弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）作为非霍奇金淋巴瘤中最具侵袭性的亚型之一，标准R-CHOP方案治疗后仍有约三分之一患者面临复发或耐药困境。这种治疗困境背后，与肿瘤细胞内异常激活的NF-κB和Notch信号通路密切相关。近年来，靶向蛋白质泛素化修饰已成为肿瘤治疗的新方向，而去泛素化酶（DUBs）如何调控DLBCL的恶性进展仍是一片待探索的领域。在这项发表于《Cell Death and Disease》的研究中，作者团队发现USP13在DLBCL组织及细胞系中异常高表达且与疾病分期正相关。通过LC-MS/MS蛋白质组学分析结合AlphaFold3结构预测，首次揭示Ran GTPase（Ran）是USP13的作用底物。实验证实USP13与Ran在胞浆内相互作用，并通过削减K11连接的多聚泛素化链稳定Ran蛋白水平。当使用USP13特异性抑制剂Spautin-1处理后，Ran蛋白通过蛋白酶体途径被加速降解。研究人员进一步通过RNA测序发现，Spautin-1处理可显著抑制Notch和NF-κB通路关键基因（如HES1、BIRC3等）的表达。基于DRESIS数据库提示，这两条通路正是DLBCL对阿霉素（Dox）和环磷酰胺（CTX）产生耐药的关键机制。由此提出假设：Spautin-1可能与传统化疗药物具有协同效应。后续实验证实，Spautin-1与Dox或CTX联用可显著降低DLBCL细胞活力，且联合用药指数（CI）均小于1，证明协同作用成立。在机制层面，该研究突破性地发现Spautin-1可通过诱发铁死亡增强化疗敏感性。透射电镜显示药物联用导致线粒体嵴减少、外膜破裂等典型铁死亡形态特征；同时检测到活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）水平升高，谷胱甘肽（GSH）含量下降，脂质过氧化（LPO）终产物积累。在DLBCL移植瘤模型中，Spautin-1与化疗药联用可显著抑制肿瘤生长，且免疫组化显示瘤体内增殖标志物Ki-67下降而铁死亡相关蛋白NQO1/ALOX12表达改变。关键技术方法包括：利用LC-MS/MS进行蛋白质互作组学分析；通过Co-IP和体外泛素化实验验证USP13对Ran的去泛素化作用；采用RNA-seq及GSEA富集分析下游通路；借助透射电镜观察线粒体超微结构；通过异种移植瘤模型评估体内药效；使用患者组织样本（来源：重庆大学附属肿瘤医院）进行免疫组化验证。USP13与Ran在DLBCL中的致癌关联生物信息学分析显示USP13与Ran在DLBCL样本中存在基因组共扩增，免疫共沉淀证实二者在胞浆内直接结合。USP13过表达可延长Ran蛋白半衰期，而其酶活缺失突变体（C345A）则丧失该功能。USP13调控Ran蛋白泛素化修饰Spautin-1处理可诱导Ran发生K11连接的多聚泛素化，蛋白酶体抑制剂MG132能逆转该降解过程。USP13主要抑制Ran的K11泛素化链生成，而对K48链影响较小。Spautin-1通过Notch/NF-κB通路协同化疗转录组学分析揭示Spautin-1显著下调Notch1、HES1及NF-κB通路基因表达。体外实验证实Spautin-1与Dox/CTX联用可降低IC50值，USP13基因敲低同样增强化疗药物敏感性。铁死亡诱导是协同治疗的核心机制药物联用引发典型铁死亡特征：线粒体膜电位（ΔΨm）崩溃、GSH耗竭、ROS爆发及LPO积累。铁死亡抑制剂Fer-1可部分逆转Spautin-1引起的死亡效应。该研究不仅首次阐明USP13-Ran轴在DLBCL中的调控机制，更创新性地提出Spautin-1联合化疗通过铁死亡途径克服耐药性的治疗策略。值得注意的是，联合用药在动物模型中未引起心、肝、肾等主要器官的明显毒性，为临床转化提供了安全性依据。这项研究为DLBCL的精准治疗提供了新的靶点组合和理论支撑，有望改善当前R-CHOP方案的疗效瓶颈。
