郭小红|李欢|郭宏涛|王志华|王秉森|邢庆华|陆朝群|赵志娜|吴尚文|朱凯静|齐尚文|李松伟
河南省中医药大学第一附属医院风湿科，郑州，450000，中国
摘要
民族药理学相关性
类风湿性关节炎（RA）是一种以滑膜炎和关节破坏为特征的自身免疫性疾病，气血亏虚是该病的发病机制中的重要因素。黄芪桂枝五物汤（HGWD）具有补气养血、温经通络、调和气血的作用，可用于治疗RA引起的关节疼痛。然而，在临床实践中，关于该方中主药黄芪（Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.，简称HQ）的用量存在较大争议。
研究目的
探讨HQ在不同用量下对HGWD治疗RA疗效的影响。
材料与方法
利用生物信息学方法构建了成分-靶标（CT）网络，根据“君、臣、佐、使”的原则分析了HGWD中五种药物的配伍关系，并解析了HQ在方中发挥主药作用的潜在机制。通过胶原诱导的关节炎（CIA）动物模型，研究了不同HQ用量下HGWD调节JAK/STAT信号通路的分子机制。进行了一项多中心、随机、双盲、安慰剂平行对照研究，以评估不同HQ用量的HGWD治疗气血亏虚型RA患者的疗效和安全性。
结果
通过构建CT网络发现，君药的平均靶标数量最多，但其平均靶标度低于臣药。这表明增加君药的用量可能增强该复方治疗RA的疗效。动物实验表明，当HGWD中HQ的用量在30克以内时，其用量与疗效呈正相关。其机制可能与降低促炎细胞因子水平、增加抗炎因子水平以及通过JAK/STAT信号通路调节滑膜细胞凋亡有关。RCT研究发现，高剂量HQ联合托法替尼（tofacitinib）使用后，可显著提高中医综合征的总有效率和ACR20/70反应率，减轻疾病活动度，缓解临床症状，降低炎症指标，并改善患者整体状况。该组合具有较高的安全性，且具有协同增效和降低毒性的作用。
结论
将HGWD中HQ的用量增加到30克可显著改善RA症状。该方可能通过抑制JAK/STAT信号通路和促进滑膜细胞凋亡发挥抗RA作用，与托法替尼联合使用可产生协同增效和降低毒性的效果。
引言
类风湿性关节炎（RA）是一种慢性自身免疫性疾病，表现为关节肿胀、滑膜炎和软骨破坏，全球约有0.5%~1%的人口患病（Di Matteo等人，2023年），中国患病率为0.42%（Jin等人，2017年）。该病严重影响患者的生活质量，现有疗法只能延缓炎症进展和防止骨质破坏，无法根治（Gao等人，2024年）。
在中医理论中，RA属于“痹症”和“络痹”范畴。古代中医学家广泛探讨了其病因和发病机制，认为营卫失调及气血亏虚是关键诱因（Zhou等人，2020年）。黄芪桂枝五物汤（HGWD）源于东汉张仲景的《金匮要略》，被列入国家中医药管理局发布的《古代经典方剂目录（第一批）》。该方具有补气养血、温经通络、治疗痹症的作用（Tian等人，2021年）。
现代研究表明，HGWD与西药联合使用不仅能改善临床症状和生活质量，还能减少西药的不良反应（Jiang等人，2019年；Lv等人，2021年；Tian等人，2021年），体现了中医的整体观念以及中西医结合的增效减毒效果。网络药理学研究表明，HGWD可能通过调节细胞功能和多种通路治疗RA（Liu等人，2024年）。草药用量，尤其是君药的用量，对临床疗效至关重要。目前关于HQ的用量（通常为15克、20克或30克）存在显著差异（Ma等人，2016年；Yang等人，2018年；Zhang，2020年），但大多数研究缺乏严格的随机对照试验设计，导致最佳用量的争议。
JAK/STAT信号通路在RA的发病机制中起关键作用，调控滑膜细胞的存活和炎症反应。该通路的持续激活会通过上调Bcl-2等抗凋亡蛋白直接抑制细胞凋亡，从而促进其病理增生。同时，激活的STAT转录因子驱动关键促炎细胞因子（如TNF-α和IL-6）的转录上调和释放，形成恶性循环，加剧滑膜炎症和关节破坏（Su等人，2021年）。因此，通过药理学抑制JAK/STAT轴可同时恢复滑膜细胞凋亡和减弱细胞因子风暴，为炎症性疾病的目标治疗提供理论依据（Philipps等人，2022年）。本研究首先通过生物信息学构建了CT网络，分析了HGWD中五种药物的配伍关系及HQ作为君药的重要性。HGWD治疗RA的关键靶标主要集中在JAK/STAT信号通路；分子对接显示HQ的关键成分与该通路的关键蛋白具有较低结合能。CIA大鼠模型用于研究不同HQ用量下HGWD是否通过调节JAK/STAT通路、炎症指标和滑膜细胞凋亡来缓解RA。此外，还进行了多中心、随机、双盲、安慰剂对照试验，以评估不同HQ用量下HGWD的疗效和安全性，旨在为临床实践提供最佳用量依据。
章节摘录
黄芪桂枝五物汤的制备及化合物鉴定
HGWD由5种中药组成，详细信息见表1。HGWD的UPLC-Q-Extractive-Orbitrap MS分析结果见图S1和表S10。
样品制备：（1）准确称取样品适量放入2毫升离心管中，加入600微升含2-氨基-3-(2-氯苯基)丙酸（4 ppm）的甲醇，涡旋30秒；（2）加入钢球，在组织研磨机中以55 Hz转速研磨60秒；（3）在室温下进行超声处理15分钟；（4）
RA的加权基因调控网络构建
理解RA的发病机制并制定干预策略的关键步骤是构建和分析加权基因调控网络。从公共STRING数据库中获取了463个与RA相关的致病基因，并将其映射到PPI网络中。该加权基因调控网络包含338个节点和1602条边。
讨论
本研究综合运用生物信息学、动物实验和多中心随机对照临床试验，系统探讨了HGWD中HQ用量对RA的疗效和分子机制，为中西医结合治疗RA提供了多层次证据。
结论
总之，本研究通过生物信息学分析、动物实验和临床研究，分析了HGWD中HQ用量的疗效和分子机制，结果表明将HQ用量增加到30克是治疗气血亏虚型RA的最佳剂量。HGWD主要通过抑制JAK/STAT信号通路、调节炎症细胞因子网络和促进滑膜细胞凋亡发挥抗RA作用。
作者贡献声明
陆朝群：方法学研究。赵志娜：方法学研究。邢庆华：方法学研究。王志华：验证、正式分析。王秉森：方法学研究。李欢：写作、审稿与编辑、资源整理、方法学研究、概念构思。郭宏涛：软件开发、数据管理。齐尚文：方法学研究。李松伟：写作、审稿与编辑、监督、资源管理、项目统筹、资金申请、概念构思。郭小红：初稿撰写、验证、方法学研究、资金申请
伦理审批
临床实验遵循河南省中医药医院的伦理委员会规定进行（审批编号：AF/SC-04/04.0）。
本研究的动物实验部分获得了河南省中医药医院机构动物伦理委员会的批准（审批编号：PZ-HNSZYY-2022-03）。
本研究生成或分析的所有数据可应请求向 corresponding author 获取。
作者声明没有已知的可能影响本文研究的财务利益或个人关系。
资金支持
本研究得到了国家自然科学基金（编号：81573952）、河南省科技研发计划联合资金（编号：222301420089）、河南省自然科学基金（编号：262300422221）、河南省科技计划（编号：252102311247和262102310486）、河南省医学科学研究计划（编号：SBGJ202503042）以及多方面的支持。
作者声明没有已知的可能影响本文研究的财务利益或个人关系。
