综述:乳清蛋白中的生物活性肽:生产、纯化、鉴定、作用机制及其在食品中的生物功能性

时间:2026年2月17日
来源:International Dairy Journal

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本文综述了乳清蛋白生产生物活性肽的进展,涵盖酶解技术、色谱纯化及质谱鉴定方法,重点讨论其抗氧化、抗菌特性及在功能性食品中的应用潜力。

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阿里乌·托罗·拉菲亚(Aliou Toro Lafia)|温斯顿·皮涅罗·克拉罗·戈麦斯(Winston Pinheiro Claro Gomes)|瓦内萨·R·梅尔赫特(Wanessa R. Melchert)
圣保罗大学“路易斯·德·凯罗斯”农业学院(College of Agriculture “Luiz de Queiroz”),巴西皮拉西卡巴市(Piracicaba)帕杜亚·迪亚斯大道(Av. Pádua Dias)11号,邮政信箱9,邮编13418-900

摘要

生物活性肽是能够发挥重要生物作用的特定蛋白质片段。近年来,农业工业副产品(如乳清)被广泛研究作为这些化合物的可持续蛋白质来源。本文综述了从乳清蛋白中提取、纯化和鉴定生物活性肽的最新进展,重点介绍了其作为抗氧化剂、抗菌剂和功能性食品成分的潜在应用。还探讨了这些肽的抗氧化和抗菌作用机制。由于酶促水解在释放生物活性序列方面的高效性,因此它是获得生物活性肽的主要方法;然而,新兴物理技术的探索仍然有限。用于纯化、分馏和分离具有特定生物活性的肽的色谱技术取得了显著的技术进步,从常规液相色谱发展到超高效液相色谱(UHPLC)。肽的测序和鉴定主要通过液相色谱与质谱联用技术进行。随着更高效的离子化源和质量分析器(如四极杆(Q)、飞行时间(TOF)和基质辅助激光解吸/飞行时间(MALDI-TOF)的发展,这些过程也取得了显著的技术进步,这些技术通常与UHPLC系统结合使用。抗氧化肽主要通过清除自由基和螯合促氧化金属发挥作用,而抗菌肽则通过抑制微生物的细胞外和细胞内结构来发挥作用。在此背景下,从乳清中提取的生物活性肽成为食品保存和功能性食品开发的有前景的替代品。

引言

农业工业每年产生数百万吨有机废物,导致环境退化。管理和处理来自农业食品行业的废物是一个非常复杂的过程,涉及高昂的处理成本和严格的环境要求。如果处理不当,会对环境产生负面影响(Chhetri等人,2020;Jiang等人,2024;Papaioannou等人,2022)。农业工业废物通常来自食品加工,包括谷物、水果、肉类、家禽、鱼类和乳制品。这些有机材料的分解需要大量的生化氧气,并会排放温室气体(Wani等人,2024)。
食品副产品是具有营养价值的农业工业废物,可以重新利用。通过将这些副产品加工成增值产品,可以减少环境污染,这是实现可持续性和食品安全的关键因素。农业工业废物中的营养物质,包括有机和无机化合物,可以使用适当的技术重新利用来生产其他有价值的产品(Reguengo等人,2022)。这些动植物来源的副产品富含粗纤维、蛋白质、碳水化合物,尤其是可用于多种用途的生物活性化合物。动植物来源的农业工业废物是生物活性化合物的潜在来源。食品副产品通常具有非常复杂的生化组成,这使得难以用单一过程完全再利用它们。为了将这些废物重新用于生产生物活性化合物,需要从过程定义阶段到最终产品进行仔细的优化(Alvi等人,2022;de la Rosa等人,2019;Kumar等人,2022;Wani等人,2024)。
乳制品行业是不断发展的农业工业部门之一,因为随着人们对乳制品(包括宏量和微量营养素)在生命周期各个阶段所具有的多种营养益处的认识不断增加(Timon等人,2020)。2023年,全球牛奶产量估计为9.5亿吨(FAO,2023)。乳制品加工会产生大量乳清,这是奶酪、酸奶、酪蛋白等产品的副产品(图1)。例如,来自奶酪或酪蛋白生产的乳清约占加工牛奶体积的90%(Karim & Aider,2022;Rama等人,2019)。全球每年大约生产1.8亿至1.9亿吨乳清。乳清保留了牛奶中大约55%的主要营养成分,包括乳糖、脂肪和蛋白质。乳清是一种具有高再利用潜力的副产品,尤其是其蛋白质,可用于生产生物活性肽。目前,乳清被用作乳清粉、无乳糖婴儿配方奶粉、运动补充剂中的乳清蛋白或食品添加剂。然而,全球只有大约一半的乳清产量得到了适当的再利用,很大一部分被丢弃到环境中。由于其高有机负荷,乳清具有较高的生化需氧量,这是一个重大的环境问题(Amaro等人,2019;Kolesovs & Semjonovs,2020;Rama等人,2019;Valdez Castillo等人,2020)。
乳清的高生物价值归因于其蛋白质含量(主要是白蛋白和球蛋白),这些蛋白质可用于生产生物活性肽(Kolesovs & Semjonovs,2020)。乳清的蛋白质含量取决于类型:甜乳清(通过添加凝乳酶获得,pH值6-7)或酸乳清(由于酸发酵,pH值<5)。酸乳清的盐含量较高,因此被称为咸乳清,其蛋白质含量低于甜乳清。目前有多种技术可用于提取乳清蛋白(Zikmanis等人,2020)。生物活性肽是由蛋白水解产生的小氨基酸序列(2到20个氨基酸)(Kashyap等人,2023)。乳清蛋白的水解会产生具有多种潜在有益生物功能的肽,如抗菌、抗氧化和降压特性(Bamdad等人,2017)。所产生的生物活性化合物可用于多种用途,例如功能性食品配方。为了确定乳清生物活性肽在食品中的应用,需要进一步的临床研究来评估其安全性和潜在的健康益处(Olvera-Rosales等人,2022)。
功能性食品常被称为健康、天然的产品。由于消费者对良好营养和健康重要性的认识不断提高,人们对功能性食品和饮料的兴趣日益增加。人们对提供超出原始营养价值的食品产品的需求也在增长,这是一个重要的食品趋势(Santeramo等人,2018)。在当今社会,食品的作用不仅仅是满足饥饿和提供营养。消费者现在寻求的功能性食品不仅能满足基本需求,还能帮助预防各种疾病并改善身心健康(Donno & Turrini,2020)。功能性食品除了基本营养特性外,还可能具有特定的健康益处。如果某种生物活性化合物被添加到新的食品配方中以达到特定目的,该产品就可以被视为功能性食品(Plasek & Temesi,2019)。食品工业正在使用更多的天然产品来实现这一目标,这些产品在配方中有助于维护健康和预防疾病(Banwo等人,2021)。
除了用于食品(Atallah等人,2020;Devi等人,2024)外,乳清还被用于通过黑暗发酵生产氢气(Lovato等人,2021)、生产乙醇(Cunha等人,2021)、作为微生物生产的替代培养基(Kolesovs & Semjonovs,2020)以及生产聚羟基烷酸酯(Israni等人,2020)等应用。本综述旨在探讨用于食品目的的生物活性肽的生产方法、纯化技术及其可能的生物功能。

小节摘录

生物活性肽的生产技术

乳清是一种营养价值高的乳制品副产品,特别是乳清蛋白,其营养质量和生物价值高于牛奶蛋白和酪蛋白(Dullius等人,2018)。乳清的主要蛋白质成分包括α-乳白蛋白、β-乳球蛋白、乳铁蛋白、免疫球蛋白、牛血清白蛋白、乳过氧化物酶、蛋白胨肽和糖巨肽(Yadav等人,2015)。生产生物活性肽可以促进乳清在食品配方中的使用。

生物活性肽的分离与纯化

在文献中发现的大多数研究中,酶促水解是最常用的生产生物活性肽的方法,其次是鉴定,其中消化酶被最广泛使用。大多数已知具有生物功能且结构可识别和可重复的生物活性肽都是通过消化酶生产的,尤其是胃蛋白酶(表1)(Ahmed等人,2015;Baba, Mudgil, Baby等人,2021;Çakır等人,2021;Ibrahim

生物活性肽的鉴定

序列鉴定对于肽的定性和定量分析以及准确再现构成它们的氨基酸序列至关重要。尽管存在多种肽序列鉴定技术,但色谱与质谱联用是最常见的方法(Okoye等人,2022)。该技术涉及根据肽的不同性质进行纯化、分馏和分离,使用不同类型的液相色谱(LC)。

生物活性肽的功能

生物活性肽是通过酶促蛋白水解和微生物发酵蛋白质产生的。在富含蛋白质的食品成熟或烹饪过程中也可以产生生物活性肽(Daliri等人,2017)。生物活性肽通常由2到20个氨基酸组成(Choi等人,2020)。超滤或尺寸排阻色谱分离可以将水解产物分成不同分子量的组分。

肽在食品中的应用

通过正常饮食摄入少量(IC50)食品来源的生物活性肽通常被认为是安全的。因此,来自非食品来源或非基本食品的肽应经过严格的毒性和致敏性测试。来自食品来源的纯化肽被认为是安全的,并且具有更高的生物活性(Karimi等人,2021;Zhao & Ashaolu,2020)。低分子量的肽具有显著降低的抗原性。实验观察到,生物活性肽

未来展望

尽管在乳清来源的生物活性肽研究方面取得了实质性进展,但仍存在一些关键差距,为未来的研究提供了重要方向。生产过程的优化仍然是一个主要挑战,特别是在降低成本方面,因为酶是水解阶段最重要的经济因素之一。在这方面,包括超声波、高压处理在内的新兴技术的整合

结论

新的饮食习惯趋势侧重于寻找具有功能性特性的天然食品,这突显了乳清作为生物活性化合物潜在来源的重要性。酶促水解和乳清蛋白的微生物发酵是最广泛使用的生产生物活性肽的方法,也被认为更安全。最近的研究表明,通过发酵或酶促水解乳清蛋白获得的肽具有多种生物活性特性,如抗菌

作者贡献声明

阿里乌·托罗·拉菲亚(Aliou Toro Lafia):撰写——原始草稿,概念构思。温斯顿·皮涅罗·克拉罗·戈麦斯(Winston Pinheiro Claro Gomes):撰写——原始草稿。瓦内萨·R·梅尔赫特(Wanessa R. Melchert):撰写——审稿与编辑,监督,项目管理,概念构思

未引用的参考文献

Baba等人,2021;Baba等人,2021。

利益冲突

作者声明没有需要声明的竞争利益。

利益冲突声明

☒ 作者声明没有已知的竞争性财务利益或个人关系可能影响本文所述的工作。

致谢

作者感谢巴西政府机构的财政支持,包括高等教育人员改进协调机构(CAPES)——财政代码001、国家科学技术发展委员会(CNPq),拨款编号141002/2024-7和305538/2022-5、路易斯·德·凯罗斯农业研究基金会(Fealq)以及圣保罗研究基金会(FAPESP)。

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