在东亚和东南亚的亚热带与热带地区，生活着一类颇为特别的蛙类——琴蛙（Nidirana）。这个属的成员因其独特的鸣声和行为而备受关注，但它们的分类学历史却充满争议，曾一度被视为其他属的亚属或同物异名。近年来，随着调查的深入，这个属的“家谱”不断被刷新，大量的隐存多样性（cryptic diversity）被揭示出来。自2020年以来，仅在中国就描述了超过11个琴蛙新物种，彰显了该地区两栖动物惊人的未知多样性。然而，在新物种不断涌现的同时，许多种类的生物学信息，尤其是早期生活史阶段的特征，却依然是一片空白。这为物种的准确鉴定、系统关系解析乃至制定有效的保护策略都带来了挑战。
2023年，研究者根据来自中国重庆黔江区的三只成年雄性标本，描述了一个琴蛙新物种——重庆琴蛙（Nidirana chongqingensis）。其模式产地（type locality）仅限于重庆黔江。最初的描述基于雄性个体，提供了诸如体型小、指趾侧腹面有沟、特定的蹼式等鉴别特征。然而，一个关键的短板是，该物种的雌性个体和蝌蚪形态从未被描述过。在生物学研究中，缺乏对物种生命周期中关键阶段（如雌性和幼体）的认识，就像拼图缺了几块，使我们无法完整地理解这个物种的全貌。此外，其已知分布范围极其有限，这限制了我们评估其种群状况和受威胁程度的能力。这些信息的缺失，阻碍了对重庆琴蛙生物学和保育状况的全面理解。
为了填补这些知识空白，一支研究团队在2024年至2025年间，对中国贵州省正安县的山地环境进行了两栖爬行动物调查。正是在这次调查中，他们意外地采集到了6只成体（3雄3雌）和5只蝌蚪。这些标本在形态上初步符合重庆琴蛙的诊断特征。那么，这些来自贵州正安的蛙类，是否真的就是远在300公里外的重庆黔江的那个物种？它们能否为科学家们补上雌性和蝌蚪这两块缺失的拼图？这项研究由此展开，并最终将成果发表在《Biodiversity Data Journal》上。
为了确认这些新采集标本的身份，研究人员运用了分子生物学与形态学相结合的方法。首先，他们从肌肉组织中提取DNA，并扩增了线粒体16S核糖体RNA（16S rRNA）和细胞色素c氧化酶亚基I（COI）这两个基因片段进行测序。通过从GenBank获取包括重庆琴蛙模式产地标本在内的共28个琴蛙物种同源序列及2个外群（Babina holsti, Babina subaspera）序列，构建了基于16S和COI基因联合数据集的系统发育树，并计算了遗传距离（p-distance）。其次，在形态学方面，他们使用数显卡尺对成体进行了包括吻肛长（SVL）、头长（HL）等在内的17项测量。对于蝌蚪，则利用ImageJ软件从其比例照片上测量了包括全长（TOL）、体长（SVL）、尾长（TL）等在内的14项指标，并根据标准手册对蝌蚪分期和口部形态进行描述和记录。所有标本均保存于茅台学院资源与环境学院。
分子系统发育与遗传距离分析支持新标本为重庆琴蛙
基于16S和COI基因构建的系统发育树显示，来自贵州正安的5个样本与来自模式产地（重庆黔江）的3个重庆琴蛙样本共同形成了一个高支持度的单系群。基于COI基因，贵州样本与模式产地样本之间的未校正p-距离仅为0.0–0.4%，而与其他琴蛙物种的距离为3.7–13.8%。基于16S基因的结果类似，贵州样本与模式产地样本的距离为0.0–0.5%，与其他物种的距离为1.0–7.7%。这些遗传距离值远小于琴蛙属内物种间的典型分化阈值，从分子层面强有力地证实了贵州正安的种群即为重庆琴蛙。
首次详细描述重庆琴蛙的雌性形态
研究提供了基于三只雌性标本的首次详细形态描述。雌性体型较雄性略大，吻肛长在42.2至47.0毫米之间。身体修长，皮肤相对光滑，背部有分散的小疣粒，背侧褶细而明显。喉部、胸部及四肢腹面密布深于雄性的棕褐色斑点，这是雌雄二态性的一个重要表现。趾间具中等程度的蹼。
首次描述重庆琴蛙的蝌蚪形态
研究首次描述了处于30期的重庆琴蛙蝌蚪。蝌蚪全长在47.1至63.7毫米之间，尾长约占全长的63.5%至67.1%。身体呈长椭圆形，口盘位于前端，呈漏斗状。其上颌鞘中部具有缺刻。唇齿式（Labial tooth row formula, LTRF）为 I:1+1/1+1:II。生活时，背部呈黄褐色，散布不规则棕色小斑点，尾肌浅黄色，尾部后半部有密集的棕色斑点聚集。
修订重庆琴蛙的鉴别特征
基于对新标本（包括雌性和雄性）的观察，研究对重庆琴蛙的鉴别特征进行了补充和修订。修订后的特征组合包括：体型中小型；吻棱不显；所有指、趾具侧腹面沟；雄性繁殖期在第一指背面基部具单个婚垫；雄性具内声囊（内部解剖证实，修订了原描述）；雄性腹面乳白色，雌性喉胸部密布棕色斑点（斑点较雄性更深更密）；蝌蚪（30期）全长47.1–63.7毫米，口盘漏斗状，上颌鞘有中缺刻；趾间具中等程度蹼；胫跗关节前伸达眼或鼻孔。
确认分布范围扩展至贵州省
本研究确认了重庆琴蛙在贵州省正安县（28.77761° N, 107.26797° E, 海拔1326米）的存在。这将其已知分布范围从重庆黔江区向西北扩展了约300公里，是重要的分布新记录。
描述物种生态与栖息地
重庆琴蛙栖息于覆盖茂密杂草的山地沼泽、池塘和水生草地。成体隐藏于厚草丛中，雄性在夜间鸣叫。在该生境中，它与其它物种如无声囊泛树蛙（Polypedates megacephalus）、诸氏泛树蛙（Zhangixalus chenfui）、沼水蛙（Hylarana guentheri）同域分布。研究还观察到了该物种的筑巢行为，巢呈圆形。蝌蚪发现于池塘内的静水池中。
本研究通过整合分子与形态学证据，首次确认了重庆琴蛙在贵州省正安县的存在，将其分布范围显著扩展。更重要的是，研究填补了该物种生物学描述上的关键空白，首次提供了雌性成体和蝌蚪期的详细形态学信息，并据此修订了其鉴别特征，特别是明确了雄性具有内声囊这一属性。这些发现极大地完善了对重庆琴蛙这一新近描述物种的认识，为野外准确识别该物种（尤其是雌性和幼体）提供了可靠依据。新分布点的栖息地与模式产地类似，均为清洁水体的山地沼泽，但同样面临着农业生产污染和栖息地破碎化的潜在威胁。鉴于重庆琴蛙目前分布范围依然狭窄，且栖息地易受干扰，本研究提供的详实数据为其未来的保护状况评估（例如IUCN红色名录评估）奠定了坚实的基础，并强调了对重庆和贵州两地池塘及农田生态系统进行保护的重要性。
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