通过灭菌后处理实现发酵乳酸化后的代谢重编程控制

时间:2026年5月20日
来源:Food Microbiology

编辑推荐:

韩璐|崔丽茹|李梦璐|薛玉玲|何彦楠|刘畅|吴燕|王世杰河北科技大学食品科学与生物学院,中国石家庄,050018摘要杀菌后处理通常用于减轻发酵乳的酸化现象并延长其保质期。传统观点认为,杀菌过程通过完全灭活发酵剂菌株来终止所有代谢活动。然而,通过结合活菌计数、pH值、可滴定酸度、酶

广告
   X   

韩璐|崔丽茹|李梦璐|薛玉玲|何彦楠|刘畅|吴燕|王世杰
河北科技大学食品科学与生物学院,中国石家庄,050018

摘要

杀菌后处理通常用于减轻发酵乳的酸化现象并延长其保质期。传统观点认为,杀菌过程通过完全灭活发酵剂菌株来终止所有代谢活动。然而,通过结合活菌计数、pH值、可滴定酸度、酶活性测定、基于qPCR的基因表达分析以及对对照组和杀菌后处理发酵乳的非靶向代谢组学研究,本研究提出了一个新的机制框架。结果表明,杀菌后处理仅使活菌数量减少了一个数量级(从10^9 CFU/mL降至10^8 CFU/mL),细菌处于亚致死损伤状态而非死亡状态。尽管活菌数量较高,但杀菌后处理样品的pH值显著升高,可滴定酸度显著降低。β-半乳糖苷酶活性在杀菌后处理组中急剧下降,从而不可逆地阻断了乳糖的利用;而乳酸脱氢酶的体外活性没有显著差异,但在体内由于底物限制而受到催化抑制,其转录活性被主动抑制。通过ppGpp积累激活的严格响应机制使代谢转向修复和生存方向,这体现在F0F1-ATP酶和DNA修复基因的表达上调上。同时,代谢组学的“镜像对称性”证实了代谢网络的解耦,其中支链TCA循环、氨基酸合成和磷脂代谢停止,仅剩的糖酵解产生微量乳酸。因此,杀菌后处理通过诱导细菌的亚致死损伤而非消除细菌来缓解发酵乳的酸化现象。这种“高菌数但低代谢活性”的状态在保质期和能量消耗之间提供了最佳平衡,为发酵乳制品生产的工艺优化提供了理论基础。

引言

由于营养价值和健康益处,发酵乳制品(尤其是酸奶)在全球范围内得到了广泛消费者的接受。然而,这些产品面临一个重要的技术挑战,即酸化现象,指的是在冷藏储存过程中残留的发酵剂细菌持续产生乳酸。这一过程导致pH值进一步下降,可滴定酸度增加,从而影响产品质量,表现为过度的酸味、乳清分离、质地缺陷以及益生菌活性的降低(Kr等人,2021年)。因此,酸化现象缩短了发酵乳的保质期,并损害了其感官和功能性。
乳酸菌(LAB)的代谢活动是酸化现象的主要驱动因素。特别是保加利亚乳杆菌,即使在低温下也具有显著的产酸能力,这归功于其强大的酶系统和耐酸生理特性(Streit等人,2008年)。参与乳糖吸收和糖酵解的关键酶,包括β-半乳糖苷酶、乳酸脱氢酶和质子泵F0F1-ATP酶,在冷藏条件下对维持酸的产生起着关键作用(Guan等人,2024年)。β-半乳糖苷酶是一种关键酶,它通过将乳糖水解为半乳糖和葡萄糖直接影响酸化过程。从乳糖中产生的葡萄糖可以通过糖酵解途径转化为丙酮酸,然后通过乳酸脱氢酶生成乳酸,后者是乳酸代谢中的关键酶。F0F1-ATP酶通过排出质子来帮助维持细胞内pH值的稳态,从而在酸性环境中维持代谢活动(Guan等人,2024年)。最近的研究还发现了一些生物标志基因,如铜转运ATP酶(LDB_RS05285)和醛还原酶(LDB_RS00370),这些基因参与酸化过程的调控(Xin等人,2022年;Zhang等人,2021年)。利用转录组学和代谢组学分析进一步阐明了酸化现象的分子机制。Zhang等人(2024年)报告称,超声微应力处理可以下调参与糖酵解、丙酮酸代谢和ABC转运的基因,从而减少酸的产生。代谢组学分析还显示,热超声处理(TS)会影响与CoA生物合成、脂肪酸链延长和氧化磷酸化相关的途径,进一步调节酸化动力学(Zhang等人,2022年)。
为了减轻酸化现象,已经提出了几种策略,包括发酵后的快速冷却(Khan等人,2020年)、低温储存(Tamime和Robinson,2007年)、修改发酵剂菌株组成,以及选择或通过基因工程改造低酸化能力的菌株(Kr等人,2021年)。Ge等人(2024年)发现,将嗜热链球菌保加利亚乳杆菌的接种比例调整为19:1可以有效减少酸化现象,同时保持良好的发酵效果。Settachaimongkon等人(2016年)报告称,添加某些益生菌菌株(如植物乳杆菌 WCFS1)可以通过竞争性相互作用或产生抗菌肽来抑制保加利亚乳杆菌的存活并减轻酸化现象。物理干预措施如杀菌后处理也被用于有效控制酸化现象,包括多种条件:62-65°C下处理15-20秒(Poltronieri和Rossi,2018年)、75-80°C下处理60秒(Alakali等人,2009年)、60°C下处理10-15分钟(Dagher和Ali,1985年)等。在发酵乳行业中,杀菌后处理一直被视为一种关键的热处理步骤,用于彻底灭活微生物以控制酸化现象。然而,这种传统观点基于一个未经验证的假设,即有效抑制酸化现象需要完全消除所有微生物。实际上,细菌细胞处于存活但代谢受损的状态也可能减少杀菌后处理发酵乳的酸化现象。杀菌后处理对发酵乳酸化现象的影响机制仍有待探索。
因此,本研究在21天的储存期间,检测了对照组和杀菌后处理发酵乳的pH值、可滴定酸度、活菌数量、乳酸脱氢酶和β-半乳糖苷酶活性、相关基因表达以及代谢组学变化,以阐明杀菌后处理缓解酸化现象的机制。通过整合多层次数据,本研究旨在为酸化控制提供新的分子机制见解,并为提高发酵乳制品的保质稳定性提供理论支持。

章节片段

发酵乳的制备

从Fonterra Limited(新西兰奥克兰)购买的脱脂奶粉悬浮在无菌水中(10% W/W),并在高温高压(65°C,90 MPa)条件下进行均质化作为培养基。在培养基加热至115°C并保持15分钟后,加入由Junlebao Dairy Group菌株保藏中心提供、由河北伊兰生物技术有限公司制成的L.paracasei N1115菌株粉末,浓度为10^8 CFU/mL,然后冷却至37°C。混合物...

pH值、可滴定酸度和活菌数量

如图1A和图1B所示,储存过程中发酵乳的pH值下降,而可滴定酸度增加。但杀菌后处理样品的pH值显著高于对照组(P<0.05)。如图1C所示,杀菌后处理发酵乳的活菌数量在储存期间约为8.5 log CFU/mL,而对照组约为9.5 log CFU/mL,仅减少了一个数量级。

β-半乳糖苷酶活性和乳酸脱氢酶活性

...

将杀菌后处理从“完全灭活”重新定义为细菌的“亚致死损伤状态”

在消费者和学术界的普遍认知中,杀菌后处理通常等同于“商业无菌”,意味着通过高温处理达到几乎无菌的状态。然而,本研究的实验数据揭示了不同的实际情况。在本研究中,杀菌后处理仅使活菌数量减少了一个数量级,并未实现完全的微生物灭活。表面上看,活菌数量...

结论

总之,本研究阐明了杀菌后处理控制发酵乳酸化现象的机制,主要分为三点:首先,热损伤直接抑制了关键代谢酶(β-半乳糖苷酶和乳酸脱氢酶)的活性,限制了乳酸的产生;其次,诱导的严格响应(ppGpp积累)使细胞代谢从活跃的糖酵解转向生存机制,包括DNA修复...

CRediT作者贡献声明

韩璐:撰写——审稿与编辑,撰写——初稿,资金获取,正式分析,数据管理,概念构思。王世杰:监督,资源提供,项目管理,资金获取,概念构思。吴燕:撰写——审稿与编辑。刘畅:撰写——审稿与编辑,方法学。何彦楠:撰写——审稿与编辑,方法学。薛玉玲:资源提供,正式分析。李梦璐:方法学,正式分析。崔丽茹:撰写——初稿,正式...

Gaspar等人,2007年;Tong等人,2018年。

在准备本工作时,作者使用了Deepseek工具来改进语言表达。使用该工具后,作者对内容进行了必要的审阅和编辑,并对发表文章的内容负全责。

作者声明没有利益冲突。

本工作得到了国家自然科学基金(编号:32272361)、国家乳制品技术创新中心(编号:2023-JSGG-21)以及河北省燕赵黄金人才招聘计划(博士后平台)(编号:B2024005041)的支持。

生物通微信公众号
微信
新浪微博


生物通 版权所有