炮制技术在改变植物活性成分的生物利用度方面发挥关键作用。传统炮制理论认为，醋制可增强药用及功能性食品原料香附（Cyperi Rhizoma, CR）的肝靶向效应，但其分子机制尚缺乏系统性解析。本研究结合计算机模拟分子对接与体外实验，探讨醋制对香附活性成分肝脏摄取的影响。顶空气相色谱-质谱（HS-GC–MS）分析证实，醋制香附（VCR）中发生关键化学转化：cyperene转化为cyperotundone。分子对接预测显示，VCR来源的组分尤其是cyperotundone对肝脏转运蛋白具有高亲和力。在人源性HepaRG细胞模型中，超高效液相色谱-三重四极杆质谱（UPLC-QqQ-MS）检测表明，VCR组的细胞内活性成分累积量显著高于生香附（RCR）组。配体垂钓实验验证了VCR组分与肝脏摄取转运蛋白的强结合作用。机制研究表明，VCR及cyperotundone能够上调摄取型转运蛋白有机阴离子转运蛋白2（OAT2），同时抑制外排型转运蛋白多药耐药相关蛋白2（MRP2）。转运蛋白过表达实验进一步确认，OAT2促进细胞摄取，而MRP2限制细胞摄取。综上，醋制通过调控OAT2与MRP2的表达，提高香附活性成分在肝脏的滞留率。这些发现为醋制香附作为护肝功能性食品配料提供了科学依据。
香附（Cyperi Rhizoma）在传统医学与功能性食品领域应用广泛，其醋制工艺被认为可“引药入肝”，增强肝脏靶向性，但这一效应的分子机制长期缺乏现代科学验证。现有研究多集中于香附化学成分的变化，尚未阐明其如何通过肝脏转运蛋白网络调控活性成分的肝组织分布。此外，传统炮制理论的生物学基础与功能性食品开发之间的关联尚未建立。因此，研究人员旨在揭示醋制香附通过调控肝脏转运蛋白增强肝靶向性的分子机制，为其在功能性食品中的应用提供依据。
研究人员采用顶空气相色谱-质谱（HS-GC–MS）鉴定醋制前后挥发性成分变化；利用AutoDock Vina进行分子对接，预测香附活性成分与肝脏转运蛋白的结合能力；通过HepaRG细胞模型结合超高效液相色谱-三重四极杆质谱（UPLC-QqQ-MS）定量分析细胞内成分累积；应用配体垂钓技术验证成分与转运蛋白的直接结合；采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）与蛋白质免疫印迹（Western blot）检测转运蛋白的基因与蛋白表达水平；并通过慢病毒介导的转运蛋白过表达细胞模型验证其功能。
HS-GC–MS结果
醋制后香附中cyperene完全转化为cyperotundone，后者含量较生品提高1.35倍，证实醋制诱导了特征性化学转化。
分子对接结果
七种主要活性成分均能与六种肝脏转运蛋白自发结合。其中cyperotundone、nookatone及α-cyperone对有机阴离子转运蛋白2（OAT2）表现出最强结合能（低于−6 kcal·mol−1），同时cyperotundone与多药耐药相关蛋白2（MRP2）亦具高亲和力。
细胞摄取实验结果
在HepaRG细胞中，VCR组七种活性成分的细胞摄取量均高于RCR组，且在初始4小时内差异最显著，表明醋制增强了成分的肝细胞蓄积。
配体垂钓实验结果
VCR组分与四种摄取转运蛋白的结合率普遍高于RCR组，其中cyperotundone与OAT2、有机阴离子转运多肽1B1（OATP1B1）及OATP1B3的结合差异具有统计学意义（p<0.01）。
qRT-PCR与Western blot结果
VCR及cyperotundone均能显著上调OAT2、OATP1B1、OATP1B3及有机阳离子转运蛋白1（OCT1）的表达，同时下调MRP2及P-糖蛋白（P-gp）的表达，且该调控作用在基因与蛋白水平一致。
细胞转染实验结果
在稳定过表达OAT2与MRP2的HEK293细胞中，VCR及cyperotundone仍能分别上调OAT2与抑制MRP2的表达，证实其对转运蛋白的调控不依赖细胞类型特异性。
讨论部分指出，本研究将传统“醋制入肝”的经验理论转化为分子水平的科学证据，首次揭示醋制通过化学转化生成cyperotundone，进而双重调控OAT2（促进摄取）与MRP2（减少外排）的转运蛋白网络，形成“肝蓄积偏向性”。这一机制不仅解释了醋制香附在疏肝解郁、调节代谢等传统功效上的优势，也为其他植物性功能性食品的炮制工艺优化提供了可借鉴的研究范式。研究同时指出，未来需在动物模型中验证体内肝靶向性，并探索多成分的协同效应。
结论部分翻译：
本研究构建了完整的分子机制框架，验证了“醋制引药入肝”的传统理论。醋制作为关键的化学与生物活化步骤，促使cyperene转化为核心活性成分cyperotundone，后者通过协同上调摄取转运蛋白OAT2与抑制外排转运蛋白MRP2，优化肝脏处置过程，显著提升活性成分的肝内滞留。该机制证明，传统醋制工艺可将原料转化为具有高效肝靶向性的功能性食品配料，为肝脏健康产品的开发提供科学支撑。
