Abstract
本研究通过多组学方法系统评估蒙古医温针（MMWA）在慢性不可预见性温和应激（CUMS）大鼠模型中的抗抑郁样作用及其对肠道菌群-代谢物-屏障轴的调控机制。研究将27只SD大鼠随机分为对照组、CUMS组和MMWA组，通过糖偏好实验、旷场实验和Morris水迷宫进行行为学评估，并采用16S rRNA测序、UPLC-MS/MS代谢组学、qRT-PCR和Western blotting技术分析肠道菌群、粪便代谢物和肠道屏障标志物。结果显示MMWA显著改善CUMS诱导的蔗糖偏好降低（p < 0.01）、自主活动减少（p < 0.01）和逃避潜伏期延长（p < 0.05）等行为缺陷。同时，MMWA恢复肠道微生物α多样性，增加乳酸杆菌（Lactobacillus）和普雷沃菌（Prevotella）等短链脂肪酸（SCFA）产生菌丰度（p < 0.05），逆转牛磺酸（taurine）和精氨酸（arginine）等神经活性代谢物水平（调整后p < 0.05），并上调闭锁蛋白（Occludin）、紧密连接蛋白1（TJP1/ZO-1）和闭合蛋白4（Claudin-4）的表达（p < 0.001）。研究表明MMWA通过重塑肠道菌群-代谢物-屏障轴发挥抗抑郁作用。
Introduction
抑郁症作为一种复杂的神经精神疾病，全球患病人数超过3亿，给社会带来沉重负担。CUMS模型通过长期、低强度且不可预知的应激模拟人类抑郁症的核心特征，包括快感缺乏和认知功能障碍。近年研究发现，抑郁症的发病机制与肠-脑轴的双向调节密切相关，肠道菌群失调可通过破坏肠道屏障完整性、诱发系统性炎症和代谢紊乱等途径影响大脑功能。其中，微生物衍生的短链脂肪酸（SCFAs）、色氨酸代谢物和胆汁酸等代谢产物通过神经、免疫和内分泌途径调节神经炎症和神经递质合成。蒙古医温针作为传统外治疗法，以"三根平衡"和"赫依调节"理论为基础，通过加热银针刺激特定穴位调节机体功能。临床研究表明MMWA对失眠、神经衰弱等应激相关疾病具有改善作用，但其抗抑郁机制，特别是对肠道菌群-代谢物-屏障轴的调控尚未系统阐明。
Materials and Methods
动物与实验设计
27只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、CUMS组和MMWA组（n=9）。CUMS组接受10周不可预知温和应激（包括倾斜笼具、冷水游泳等），MMWA组在CUMS基础上于定慧穴等六个穴位进行每日1次、每次20分钟的40°C温针干预。
行为学测试
于建模前后进行旷场实验（记录运动距离和站立次数）、糖偏好实验（计算蔗糖偏好百分比）和Morris水迷宫测试（评估空间学习记忆能力）。
微生物与代谢物分析
收集粪便样本进行16S rRNA基因V3-V4区测序，使用QIIME2分析菌群α多样性（Chao1、Shannon指数等）和β多样性（UniFrac距离），并通过LEfSe识别差异菌群。采用UPLC-MS/MS非靶向代谢组学分析粪便代谢物，通过PCA和OPLS-DA模型筛选差异代谢物（|log2FC|>1且调整后p<0.05），并进行KEGG通路富集分析。
分子生物学检测
取结肠组织通过qRT-PCR和Western blotting检测紧密连接蛋白（Occludin、TJP1/ZO-1、Claudin-4）和组氨酸代谢酶（HAL、HDC）的mRNA和蛋白表达水平。
统计分析
使用SPSS 26.0和GraphPad Prism 9.0进行统计分析，符合正态分布的数据采用单因素方差分析（ANOVA）结合Tukey事后检验，非参数数据采用Kruskal-Wallis检验，菌群β多样性采用PERMANOVA分析。
Results
温针改善CUMS大鼠抑郁样行为及认知功能
CUMS大鼠体重增长减缓、蔗糖偏好显著降低（p<0.01），旷场实验中的运动距离和站立次数减少，Morris水迷宫逃避潜伏期延长且平台穿越次数减少（p<0.05）。MMWA干预后上述行为指标均得到显著改善（p<0.05），效应量（partial η2）为0.41–0.58。
温针恢复肠道菌群多样性及组成
CUMS组肠道菌群α多样性指数（Chao1、Shannon等）显著降低（p<0.05），MMWA干预后得以恢复。在门水平，CUMS组变形菌门（Proteobacteria）丰度升高而厚壁菌门（Firmicutes）降低，MMWA部分逆转这一趋势。属水平上，CUMS组有益菌如乳酸杆菌（Lactobacillus）和普雷沃菌（Prevotella）减少，潜在致病菌如埃希氏菌-志贺氏菌（Escherichia-Shigella）增加，MMWA促进有益菌恢复。
菌群功能预测与代谢物变化
LEfSe分析显示CUMS组富集弯曲菌科（Campylobacteraceae）等致病菌，MMWA组则增加普雷沃菌科（Prevotellaceae）等共生菌。PICRUSt2功能预测表明MMWA将菌群功能从发酵、异养代谢转向硫化合物呼吸等有益途径。代谢组学发现CUMS组有209种代谢物发生改变，MMWA逆转其中26种，主要涉及氨基酸代谢和胆汁酸相关通路。
关键代谢物与菌群-代谢物关联分析
维恩图识别出8个在CUMS中异常且经MMWA恢复的核心代谢物，包括牛磺酸（taurine）、烟酰胺（nicotinamide）和精氨酸（arginine）等。Spearman相关分析显示乳酸杆菌（Lactobacillus）等有益菌与这些神经保护性代谢物呈正相关，而链球菌（Streptococcus）等潜在致病菌呈负相关。
温针增强肠道屏障并抑制组氨酸代谢
CUMS组结肠组织中Occludin、TJP1/ZO-1和Claudin-4的mRNA和蛋白表达显著下调（p<0.05），组氨酸代谢酶HAL和HDC表达上调（p<0.05）。MMWA干预后紧密连接蛋白表达恢复（p<0.001），组氨酸代谢酶受到抑制。
Discussion
本研究首次整合行为学、微生物组学、代谢组学和分子生物学证据，阐明MMWA通过调节肠道菌群-代谢物-屏障轴发挥抗抑郁作用的机制。MMWA恢复肠道菌群平衡，促进SCFA产生菌增殖，逆转神经活性代谢物紊乱，并增强肠道屏障功能，抑制组氨酸代谢相关炎症。这些发现将传统蒙古医理论与现代肠-脑轴研究相结合，为MMWA的临床应用提供科学依据。研究局限性包括仅使用雄性大鼠、样本量较小以及未通过粪菌移植等实验验证因果关联，未来需扩大样本并深入探讨TLR4/NF-κB等信号通路。
Conclusion
MMWA可通过重塑CUMS大鼠肠道菌群结构、纠正代谢紊乱、修复肠道屏障功能而改善抑郁样行为，其作用可能与调节菌群-代谢物-屏障轴相关。
