纤维蛋白纳米纤维与金纳米颗粒复合材料,用于可穿戴的左旋多巴微针传感器

时间:2026年2月7日
来源:International Journal of Biological Macromolecules

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丝绸纤维蛋白纳米纤维与金纳米粒子复合物集成到3D打印微针贴片中,通过颜色变化实时监测帕金森病患者间质液中左旋多巴浓度,验证了机械法制备FNF的可持续性及其作为可穿戴生物传感器的应用潜力。

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Kelcilene B.R. Teodoro | Francisco V. dos Santos | Pedro R.A. Oiticica | Ana Laura Martins Mulkson Alves | Sérgio A. Yoshioka | Daniel S. Correa
纳米农业国家实验室(LNNA),Embrapa仪器部门,圣卡洛斯,13560-970,SP,巴西

摘要

丝素(SF)是蚕茧分层结构的关键成分,可以通过机械方法加工成丝素纳米纤维(FNF)。这种尚未充分探索的途径能够实现快速、可持续且可扩展的FNF生产方式,无需依赖有机溶剂或昂贵的化学物质。在本研究中,我们将通过机械分解获得的FNF与金纳米颗粒(AuNPs)结合,制备出FNF@AuNP纳米杂化物,并将其集成到可穿戴微针贴片中,用于比色监测左旋多巴(PD管理的重要药物)的浓度。该方法展示了嵌入3D打印设备中的生物基薄膜作为即时护理可穿戴传感器的潜力,允许用户操作并实时评估慢性疾病状况。具体而言,当与3D打印微针(MN)平台结合使用时,FNF@AuNP薄膜可作为间质液(ISF)中高浓度左旋多巴的比色指示剂。使用辅助纸盘进行分析时,颜色变化更为明显。比色研究结合了图像处理技术,数据分析通过交互式文档映射(IDMAP)进行可视化。在模拟的间质液中,当左旋多巴浓度超过50 μM时,该比色方法成功检测到了其存在,并具有所需的选择性。鉴于亚治疗剂量和过量剂量都可能加重运动症状,所提出的基于FNF@AuNP的可穿戴传感器为PD治疗中的剂量管理提供了有前景的策略,使患者能够获得第一线的个性化反馈。

引言

丝素(SF)是从蚕茧中提取的天然蛋白质,是一种有前途的生物聚合物,可用于开发绿色和可持续的设备。蚕茧主要由两种蛋白质组成(见图1(A):[1]丝素,一种负责结构完整性的纤维蛋白;[2]丝胶蛋白,一种起到粘合丝素纤维作用的球状蛋白。丝素在生物医学领域具有重要意义,应用于感染治疗、药物递送[2]、伤口敷料[3]和传感器[4]。特别是由于其机械柔韧性、柔软性和生物相容性[5],丝素被用于模仿生物组织的可穿戴传感器研究。此外,经过适当纯化和灭菌后,丝素的细胞相容性与其他常见生物材料(如聚乳酸和胶原蛋白)相似[6]。此外,丝素含有羧基、酰胺基、羟基、酪氨酸基和巯基等化学基团,这些基团有利于生物识别元素的固定。因此,丝素可作为酶、抗体和核酸固定的有效载体,提高传感器的特异性和灵敏度[4]。
将丝素与活性材料(如碳基材料[7]、导电聚合物[8]和金纳米颗粒(AuNP)[9]结合,产生了有前景的传感器架构。在各种基于丝素的结构中,丝素纳米结构因其高表面积、多孔性和易于功能化而受到关注。丝素纳米结构与AuNPs的纳米杂化物特别适合用于生物传感器[10],因为它们具有由AuNP表面等离子体共振(SPR)产生的光学特性,这些特性可以通过控制颗粒大小和形状来调节[10],并且丝素纳米结构可以作为AuNP和生物分子适当分散和固定的支撑[9]。静电纺丝是最常用的制备丝素纳米结构的技术之一[3],[8],但它需要使用有机溶剂溶解丝素,且涉及昂贵的试剂和耗时的步骤。相比之下,采用机械分解的方法(如制备纤维素纳米纤维的方法)可以更快、更可持续地获得FNF(见图1(A)[11]。最近的研究表明,通过机械研磨蚕茧生产FNF是可行的,这种方法已用于制造具有优异性能的纳米纸,适用于高级应用[12]、[13]、[14]。
鉴于丝素纳米结构的多功能性和生物功能性,将其集成到可穿戴传感平台中是开发亲肤诊断工具的有希望的方向。将丝素等生物聚合物纳入可穿戴传感器中,可以提高皮肤的兼容性和整体舒适度[15]。在各种可穿戴技术中,基于微针(MN)的传感器已成为即时护理(POC)诊断的有效工具,能够实现微创的生物标志物检测[16]、[17]。增材制造技术(如3D打印)促进了基于MN的可穿戴传感器的快速原型设计和集成[18],改善了采样和微型化识别[19]、[20],如图1(C)所示。
帕金森病(PD)是一种进行性神经退行性疾病,其特征是黑质中的多巴胺能神经元丧失,导致多巴胺产量减少,从而引发运动迟缓和震颤等症状[21]、[22]。虽然目前尚无治愈PD的方法,但使用左旋多巴(L-dopa)仍然是最有效的治疗手段[21]、[22]。然而,患者对左旋多巴的反应因年龄、疾病阶段和治疗方案等因素而异[22]、[23]。此外,亚治疗剂量可能导致帕金森症状复发,而过量剂量则会引起运动障碍,这些都会影响对患者状况的解读[24]、[25]。因此,开发用于实时监测汗液[26]和间质液(ISF)[20]中左旋多巴水平的精确和准确设备非常重要,以便个性化剂量,降低副作用风险。
基于微针的传感器提供了一种微创的方式来采集ISF样本,但在提取足够液体和实现准确测量方面仍存在挑战。可膨胀水凝胶微针和中空微针阵列等进步改善了ISF采样和与电化学传感系统的集成。尽管大多数基于微针的左旋多巴传感器使用电化学转换,但人们对光学和比色方法也越来越感兴趣。
与用于检测左旋多巴的电化学微针平台相比,比色系统在阵列制造和操作简便性以及用户自主性方面具有优势。电化学传感器通常需要有线电位计、电极、导电涂层、外部电源和经验丰富的人员来操作,这增加了制造的复杂性和成本。相比之下,比色平台无需电气组件和外部电源,有时甚至可以使用更经济的光谱仪器进行肉眼检测。然而,用于左旋多巴的比色传感器在将液相[27]、[28]转换为固体可穿戴格式方面仍面临困难。在此,我们展示了一种基于FNF和AuNP纳米结构薄膜的可穿戴比色传感器,该传感器集成到了3D打印的微针平台上,用于检测左旋多巴,如图1(D)所示。首先,使用紫外-可见光谱法在水溶液中表征了FNF@AuNP的传感性能,以确定其动态范围、选择性和传感机制。然后,将FNF@AuNP薄膜应用于微针上,并使用辅助纸盘和图像处理技术评估其对左旋多巴的比色响应。

材料

本研究中使用的Bombyx mori蚕茧由Bratac Seda公司(Bastos,SP)慷慨提供。无水碳酸钠(Na2CO3)从Vetec购买。四氯金(III)酸二水合物(NaAuCl4·2H2O)、酪氨酸酶、抗坏血酸(C6H8O6)和葡萄糖(C6H12O6)从Sigma-Aldrich购买。柠檬酸三钠二水合物(Na3C6H5O7·2H2O)、异丙醇和尿素从Synth购买。Prizma 3D Bio Guide光固化树脂来自MakertechLabs 3D解决方案

基于丝素材料的表征

通过电子显微镜技术研究了丝素在机械纤维化前(样品DF)和纤维化后(样品FNF)的形态,每个样品的代表性区域的显微照片见图S3。图S3(A)展示了起始材料(DF)的形态特征,其中纤维直径为11.5 ± 2 μm。图S3(B)和(C)中的STEM显微照片显示了机械纤维化后获得的纳米纤维(样品FNF)

结论

本研究开发了一种创新方法,用于合成丝素纳米纤维和金纳米颗粒纳米杂化物(FNF@AuNP),并将其与3D打印微针平台集成,用于比色检测间质液中的左旋多巴水平。所提出的方法在将酪氨酸酶固定在FNF@AuNP中方面表现出高效率,能够在广泛的浓度范围内实现由左旋多巴引起的光学变化。该传感器的性能在水溶液中得到了验证

CRediT作者贡献声明

Kelcilene B.R. Teodoro:撰写——原始草稿、可视化、验证、方法论、研究、数据分析、概念化。Francisco V. dos Santos:撰写——原始草稿、可视化、验证、方法论、研究、数据分析、概念化。Pedro R.A. Oiticica:撰写——原始草稿、可视化、验证、软件开发、数据管理、概念化。Ana Laura Martins Mulkson Alves:撰写——原始草稿

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文所述的工作。

致谢

作者感谢MCTI/SISNANO圣保罗州研究基金会(FAPESP)(资助编号:22/05316-5、23/13428-0、23/01567-6、24/14742-3)、巴西高级人才发展协调委员会(CAPES)——资助代码001的财政支持。

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