs相似（图4a）。
3.6 细胞周期分析
流式细胞术检查了潜在的细胞周期紊乱。在较低浓度下（图5a），游离的达帕格列净（1 μg/mL）使S期减少了4%，G2/M期增加了6%，而CNPs和CNPsDapa的影响较小。在较高浓度下（图5b），CNPsDapa（10 μg/mL）使S期减少了8%，G1/G0期增加了6%，表明其对细胞周期有较大影响。
3.7 西部印迹—信号通路分析
西部印迹检测了Nrf2、p65和HO-1的表达（图6）。达帕格列净、CNPs和CNPsDapa降低了Nrf2的表达，Nrf2通路的激活未发生（图6a），同时HO-1水平保持不变（图6b）。p65保持稳定，除了在CNPsDapa处理下增加了1.5倍（图6c）。相比之下，TPPCNPsDapa处理显著增加了Nrf2的表达（2.4倍，p < 0.05）（图6d），同时HO-1的表达也增加了1.7倍（图6e，p < 0.05），证实了Nrf2介导的抗氧化反应的激活。此外，p65的表达增加了1.7倍（图6f，p < 0.05），表明NF-κB信号通路被调节。
4 讨论
本研究的目的是开发一种用于包封达帕格列净和SGLT2i的系统，并在体外研究其生物学特性，重点关注细胞相容性、上皮反应和相关细胞通路的调节。迄今为止的研究表明，SGLT2i通过调节不同的信号通路有助于减少炎症。此外，它们似乎可以降低氧化应激，调节细胞凋亡——无论是促进还是抑制——并对维持身体的离子平衡有显著贡献[18]。达帕格列净通过调节葡萄糖代谢、细胞凋亡和免疫反应显示出抗癌潜力。它促进胃癌中YAP1的降解[19]，在肾细胞癌中表现出选择性细胞毒性[20]，并在乳腺癌模型中增强细胞凋亡和CD8+ T细胞的活性[21]。研究还表明，达帕格列净可以增强抗氧化通路，降低氧化应激，并调节细胞凋亡，这些共同支持了它在多种健康状况中的作用。达帕格列净激活了Nrf2抗氧化通路，导致神经营养因子水平升高，氧化应激标志物（如丙二醛（MDA）减少[22]。在培养的人类血细胞中，达帕格列净提高了总抗氧化能力（TAC），而没有显著改变总氧化应激（TOS）水平，表明其对氧化损伤具有保护作用[23]。为了提高达帕格列净的治疗效果，已经在不同的疾病模型中探索了各种载体系统以阐明其潜在的分子机制。例如，聚合物包封的达帕格列净已被证明可以通过调节上皮-间充质转化（EMT）通路来减缓糖尿病白内障的进展[24]。此外，与金纳米颗粒共同递送在糖尿病肾病中显示出肾保护作用，这是通过调节特定的microRNAs实现的[25]。还开发了一种介孔二氧化硅纳米颗粒（MSN）系统，用于在心肌梗死模型中靶向递送达帕格列净，促进心脏组织修复[26]。由于其生物相容性、无毒性和可降解性，壳聚糖仍然是用于包封和递送活性药物化合物的非常有前景的聚合物。在结肠靶向药物递送的背景下，壳聚糖的阳离子性质促进了与黏膜表面的强粘附作用，增强了药物在黏膜表面的保留和吸收[27]。多年来，已经开发了许多基于壳聚糖的递送系统，包括交联壳聚糖、化学修饰的壳聚糖颗粒、壳聚糖复合物、壳聚糖涂层材料和其他先进配方[28]。值得注意的是，壳聚糖纳米颗粒已被用于递送多种治疗剂，包括抗癌药物、抗生素、抗糖尿病药物、基因和疫苗疗法、神经药物以及用于伤口愈合的化合物等[29]。研究壳聚糖作为有效药物递送系统在管理糖尿病中的作用主要集中在胰岛素、GLP-1受体激动剂和DPP-4抑制剂上[30]。然而，关于基于壳聚糖的纳米颗粒用于递送SGLT2抑制剂（SGLT2i）的研究仍然有限，只有少数研究涉及empagliflozin和canagliflozin等药物。最近的一项研究表明，直肠给予载有canagliflozin的壳聚糖-透明质酸微球可以缓解大鼠的醋酸诱导的结肠炎。这种效果归因于抑制了炎症标志物（IL-1β、IL-18）并减少了caspase-1的切割，这是通过AMPK磷酸化和下调NF-κB和NLRP3表达实现的[31]。将empaglifloin包封在壳聚糖纳米颗粒中取得了有希望的结果，包括高包封效率（83.8% ± 0.002%）、较高的药物装载量（42.9% ± 0.03%），以及与纯empaglifloin溶液相比显著改善的体外释放曲线。值得注意的是，肠道通透性提高了6.2倍，表明吸收效果更好[32]。此外，Sinha等人开发了载有empaglifloin的壳聚糖-海藻酸盐纳米颗粒，并将其纳入了口腔分散膜中。该配方对A549肺癌细胞的细胞毒性大于游离的empaglifloin。体内研究表明，与游离药物相比，其生物利用度更高，Cmax、t1/2和AUC₀–t值也更高。此外，empaglifloin的通透性相对于参考产品Jardiance提高了近7倍[33]。观察到在包封后，人类结肠细胞系Caco-2的细胞毒性降低，这主要表明在体外具有更好的生物相容性和上皮耐受性，而不是直接增强了治疗效果。包封减少了达帕格列净的细胞凋亡效应，而且NP系统在体外表现出抗氧化活性。TPPCNPsDapa在氧化应激条件下显著降低了ROS。
3.6 细胞周期分析
流式细胞术检查了潜在的细胞周期紊乱。在较低浓度下（图5a），游离的达帕格列净（1 μg/mL）使S期减少了4%，G2/M期增加了6%，而CNPs和CNPsDapa的影响较小。在较高浓度下（图5b），CNPsDapa（10 μg/mL）使S期减少了8%，G1/G0期增加了6%，表明其对细胞周期有较大影响。
3.7 西部印迹—信号通路分析
西部印迹检测了Nrf2、p65和HO-1的表达（图6）。达帕格列净、CNPs和CNPsDapa降低了Nrf2的表达，Nrf2通路的激活未发生（图6a），同时HO-1水平保持不变（图6b）。p65保持稳定，除了在CNPsDapa处理下增加了1.5倍（图6c）。相比之下，TPPCNPsDapa处理显著增加了Nrf2的表达（2.4倍，p < 0.05）（图6d），同时HO-1的表达也增加了1.7倍（图6e，p < 0.05），证实了Nrf2介导的抗氧化反应的激活。此外，p65的表达增加了1.7倍（图6f，p < 0.05），表明NF-κB信号通路被调节。相比之下，CNPSDapa的抗氧化活性并未伴随着Nrf2或HO-1的表达上调，这可能表明存在其他不依赖于Nrf2的抗氧化机制。TPPS壳聚糖包裹的达格列净纳米颗粒能够增加p65的表达，而CNPs则没有这种效果。由于没有评估下游的炎症介质，因此这一变化不能证实TPPCNPsDapa治疗具有抗炎作用。相反，NF-κB的激活可能反映了在这些实验条件下的更广泛的细胞应激反应，这需要进一步研究。此外，蛋白质表达仅在单一时间点（24小时）进行了检测，可能无法完全反映这些通路的动态调控。由于NF-κB的激活通常是短暂且时间依赖的，因此在不同的时间点可能会观察到不同的通路激活模式。因此，对p65表达的变化应考虑到通路激活的时间依赖性。总之，这些发现突显了基于壳聚糖的纳米颗粒递送系统在调节特定细胞信号通路方面的潜力。进一步研究这些差异性的分子反应可能为靶向治疗策略提供见解。总体而言，这种方法表明基于壳聚糖的纳米颗粒系统有可能改善达格列净在体外的细胞相容性和对肠道上皮细胞的反应。然而，还需要进行更多的体外研究来评估肠道药物渗透性，以及体内研究来评估其胃肠道的安全性和有效性。
作者贡献：
概念设计：Yannis V. Simos和Haralambos Stamatis
方法学：Yannis V. Simos和Agni Klonari
验证：Agni Klonari、Antrea-Maria Athinodorou和Konstantinos I. Tsamis
形式分析：Agni Klonari、Eirini Papanikolaou、Anastasia Skonta、Myrto G. Bellou和Yannis V. Simos
研究实施：Agni Klonari、Eirini Papanikolaou、Antrea-Maria Athinodorou、Anastasia Skonta、Myrto G. Bellou和Georgios S. Markopoulos
资源提供：Dimitrios Peschos和Haralambos Stamatis
初稿撰写：Agni Klonari、Lampros Lakkas、Petros Bozidis和Konstantinos I. Tsamis
审稿与编辑：Yannis V. Simos、Lampros Lakkas和Haralambos Stamatis
可视化处理：Agni Klonari和Georgios S. Markopoulos
项目监督：Yannis V. Simos
项目管理：Yannis V. Simos
资金获取：Haralambos Stamatis和Dimitrios Peschos
所有作者均阅读并批准了最终稿件。
致谢：
本文以开放获取（OA）模式发表，得到了HEAL-Link的财政支持。
利益冲突：
作者声明没有利益冲突。
数据可用性声明：
本研究期间生成和/或分析的数据集可应合理要求向通讯作者索取。
打赏
