副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种广泛存在于自然环境中的革兰氏阴性嗜盐细菌,如海水、海底沉积物和各种海产品中[1]。作为一种典型的食源性病原体,它对人类健康构成严重威胁。特别是食用受污染或未煮熟的海产品(如虾、蟹和贝类)可能导致急性胃肠炎,症状包括剧烈腹痛、频繁腹泻、恶心和发热[2]。在严重情况下,还可能引发伤口感染,尤其在免疫系统受损的人群中更为常见,并可能发展为危及生命的败血症[3]。随着全球海产品消费量的增加和水产养殖业的迅速扩张,食品安全问题日益突出[4,5]。因此,监测和控制副溶血性弧菌至关重要。
副溶血性弧菌拥有复杂的毒力机制和调控系统,能够促进其在宿主体内的定植和组织损伤,包括热稳定的直接溶血素(TDH)、TDH相关溶血素(TRH)以及III型分泌系统(T3SS1和T3SS2),这些系统可释放效应蛋白(TDH、TRH、VopV等),从而引发细胞毒性、肠毒性和全身扩散[6],[7],[8]。由于关键的毒力活性(如黏附、定植、膜完整性和运输)与暴露在表面的成分(OMPs)密切相关,因此OMPs(如OmpU、OmpK和OmpA)在水生动物弧菌病疫苗开发中备受关注[9,10]。OMPs位于细胞最外层,同时也是高度免疫原性的细菌成分[5]。其中一些孔蛋白表达量较高,有助于小分子亲水物质的扩散,并参与病原体与宿主的相互作用[11],[12],[13]。
先前的研究表明,OmpC是亚单位疫苗开发和诊断应用的理想候选物。结合反向疫苗学和表面蛋白质组学的综合方法已确定OmpC为副溶血性弧菌中19种相对特异的外膜蛋白之一[14]。此外,来自Litopenaeus vannamei的血蓝蛋白能够识别副溶血性弧菌的OmpC,这表明其在宿主免疫识别中的作用[15]。还有报道指出,Salmonella Typhimurium的OmpC可通过TLR介导的信号通路刺激抗原呈递细胞,从而触发先天免疫反应并促进长期存在的孔蛋白特异性杀菌抗体的产生以及细胞介导的免疫[16]。
尽管有这些发现,但关于OmpC作为副溶血性弧菌亚单位疫苗候选物和诊断抗原的免疫原性和免疫保护潜力的研究仍然有限。本研究旨在进一步评估其表面暴露性和免疫原性。构建了重组OmpC和硫氧还蛋白(TrxA)-OmpC,并在Escherichia coli BL21中表达。通过检测针对不同多糖突变株产生的抗血清与OmpC的结合情况来评估其表面暴露性。用OmpC蛋白免疫BALB/c小鼠后,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)、Western blotting和免疫荧光试验评估了血清与弧菌物种和非弧菌分离株的交叉反应性。使用血清杀菌试验(SBA)评估了OmpC血清的保护效果。