衰老的成纤维细胞通过GCP-2诱导的CREB磷酸化来促进黑色素瘤的进展，这种磷酸化作用增强了糖酵解过程

衰老皮肤成纤维细胞分泌的GCP-2通过激活CREB转录因子，促使黑色素瘤细胞代谢转向糖酵解，抑制氧化磷酸化，从而促进肿瘤生长。抑制GCP-2或CREB或增强TCA代谢可显著抑制肿瘤。

衰老是黑色素瘤进展的最大风险因素。尽管已有研究提出，衰老的皮肤成纤维细胞分泌的某些因子可能对黑色素瘤的进展产生影响，但这些因子的性质及其背后机制仍然不明确。本研究揭示了黑色素瘤进展过程中，衰老成纤维细胞通过释放趋化因子GCP-2，调控黑色素瘤细胞中CREB（cAMP反应元件结合蛋白）的磷酸化，从而增强细胞的防御机制、细胞周期调控和糖酵解相关的基因表达。研究发现，GCP-2在体外实验和老年黑色素瘤患者的皮肤中被过度释放，并且在小鼠黑色素瘤模型中，GCP-2能促进肿瘤的生长和侵袭。通过抑制CREB的磷酸化，可以显著降低肿瘤体积，这表明CREB在黑色素瘤进展中扮演了重要角色。该研究识别出一个由衰老成纤维细胞释放的GCP-2，通过激活CREB，进而影响黑色素瘤细胞的代谢状态，最终驱动黑色素瘤的进展。针对这一轴线的干预措施可能为治疗老年黑色素瘤提供新的方向。

在临床相关性方面，黑色素瘤的厚度是其进展和预后的重要预测指标。本研究发现，随着年龄增长，黑色素瘤的厚度显著增加，这与衰老成纤维细胞的积累密切相关。在老年患者的黑色素瘤组织中，检测到大量p16^Ink4a+/FSP-1⁺衰老成纤维细胞，而年轻患者中则较少。这些细胞的增加可能促进了黑色素瘤的侵袭性，进而影响其临床表现。进一步的实验表明，将A375黑色素瘤细胞与复制性衰老成纤维细胞共同注射到SCID小鼠体内，相较于年轻非衰老成纤维细胞，可以产生更大的肿瘤体积。这表明衰老成纤维细胞在黑色素瘤进展中具有关键作用。

在分子机制层面，GCP-2和ENA-78被发现是衰老成纤维细胞释放的趋化因子，它们通过激活CREB，促进黑色素瘤细胞的迁移和无锚定生长。GCP-2的激活作用比ENA-78更为显著，尤其是在体外和体内实验中，GCP-2的中和抗体能够显著抑制黑色素瘤细胞的迁移能力，而ENA-78的中和抗体则效果较弱。这提示GCP-2在黑色素瘤进展中可能具有更为关键的调控作用。同时，研究还发现，GCP-2能够通过CXCR1和CXCR2受体的信号传导，诱导CREB的磷酸化，从而激活相关基因的表达。这一过程与黑色素瘤细胞的代谢改变密切相关，即从糖酵解向氧化磷酸化转变的抑制。

研究进一步探讨了GCP-2对黑色素瘤细胞代谢的影响。通过蛋白组学分析发现，GCP-2激活的CREB能够增强糖酵解相关蛋白的表达，如Hexokinase I、Lactate Dehydrogenase A（LDHA）、Pyruvate Kinase isoenzyme M2（PKM2）等，同时抑制三羧酸循环（TCA）关键酶如Glutamate Dehydrogenase（GDH）的表达。这表明，GCP-2通过CREB的激活，导致黑色素瘤细胞的代谢模式向糖酵解倾斜，从而促进其生长和侵袭能力。进一步的代谢组学分析支持了这一结论，显示老年黑色素瘤患者中糖酵解中间产物显著增加，而TCA循环代谢物则减少。这表明，在老年患者的黑色素瘤中，代谢状态的改变可能与CREB的激活密切相关。

研究还发现，抑制CREB的磷酸化能够显著减少糖酵解相关基因的表达，并促使黑色素瘤细胞从糖酵解向氧化磷酸化转变。这种转变在体内实验中导致肿瘤体积显著下降，进一步说明CREB在黑色素瘤代谢调控中的核心作用。此外，研究还表明，强制表达TCA循环相关酶如Citrate Synthase（CS）和Fumarate Hydratase（FH）可以显著抑制黑色素瘤的生长，这提示这些酶可能成为潜在的治疗靶点。同时，GCP-2的激活与黑色素瘤的侵袭性密切相关，而抑制GCP-2或其信号通路可能为治疗黑色素瘤提供新的策略。

在治疗策略方面，本研究提出了多个可能的干预方向。首先，针对GCP-2的中和抗体可以有效抑制黑色素瘤的进展。其次，CXCR1和CXCR2受体的抑制剂在其他癌症类型中已被证明具有一定的抗肿瘤效果，因此它们在黑色素瘤治疗中的应用也值得进一步探索。此外，针对CREB的抑制剂可以阻止其激活，从而抑制糖酵解，促进TCA循环，这可能对黑色素瘤的治疗具有重要意义。最后，通过清除衰老成纤维细胞，可以减少其分泌的GCP-2，从而间接抑制黑色素瘤的进展。这些方法可能为老年黑色素瘤患者提供新的治疗选择。

在实验方法上，本研究采用多种技术手段，包括条件培养基（CM）的制备、迁移实验、无锚定生长实验、蛋白组学分析、代谢组学分析以及磷酸激酶分析等。这些方法共同揭示了衰老成纤维细胞与黑色素瘤细胞之间的相互作用机制，特别是GCP-2通过激活CREB对黑色素瘤细胞的代谢和侵袭能力的影响。实验中还使用了SCID小鼠模型，以模拟人类黑色素瘤的进展过程，并评估不同处理方式对肿瘤生长的影响。

本研究的发现不仅揭示了黑色素瘤进展的新机制，也为开发新的治疗策略提供了理论依据。衰老成纤维细胞释放的GCP-2通过激活CREB，调控黑色素瘤细胞的代谢状态，从而促进其生长和侵袭。抑制这一信号通路可能有效降低黑色素瘤的进展风险。此外，研究还指出，针对TCA循环相关酶的过表达可以逆转GCP-2诱导的代谢改变，从而抑制黑色素瘤的生长。这些结果表明，调控黑色素瘤细胞的代谢状态可能是治疗黑色素瘤的重要方向。

综上所述，本研究通过多方面的实验验证，揭示了衰老成纤维细胞在黑色素瘤进展中的关键作用。GCP-2作为其分泌的趋化因子，通过激活CREB，导致黑色素瘤细胞的代谢状态发生显著变化，从而促进其生长和侵袭。这一机制为理解黑色素瘤的生物学特性提供了新的视角，并为开发针对老年患者的个性化治疗策略奠定了基础。未来的研究可以进一步探索GCP-2和CREB信号通路的具体作用机制，以及其在其他癌症类型中的潜在应用价值。同时，开发针对这些通路的靶向药物和治疗方法，可能为改善老年黑色素瘤患者的预后提供新的希望。