摘要
背景
脱发是一种常见的情况，具有显著的心理社会影响。尽管有米诺地尔等药物治疗方法，但长期使用可能会伴随不良反应。植物提取物在传统医学中广泛用于头发护理，然而其疗效的科学验证仍然有限。
目的
本研究旨在评估迷迭香（Rosmarinus officinalis）和蓖麻（Ricinus communis）油组合在鼠模型中对头发生长的促进作用。
方法
迷迭香精油通过水蒸馏法获得，而蓖麻种子中的固定油则使用索氏提取法（Soxhlet extraction）与己烷共同提取。15只小鼠（每组3只）被分为五组：迷迭香油组、蓖麻油组、组合组（1:1比例）、2%米诺地尔组（阳性对照）和未处理组（阴性对照）。每天局部涂抹一次，持续28天。通过测量头发长度、宏观观察和标准化头发再生评分来评估头发生长情况。由于样本量较小，数据分析采用单因素方差分析（one-way ANOVA），随后进行Tukey事后检验。统计结果仅用于描述性分析，p值用于识别趋势而非推断显著性。
结果
组合组的平均头发长度（12.88 ± 0.79毫米）高于迷迭香油组（12.68 ± 0.25毫米）和蓖麻油组（10.10 ± 0.22毫米），并与2%米诺地尔组（13.06 ± 0.21毫米）的趋势相似。单因素方差分析显示各组之间存在差异。由于样本量较小，统计结果仅用于描述性分析；p值用于识别趋势而非推断显著性。
结论
研究结果表明，迷迭香油和蓖麻油组合可能在鼠模型中促进头发生长。这些发现基于鼠模型，不能直接应用于人类。
1. 引言
头发具有深远的文化和社会意义，是身份、地位、宗教和自我表达的象征[1]。除了文化价值外，头发还影响外貌，进而影响吸引力、健康和个性的感知[2]。从生理角度来看，头发有助于抵御环境因素，协助体温调节，并可作为系统健康状况的指标。此外，头发可以保留微量元素，因此在法医学和毒理学调查中也有应用[3]。脱发是一种常见现象，可能由毛囊周期紊乱、结构异常或化疗、放疗等外部因素引起[4]。脱发通常会导致自尊心下降和焦虑增加[5]。脱发可分为瘢痕性和非瘢痕性类型[6]。其中，斑秃是一种自身免疫性疾病，表现为局部脱发；而雄激素性脱发是一种受激素影响的状况，会导致男性和女性头发逐渐稀疏[7]。目前仅有少数药物被批准用于治疗脱发，包括局部使用的米诺地尔和口服的非那雄胺。尽管这些疗法有效，但存在不良反应。例如，米诺地尔可能导致面部多毛症和接触性皮炎，而非那雄胺则与性功能障碍、情绪障碍和停药后综合征有关[8]。此外，这些治疗通常需要长期或持续使用才能维持效果。
因此，人们对替代疗法越来越感兴趣，特别是来自阿育吠陀、中医和非洲民族医学等传统医学系统的植物疗法。这些系统利用多种植物制剂来促进头发生长、改善头皮健康并管理脱发问题[9]。迷迭香传统上被用来增强头发活力，可能通过抗氧化和抗雄激素机制发挥生物学作用[10, 11]。同样，蓖麻油因其润肤和调理特性而被广泛使用，这主要归因于其中富含的蓖麻油酸和脂肪酸，这些成分可能有益于头皮健康[12]。由于其公认的好处，这些油也常被添加到商业护发产品中[13]。尽管这些植物提取物在传统和商业上广泛应用，但关于它们联合使用对头发生长的影响的科学证据仍然有限。现有研究往往关注单一植物提取物，而非潜在的协同作用。因此，需要通过受控实验模型系统地评估它们的疗效。本研究旨在初步探讨迷迭香油和蓖麻油组合在鼠模型中的头发生长促进作用，为未来的临床前研究和临床试验提供基础数据。
2. 材料与方法
2.1 植物材料的采集与制备
从纳库鲁县Kabarak大学的植物园收集了新鲜的迷迭香叶和成熟的蓖麻种子。植物材料由Kabarak大学的合格分类学家鉴定，并将凭证标本（AMF 001）存入机构标本馆以供将来参考。植物材料风干后研磨成粉末，分别储存在密封容器中，置于室温下[14, 15]。
2.1.1 植物提取物的制备
迷迭香叶粉按照Elyemni等人的方法，在80°C的最佳操作条件下进行水蒸馏[16]。200克迷迭香叶粉与1000毫升蒸馏水混合，蒸馏3小时后收集精油[15]。将100克蓖麻种子放入索氏提取器中，加入己烷（300毫升）开始提取过程，提取6小时（60°C）。当提取器中的溶液变清时，表示油已完全提取，然后关闭设备。收集的溶剂和油在干燥器中烘干冷却，储存在密封容器中，置于室温下。提取率（%）=（提取油的重量/植物材料的重量）× 100（Mohammed等人，2017年）。
2.2 实验动物与样本量
使用成年雄性和雌性BALB/c小鼠（20–25克）。小鼠提供标准饲料和新鲜水源。在控制温度（23°C ± 2°C）、湿度（50% ± 20%）和光照（12小时光照-黑暗周期）条件下饲养。进行皮肤刺激测试，剃除小鼠颈部和背部皮肤的毛发，并用手术酒精清洁该区域。然后涂抹提取的油和配方，观察24小时、48小时和72小时内的红斑和水肿情况[18]。初步研究表明，样本量3–5只适用于可行性评估。类似的体内药理学研究通常使用小样本量作为探索性筛选工具，在大规模验证研究之前识别生物活性。这种方法广泛应用于早期药用植物研究和临床前药物发现，通过动物实验评估可行性并生成初步疗效信号[19–21]。n = 3的结果仅用于描述性趋势分析。
2.3 头发生长促进效果的评估
15只小鼠分为五组（每组3只），适应一周后随机分配到不同处理组。实验开始前24小时，用剃须刀剃除小鼠背部的毛发。第一组涂抹迷迭香油，第二组涂抹蓖麻油，第三组涂抹迷迭香油和蓖麻油的混合物，第四组涂抹2%米诺地尔（阳性对照），第五组不进行处理（阴性对照）[22]。每天将0.1毫升的每种配方涂抹在剃除毛发的背部区域（约2平方厘米），持续28天。组合组使用1:1（体积比）的迷迭香油和蓖麻油混合物。通过肉眼宏观观察评估头发生长情况；在特定时间点（第1、7、14、21和28天）拍摄照片，记录头发再生开始时间和与对照组的再生模式[23]。使用头发再生评分进行进一步评估：0–5分：0=无头发生长，1=头发生长少于20%，2=20%-39%，3=40%-59%，4=60%-79%，5=80%-100%（Matsuda等人，2024年）。还使用描述性评分标准：IV型（高密度、浓密毛发），III型（中等密度、无明显皮肤暴露），II型（低密度、可见皮肤），I型（测试区域毛发生长不均匀、皮肤清晰可见）[22]。通过随机拔取10根毛发并用数字卡尺测量长度，与对照组小鼠的毛发长度进行比较[25]。
2.4 数据监测、展示与分析
为提高研究结果的可靠性，所有实验室仪器都经过严格校准，并使用高清晰度成像系统。动物在严格控制的饲养条件下饲养，以保持其生理完整性。每周系统记录头发生长参数及相关观察结果，以监测实验进展并验证测量的准确性[22]。使用简单随机化程序将动物随机分配到处理组。独立观察者对处理组进行盲法评估，以减少观察偏差。数据以高质量相机拍摄的照片形式展示，清晰有序地显示动物的头发再生情况。数据包括不同组别小鼠处理前后的头发长度[22]。采用单因素方差分析（ANOVA）进行数据分析，随后进行Tukey事后检验以比较多组间差异[26]。由于样本量较小（每组3只），分析具有探索性，所有统计结果仅用于描述性分析，以识别潜在趋势而非得出确定性结论。单因素方差分析用于整体评估处理组间的可观察变异是否超过组内变异。必要时进行Tukey事后比较以描述组间相对差异。然而，所有推断统计结果（包括p值）仅作为可能效应的探索性指标，不应解释为统计显著性。
2.5 伦理考虑
本研究获得了Kabarak大学研究伦理委员会（KUREC-080524）的伦理审查批准，并获得了国家科学技术创新委员会（NACOSTI）的许可（研究许可证号NACOSTI/P/24/39919）。所有涉及小鼠的程序都设计为尽量减少伤害和痛苦。实验方案是非侵入性的，首先进行皮肤刺激测试以确保动物不会受到毒性影响。实验在持证且有经验的实验室人员监督下进行，并事先获得了伦理批准。按照2012年《防止虐待动物法》的要求进行适当记录。实验结束后，动物被安乐死并通过焚烧安全处理，尽量减少对参与实验的小鼠的伤害。
3. 结果
迷迭香精油的提取率为2.3%（重量/重量），而蓖麻油的提取率为27%。单味的迷迭香油（R. officinalis oil）、单味的蓖麻油（R. communis oil）以及迷迭香油和蓖麻油组合的实验组从治疗第14天开始表现出明显的、渐进性的头发生长增加，这与头发生长周期的生长期（anagen phase）的开始是一致的。特别是使用迷迭香-蓖麻油配方的组别显示出最高的头发生密度，这体现在其更优的头发生长评分上。单因素方差分析（one-way ANOVA）表明各组之间存在差异（p < 0.0001，探索性分析）。Tukey的事后分析显示，组合治疗组和2%米诺地尔组（2% minoxidil group）的头发生长显著优于阴性对照组（p < 0.001）。各组与阴性对照组的平均头发生长长度、再生评分、描述性评分以及探索性p值见表1。迷迭香油组也显示出头发生长的增加（p < 0.001），而蓖麻油组与对照组相比没有显著差异（p > 0.05）。组合组与米诺地尔组之间没有明显差异（p > 0.05）。所有治疗组之间的成对比较及探索性解读见表2。
表1. 经过28天局部治疗后小鼠的头发生长参数。
| 组别 | 平均头发长度（均值 ± 标准差[mm] | 头发生长评分 | 描述性评分 | 与阴性对照组的比较 | p值（探索性） |
|----------------|----------------------|------------------|------------------|------------------|----------------|
| 迷迭香油（R. officinalis）| 12.68 ± 0.25 | 4 | III型 | 头发生长增加 | (p < 0.001) |
| 蓖麻油（R. communis） | 10.10 ± 0.22 | 4 | III型 | 与对照组相当 | (p < 0.998) |
| 迷迭香油-蓖麻油组合 | 12.88 ± 0.79 | 5 | IV型 | 显著增加 | (p < 0.001) |
| 2%米诺地尔（阳性对照） | 13.06 ± 0.21 | 5 | IV型 | 显著增加 | (p < 0.001) |
| 阴性对照 | 10.58 ± 0.38 | 3 | II型 | 基线 | _ |
表2. 治疗组间平均头发长度的成对比较及探索性解读。
| 比较 | p值 | 探索性解读 |
|----------------|------------------|------------------|
| 迷迭香油-蓖麻油组合 vs 阴性对照 | < 0.001 | 表明存在差异 |
| 米诺地尔 vs 阴性对照 | < 0.001 | 表明存在差异 |
| 迷迭香油 vs 阴性对照 | < 0.001 | 表明存在差异 |
| 蓖麻油 vs 阴性对照 | 0.60 | 无显著差异 |
| 迷迭香油 vs 蓖麻油组合 | < 0.001 | 表明存在差异 |
| 迷迭香油 vs 米诺地尔 | 0.78 | 无显著差异 |
| 蓖麻油 vs 米诺地尔组合 | 0.97 | 无显著差异 |
**注：** 由于样本量较小（每组n = 3），p值仅为探索性结果，应谨慎解读。所有比较均采用Tukey的诚实显著差异（HSD）检验，在单因素方差分析后进行。在整个研究期间，所有治疗组的头发生长都有所进展，其中组合治疗的效果优于单一提取物。表1展示了迷迭香油组（图1）、蓖麻油组（图2）和组合治疗组（图3）在28天内头发生长的宏观图像。
**讨论：**
本研究显示，迷迭香油和蓖麻油的局部应用在小鼠模型中具有促进头发生长的作用。观察到的效果与先前的研究结果一致，表明迷迭香油可能在实验条件下支持头发生长[8]。值得注意的是，两种油的组合比单独使用时表现出更强的头发生长效果，这可能表明在当前研究条件下存在叠加或协同效应。迷迭香油的生物活性可能归因于其植物化学成分，包括12-甲氧基肉桂酸和肉桂酸。这些化合物具有抗氧化和潜在的抗雄激素特性。有研究表明，迷迭香衍生物可能通过抑制5α-还原酶（将睾酮转化为二氢睾酮DHT的酶）来影响头发生长途径，而DHT与毛囊萎缩有关[27]。此外，抗氧化活性可能减少毛囊中的氧化应激，这是导致脱发的已知因素之一。先前的实验证据还表明，迷迭香油可能改善外周血液循环，从而促进营养物质向毛囊的输送[11, 28]。使用迷迭香油的组别出现了轻微的皮肤刺激反应，这与早期报告一致，即迷迭香油可能在敏感个体中引起局部刺激[29]。这些反应可能与天然成分如柠檬烯、芳樟醇和肉桂醇有关，它们可能在易感个体中作为接触性过敏原[30]。这些观察结果表明，尽管迷迭香油具有与头发生长相关的生物活性，但在局部应用时需考虑其潜在的刺激作用。相比之下，蓖麻油的头发生长效果相对较弱，这可能与它的物理化学性质有关，尤其是其高粘度可能限制了其渗透皮肤的能力并减少了与深层毛囊结构的相互作用[31, 32]。然而，蓖麻油仍可通过其润肤和调理作用促进头发生长。其主要成分蓖麻油酸被认为有助于保持头皮水分，并通过提高头发纤维的柔韧性来减少头发断裂。此外，蓖麻油中的欧米伽脂肪酸在一些营养研究中与改善头发质量和密度有关[13, 33]。重要的是，蓖麻油通常被认为是无刺激性的，且具有适合局部使用的良好安全性[34, 35]。迷迭香油和蓖麻油的组合比单独使用任何一种油都表现出更强的头发生长效果，并且减少了刺激反应的发生。这可能是由于迷迭香油在蓖麻油基质中的稀释作用，从而降低了刺激性成分的浓度同时保持了生物活性。此外，蓖麻油的存在可能通过降低粘度并改善迷迭香成分的皮肤分布来提高其涂抹性和吸收性。组合组中没有出现刺激反应，表明配方效果可能同时影响了疗效和耐受性。需要注意的是，本研究是在受控的实验条件下进行的，样本量较小，因此这些发现应被视为生物活性的初步证据，而非确证性结果。样本量有限降低了统计功效，并限制了结果的普遍性。未来的研究应包括更大的样本量、剂量优化以及机制研究，如毛囊的组织学分析和头发生长阶段的评估（生长期/休止期比例）。这样的研究将提供关于这些植物基配方疗效和作用机制的更可靠证据。
**5. 研究局限性：**
本研究存在几个重要的局限性，需要在解读结果时予以考虑。首先，这是一项初步的体内筛选研究，样本量较小（每组n = 3），这限制了统计功效并增加了第二类错误（Type II error）的风险。由于研究旨在生成探索性生物数据而非确认疗效，因此没有进行正式的样本量计算或功效分析。其次，尽管某些治疗组间观察到了差异，但样本量小和动物模型的固有生物学变异性限制了结果的稳健性和普遍性。第三，该研究是在小鼠模型中进行的，因此结果不能直接外推到人类生理或临床情况，特别是在涉及复杂免疫和激素机制的脱发性情况下。第四，虽然使用了宏观头发生长评估和头发长度测量，但未进行更客观的终点评估，如毛囊的组织学评估（如生长期/休止期比例）和头发生长的分子标志物，这限制了机制的解释。最后，局部吸收的潜在变异性和动物间的差异可能影响了观察到的反应。由于样本量小且缺乏组织学或分子终点，机制结论仍具有推测性。尽管存在这些局限性，该研究提供了支持测试植物提取物生物活性的有用初步证据，并强调了需要进一步进行大规模、机制性的以及最终的临床研究来验证其疗效和安全性。
**6. 结论：**
在本实验条件下，迷迭香油和蓖麻油的组合在小鼠模型中显示出促进头发生长的趋势。组合治疗的效果优于单一治疗，并且与2%米诺地尔的效果相当。然而，这些发现是初步的，受到样本量小和临床前性质的局限。需要进一步的研究，包括更大的样本量、详细的机制评估和临床试验，以确认疗效和安全性。总体而言，这些结果提供了初步的实验证据，表明迷迭香油和蓖麻油的组合在实验条件下可能具有促进头发生长的潜力，值得进一步研究。
**作者贡献：**
A.M.、E.O.、R.M.和F.O.参与了研究的设计。A.M.、R.M.和F.O.收集了实验室数据。所有作者都参与了数据分析。初稿由E.O.完成，所有作者都参与了手稿的修订。
**致谢：**
人工智能仅用于手稿修订过程中的语言编辑和格式化辅助。没有使用AI生成的内容进行数据分析、解释或科学结论的得出。作者感谢Zablon Malango先生在提取工作上的协助，以及Vashty Koech女士和Titus先生在体内头发生长促进效应测定中的帮助。
**资金：**
本手稿未接受任何资助。
**利益冲突声明：**
所有作者声明没有利益冲突。
**数据可用性：**
支持本研究结果的数据可向相应作者索取。
