在秸秆堆肥过程中,通过添加功能性酶,能够促进多种前体物质通过β-O-4键的断裂共同发生腐熟(即“共腐熟”现象)

时间:2026年3月16日
来源:Bioresource Technology

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本研究通过添加功能性酶溶液显著提升秸秆堆肥中木质纤维素降解效率,促进β-O-4键断裂及芳香单位氧化,加速腐殖酸形成,其中复杂腐殖酸占比达47.13%,荧光峰红移10 nm,为优化堆肥腐殖化提供新策略。

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郑光仁|曲凤婷|李汉奇|杨洪宇|赵月|魏子敏
中国天津市天津师范大学生命科学学院动物与植物抗性重点实验室,天津300387

摘要

木质纤维素的顽固性是秸秆堆肥过程缓慢的主要原因。尽管接种功能性微生物制剂可以提高木质纤维素的降解速率,但其效果往往受到养分匮乏和堆肥过程中与本土微生物竞争的限制。为了解决这一问题,我们添加了一种真菌酶溶液以强化木质纤维素的水解。结果表明,添加功能性酶溶液破坏了木质纤维素的网络结构,提高了其生物可利用性,从而促进了木质纤维素的降解。在添加功能性酶溶液的处理中,纤维素、半纤维素和木质素的损失率分别为86.81%、87.47%和81.08%。1H–13C 2D-HSQC-NMR分析显示,添加功能性酶溶液加速了木质素中β-O-4键的断裂,并促进了芳香单元的氧化转化。在此基础上,功能性酶溶液的添加诱导了更多的氧化木质素片段以及蛋白质和碳水化合物衍生物参与腐殖酸的形成,从而增强了腐殖酸的结构复杂性和聚合度。在所有处理方法中,添加功能性酶溶液的处理中复杂腐殖酸组分(HA-C3)的比例最高(47.13%),其荧光发射峰相比对照组向红侧移动了10纳米。总体而言,本研究通过添加功能性酶溶液有效克服了木质纤维素的结构障碍,从而加速了其降解和腐殖化过程。这为堆肥腐殖化的机制提供了策略和新见解。

引言

作为世界上最大的农业生产国之一,中国每年产生约10亿吨农作物秸秆,占全球秸秆产量的20-30%(Chen等人,2023年;Li等人,2025年)。尽管产量巨大,但仍有超过三分之一的秸秆被不当处理或露天焚烧,导致生物量资源的巨大损失和严重的环境后果(Mao等人,2022年)。堆肥作为一种环保技术,可以有效将秸秆废弃物转化为资源并产生腐殖质(Du等人,2025a)。然而,传统的秸秆堆肥通常需要60-90天才能成熟,主要是由于木质纤维素的降解速度较慢(Zhao等人,2025年)。因此,解决促进秸秆堆肥中木质纤维素降解和加速堆肥腐殖化过程这一重要科学问题至关重要(Zhan等人,2025年)。
在好氧堆肥过程中,原材料中的大分子有机物在加热和嗜热阶段逐渐分解为较小的分子,而腐殖质主要在冷却和成熟阶段合成(Wang等人,2026年)。多酚-蛋白质理论是堆肥过程中腐殖质形成的主要机制之一(Zhao等人,2024b)。根据这一理论,来自木质素降解和微生物代谢的多酚化合物被氧化成反应性的醌中间体,随后与氨基化合物缩合形成腐殖质(Tao等人,2025年)。因此,木质素的降解对于提供腐殖质形成的关键前体至关重要。然而,木质纤维素具有由纤维素、半纤维素和木质素组成的高度顽固的结构。纤维素微纤丝嵌入半纤维素基质中,并进一步被木质素包裹,形成了限制微生物接触的复杂芳香网络(Xiao等人,2025年)。在堆肥过程中,木质纤维素的降解主要依赖于微生物分泌的胞外木质纤维素酶的协同作用(Zhan等人,2025年)。关键的木质素降解酶,如漆酶、木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶,有助于木质素结构的氧化断裂(Wu等人,2024年)。然而,木质素本身的抗性仍然是限制木质纤维素高效转化和随后腐殖化的主要瓶颈。因此,开发有效的策略来增强木质素的降解对于改善堆肥过程中的腐殖质形成具有根本性意义。
常见的木质纤维素水解增强技术包括预处理和接种功能性微生物制剂(Liu等人,2020年;Zhai等人,2022年)。预处理涉及物理或化学破坏木质纤维素结构以增强水解,方法包括高温水热处理、强氧化剂处理、碱处理、酸处理以及使用表面活性剂(Gupta等人,2026年;Qin等人,2026年)。然而,这些预处理方法通常伴随着较高的成本和潜在的环境风险。生物接种可以使用具有木质纤维素降解能力的微生物菌群或单一微生物来实现(Liu等人,2025年;Wu等人,2024年),这是一种更便宜且更可持续的预处理方法。基于木质纤维素的选择性,微生物接种可以在堆肥过程中产生多种降解木质纤维素的酶。Xu等人从秸秆堆肥中分离出木质纤维素降解微生物,并将其重新引入堆肥中以增强木质纤维素的降解(Xu等人,2024年)。Wang等人通过接种嗜热真菌Aspergillus fumigatus Z5和细菌Geobacillus提高了秸秆堆肥中纤维素和半纤维素的降解速率(Wang等人,2022年)。然而,传统的微生物接种存在缺点,如由于养分匮乏和与堆肥中本土微生物群体的竞争而导致的功能有限。Zhang等人还观察到,用Bacillus作为先锋物种接种堆肥改变了微生物群落结构,从而影响了木质纤维素的降解(Zhang等人,2021b)。这表明,用功能性微生物制剂接种堆肥并未充分发挥其原始功能。因此,需要一种更好的处理方法,能够在不增加堆肥成本的情况下提高功能性微生物制剂在堆肥中的性能,从而加速堆肥过程。
因此,本研究利用功能性微生物菌株发酵并培养含有高浓度木质纤维素降解酶的酶溶液,然后将其添加到堆肥中,以增强木质纤维素的降解。本研究的目标是:(1)研究添加功能性酶溶液对秸秆堆肥过程中木质纤维素降解的影响;(2)分析木质素结构和键合键的变化;(3)阐明腐殖酸的结构变化;(4)明确添加功能性酶溶液增强木质纤维素水解和腐殖质形成的机制。

实验设计

堆肥实验设计

堆肥实验使用稻草作为原料。稻草被切碎成约30-100毫米的段用于堆肥。添加尿素以调整材料的碳氮比(C/N)至约28,并将材料的初始含水量调整在55%到60%之间。堆肥在户外一个100厘米×100厘米×100厘米的泡沫箱中进行,每天中午测量一次温度。
功能性微生物

木质纤维素含量的变化

分析了每个堆肥处理及其周围环境的温度变化(见补充材料),整个过程可分为四个阶段:加热阶段、高温阶段、冷却阶段和成熟阶段。根据“城市固体废物堆肥技术规范”(中国CJJ52-2014),堆肥的温度必须保持在55°C以上超过5天或65°C以上超过4天(Zhang等人,2021a)。

结论

本研究表明,添加来自Z1菌株的功能性酶溶液显著增强了秸秆堆肥过程中木质纤维素的降解和腐殖化。与直接微生物接种相比,添加酶更有效地加速了纤维素、半纤维素和木质素的降解。功能性酶溶液主要在堆肥早期通过破坏木质纤维素结构、增加底物可及性来发挥作用

CRediT作者贡献声明

郑光仁:撰写——原始草案、软件、方法学、调查、数据分析、概念化。曲凤婷:资源、方法学、调查。李汉奇:方法学、调查、数据分析。杨洪宇:资源、方法学、调查。赵月:撰写——审阅与编辑、监督、资源、方法学、概念化。魏子敏:撰写——审阅与编辑、监督、资源获取、概念化。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能会影响本文工作的竞争性财务利益或个人关系。

致谢

本工作得到了国家自然科学基金(项目编号:5237014832372820)和黑龙江省研发项目(编号:2024ZX02B18)的资助。

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