引言：脓毒症相关性急性肾损伤的挑战与治疗新靶点
脓毒症是由感染引发的全身性炎症反应，可发展为感染性休克及多器官功能衰竭。肾脏是常受累的器官，其功能衰退可导致脓毒症相关性急性肾损伤（SA-AKI），显著增加死亡率。SA-AKI是重症监护室中急性肾损伤的主要病因，与不良预后、住院时间延长和死亡率增高密切相关。其病理生理机制复杂，目前研究多集中于免疫炎症反应，其中巨噬细胞的极化状态扮演了核心角色。巨噬细胞主要分为促炎的M1型和抗炎的M2型。在脓毒症环境中，M1型巨噬细胞被激活，释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）等促炎因子，加剧肾组织损伤；而M2型巨噬细胞则分泌IL-10、精氨酸酶-1（Arg-1）等抗炎介质，发挥保护作用。因此，调节巨噬细胞极化，使其从破坏性的M1表型向保护性的M2表型转换，成为治疗SA-AKI的潜在策略。
枸杞多糖（LBP）是传统中药枸杞的主要生物活性成分，已被证实具有抗氧化、抗衰老、神经保护及免疫调节等多种药理活性。特别是在免疫调节方面，LBP能够影响包括树突状细胞和巨噬细胞在内的多种固有免疫细胞。已有研究表明，LBP通过调节巨噬细胞极化，能够减轻脂多糖（LPS）诱导的炎症、改善炎症性肠病。然而，LBP对SA-AKI是否具有保护作用及其具体机制尚不明确。本研究旨在探索LBP在SA-AKI模型中的治疗效果，并阐明其通过调控巨噬细胞极化发挥保护作用的功能机制。
材料与方法
本研究采用8周龄雄性C57BL/6J小鼠，通过盲肠结扎穿孔术（CLP）建立SA-AKI模型。小鼠被随机分为假手术组、CLP模型组以及CLP联合LBP（100、200、400 mg/kg）治疗组。术后灌胃给予LBP，24小时后采集血液和肾组织样本。通过检测血清中尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、肾损伤分子-1（KIM-1）和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的水平评估肾功能损伤。肾组织进行苏木精-伊红（HE）染色观察病理变化。同时，利用免疫荧光双染色和蛋白质印迹法（Western Blot）检测肾组织中巨噬细胞标志物F4/80，以及M1型标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和M2型标志物Arg-1的表达。
在细胞实验中，使用小鼠巨噬细胞系RAW264.7。通过CCK-8法检测LBP对细胞活力的影响。用LPS刺激诱导M1极化，用白细胞介素-4（IL-4）和IL-13诱导M2极化，并设置LBP（200、400、800 μg/mL）共处理组。通过实时定量聚合酶链式反应（qPCR）、Western Blot和免疫荧光技术检测iNOS、Arg-1、IL-1β、IL-6、IL-10等基因和蛋白的表达变化。为深入探讨机制，使用STAT1抑制剂氟达拉滨和STAT6抑制剂AS1517499处理细胞，并检测相关蛋白的磷酸化水平。
结果
LBP显著减轻脓毒症小鼠的肾损伤严重程度
与假手术组相比，CLP模型组小鼠血清中的BUN、Cr、KIM-1和NGAL水平均显著升高，表明SA-AKI模型成功建立。给予LBP治疗后，CLP + LBP 200 mg/kg和CLP + LBP 400 mg/kg组这些肾损伤标志物均显著降低，其中以200 mg/kg剂量的效果最为显著。肾组织HE染色结果进一步证实，CLP + LBP 200 mg/kg组肾小管损伤和炎性细胞浸润明显减轻。
LBP在体内通过调节巨噬细胞极化减轻脓毒症急性肾损伤
免疫荧光双染色结果显示，在SA-AKI小鼠肾组织中，LBP（200 mg/kg）治疗显著减少了F4/80+iNOS+的M1型巨噬细胞数量，同时增加了F4/80+Arg-1+的M2型巨噬细胞数量。Western Blot分析也表明，与CLP组相比，CLP + LBP 200 mg/kg组肾组织中的iNOS蛋白表达降低，而Arg-1蛋白表达升高。这些结果共同表明，LBP可能通过促使巨噬细胞从M1表型向M2表型转换来缓解SA-AKI。
LBP在体外通过调节巨噬细胞极化减轻脓毒症肾损伤
细胞实验表明，LBP在200-800 μg/mL浓度范围内对RAW264.7细胞无毒性作用。LPS刺激显著增加了RAW264.7细胞中iNOS的mRNA和蛋白表达，而400 μg/mL LBP共处理可有效抑制这种升高。免疫荧光染色直观显示，LPS刺激后iNOS表达增强，而LBP共处理使其减弱；反之，LPS抑制了Arg-1的表达，而LBP共处理使其恢复。因此，后续细胞实验选择400 μg/mL作为LBP的工作浓度。
LBP抑制RAW264.7细胞从M2向M1的重编程
qPCR和Western Blot结果显示，LPS刺激可显著上调M1标志物（iNOS、IL-1β）并下调抗炎因子IL-10，而LBP共处理可逆转这些变化。当用IL-4/IL-13将RAW264.7细胞极化为M2表型后，再用LPS刺激会诱导其向M1表型重编程，表现为iNOS和IL-6上调，Arg-1下调。然而，LBP处理能有效抑制这种重编程，帮助维持M2样表型。
LBP通过调节STAT1和STAT6磷酸化维持M2表型并抑制M1表型
机制研究表明，巨噬细胞极化受多种信号通路调控，其中信号转导与转录激活因子1（STAT1）和STAT6是关键调节因子。STAT1驱动M1极化，而STAT6驱动M2极化。本研究发现，LBP能抑制LPS诱导的STAT1磷酸化，同时促进STAT6的磷酸化。使用STAT1特异性抑制剂氟达拉滨可模拟LBP对STAT1磷酸化和iNOS表达的抑制作用，且与LBP联用无叠加效应，表明LBP通过STAT1通路抑制M1极化。同样，LBP对STAT6磷酸化的促进作用可被STAT6抑制剂AS1517499所抵消，表明LBP通过STAT6通路维持M2极化。
讨论与结论
SA-AKI是一种严重威胁患者健康的临床并发症，巨噬细胞极化失衡是其核心驱动因素之一。本研究首次系统探讨了枸杞多糖（LBP）对SA-AKI的保护作用及机制。结果表明，LBP能显著降低SA-AKI小鼠模型的肾功能损伤标志物（BUN、Cr、KIM-1、NGAL），减轻肾组织病理损伤。其保护作用与调节巨噬细胞极化密切相关：LBP在体内外均能抑制促炎的M1型巨噬细胞活化（表现为iNOS、IL-1β、IL-6下调），同时促进抗炎的M2型巨噬细胞极化（表现为Arg-1、IL-10上调）。更深入的是，LBP还能抑制已极化的M2型巨噬细胞在LPS刺激下向M1表型的不利重编程。
在分子机制上，本研究证实LBP通过调控STAT1/STAT6信号通路发挥上述作用。具体而言，LBP抑制STAT1的磷酸化，从而遏制M1极化；同时促进STAT6的磷酸化，从而稳固M2极化。这一发现与LBP在炎症性肠病中的研究结果一致，进一步确认了STAT1/STAT6是其关键的信号节点。
本研究也存在一定局限，例如仅使用了一种动物模型和细胞系，LBP在不同模型或细胞中的普适性需进一步验证；机制上虽定位到STAT1/STAT6，但上游或并行的具体调控网络有待深入挖掘；此外，本研究为单次给药，连续或多次给药的方案及其效果值得探索。
综上所述，本研究表明枸杞多糖（LBP）通过调节巨噬细胞M1/M2极化平衡，经STAT1/STAT6信号通路，有效减轻脓毒症引起的急性肾损伤。这为深入理解LBP的肾脏保护作用提供了新见解，并为开发LBP作为SA-AKI的潜在治疗药物奠定了重要的概念基础。
