近年来，CAR-T（嵌合抗原受体T细胞）疗法在血液肿瘤治疗中展现出显著疗效，但其临床应用仍面临两大瓶颈：一是传统扩增技术易导致T细胞耗竭，影响体内持久性；二是磁珠分离等复杂工艺限制了规模化生产。目前主流的人工抗原呈递细胞（aAPC）平台（如Dynabeads™）虽能有效激活T细胞，但其微米级尺寸和持续强信号刺激可能引发T细胞功能衰退。
为解决这一难题，丹麦技术大学联合莱布尼茨免疫治疗研究所的团队在《Nature Communications》发表研究，开发了一种基于葡聚糖的纳米级T细胞扩增平台T-Expand。该平台通过点击化学将抗CD3/CD28抗体高密度偶联至可生物降解的葡聚糖纳米颗粒表面，形成粒径约150纳米的仿生激活系统。研究显示，T-Expand不仅能实现与商用磁珠相当的扩增效率，更可显著降低PD-1+LAG-3+耗竭T细胞比例，并促进CD27+CD28+记忆性T细胞生成。在淋巴瘤小鼠模型中，T-Expand制备的CD19 CAR-T细胞仅需传统方法1/4的剂量即可完全清除肿瘤，且表现出更强的长期持久性。
关键技术方法
研究通过双乳化法制备叠氮化葡聚糖纳米颗粒，利用点击化学定向偶联DBCO修饰的抗CD3/CD28抗体；采用纳米颗粒追踪分析（NTA）、冷冻电镜（cryo-TEM）表征材料特性；通过流式细胞术评估T细胞表型；利用Incucyte实时成像系统分析体外杀伤效能；在免疫缺陷鼠（NXG）淋巴瘤模型中验证体内疗效；通过RNA测序（RNA-seq）解析转录组差异。
研究结果
1. T-Expand的特性表征
纳米颗粒表面抗体负载量达18.2 μg/mg，粒径分布均匀（173±37 nm）。与Dynabeads™相比，T-Expand的刺激活性在6天后自然衰减，避免过度激活。共聚焦成像显示，T-Expand可诱导Jurkat细胞形成多中心溶酶体颗粒簇，提示其能多位点激活T细胞。
2. CAR-T细胞的体外功能优势
T-Expand扩增的CAR-T细胞中效应记忆T细胞（TEM）占比提升至35-50%，连续三次再刺激后仍保持70%以上存活率。在低效靶比（1:10）条件下，其对Jeko-1淋巴瘤细胞的杀伤率显著高于Dynabeads™组（p<0.01）。
3. 体内抗肿瘤效能突破
小鼠实验表明，0.25×106剂量的T-Expand CAR-T细胞即可实现肿瘤完全清除，而传统方法即使用1×106剂量仍出现复发。脾脏内CD4+T细胞比例及骨髓中CD137+激活标志物表达均显著升高。
4. 转录组机制揭示
RNA测序发现T-Expand组高表达颗粒酶A（GZMA）、干扰素-γ（IFN-γ）等效应分子，以及CCR5、CXCL9等趋化因子相关基因，提示其具有更强的免疫细胞招募能力。基因集富集分析（GSEA）显示Th2/Th17细胞因子通路显著激活。
结论与展望
T-Expand通过纳米级尺寸效应和可控刺激动力学，解决了传统aAPC平台导致的T细胞耗竭问题。其生物可降解特性简化了生产工艺，而赋予CAR-T细胞年轻化表型的能力为实体瘤治疗提供了新思路。尽管研究中未观察到细胞因子释放综合征（CRS）风险，但在免疫健全模型中的安全性仍需进一步验证。该技术为下一代CAR-T疗法的高效、标准化制造奠定了坚实基础。
