AaHog1是一种高渗透压甘油反应激酶,在引起中国山药黑斑病的病原真菌Alternaria alternata中,它参与了该真菌的生长、抗逆性以及致病性的形成

时间:2026年5月21日
来源:Physiological and Molecular Plant Pathology

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蒋立雄|马龙龙|龚建平|李宣章|杨庆祥|李朝阳河南师范大学生命科学学院,新乡,453007,中国摘要山药(Dioscorea opposita Thunb.)是一种具有重要经济价值的作物,但其大规模种植受到黑斑病的严重限制。然而,关于山药黑斑病的研究仍远落后于其他真菌性植物病害的

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蒋立雄|马龙龙|龚建平|李宣章|杨庆祥|李朝阳
河南师范大学生命科学学院,新乡,453007,中国

摘要

山药(Dioscorea opposita Thunb.)是一种具有重要经济价值的作物,但其大规模种植受到黑斑病的严重限制。然而,关于山药黑斑病的研究仍远落后于其他真菌性植物病害的研究。HOG1-MAPK信号通路在调节植物病原真菌的致病性方面起着关键作用。在这项研究中,我们对引起山药黑斑病的病原菌Alternaria alternata中的AaHog1基因进行了功能分析。序列分析显示,AaHog1编码一种含有典型S-TKc结构域和保守磷酸化位点的355个氨基酸的蛋白质,并与其他丝状真菌的Hog1同源基因具有高度序列同源性。靶向删除AaHog1显著抑制了A. alternata的菌丝生长、分生孢子萌发和分生孢子形成。ΔAaHog1突变体对高渗胁迫的耐受性降低,但对细胞膜和细胞壁损伤剂以及氧化胁迫的抵抗力增强。此外,AaHog1的缺失显著削弱了真菌的侵入能力、附着器形成和致病性。转录组分析进一步表明,AaHog1的缺失干扰了多种生物过程,包括MAPK信号通路、碳氮代谢以及与致病性相关的代谢产物的合成。总体而言,本研究证明了AaHog1A. alternata中作为核心调控基因的作用,为进一步阐明山药黑斑病的分子机制奠定了理论基础并提供了潜在的分子靶点。

引言

作物病害是全球农业生产的主要限制因素[1]。植物病原真菌导致了70%以上的作物病害,严重威胁着作物的产量和质量。在严重的流行季节,真菌病害通常会导致40%–50%的产量减少,在极端情况下甚至会导致作物完全失败。此外,病原真菌产生的霉菌毒素会污染农产品,影响食品安全,从而对人类健康构成重大风险[[2], [3], [4]]。植物病原真菌具有很强的环境适应性和复杂的致病调控网络[5]。这些病原体采用多种感染策略,包括孢子传播和在土壤中的长期存活。同时,它们分泌分解细胞壁的酶、毒素和多种次级代谢产物,破坏宿主的结构完整性并干扰植物的生理代谢[6]。这些病理事件共同引发了典型的病害症状,如黄化、组织坏死和器官腐烂,从而促进真菌在宿主组织内的定殖和持续增殖。Alternaria属包含了一组具有广泛地理分布和高致病性的重要经济作物病原真菌。该属的成员具有灵活的生活方式,包括腐生、内生和寄生,并能够定殖超过200种植物,包括主要谷物和蔬菜。它们经常在田间种植的作物中引起叶斑病和其他毁灭性病害[7]。值得注意的是,许多由Alternaria属产生的霉菌毒素具有致畸、致癌和致突变特性,这显著加剧了对农业生产和粮食安全的潜在风险[8]。
植物病原真菌的感染受到复杂的信号转导途径的严格调控。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联在真核生物中高度保守,是其中的核心调控成分。该三级信号系统由MAPKKK、MAPKK和MAPK激酶组成,能够捕获来自环境胁迫和宿主相互作用的信号,并调节多种重要的真菌生理活动,从生长和发育到形态发生、胁迫耐受性和致病性[9,10]。因此,MAPK级联对于探索真菌致病性的分子调控机制至关重要。Hog1基因作为MAPK途径的关键下游激酶,最初在Saccharomyces cerevisiae中被鉴定。Hog1蛋白在高渗胁迫反应中起核心调控作用,因为它促进细胞内甘油的积累——这一过程对于稳定细胞膨压压力和使真菌细胞适应并存活于不利的外部环境至关重要[11]。此外,Hog1还参与调节对各种非生物胁迫(如氧化损伤和高温胁迫)的反应,这反映了其在不同真菌物种中的高度进化保守性和功能多样性[12]。越来越多的证据表明,Hog1同源基因在植物病原真菌中广泛存在,具有保守的核心功能以及物种特异性的生物学作用。例如,在Fusarium graminearum中,FgHog1调节菌丝发育、对渗透压、氧化和细胞壁胁迫的耐受性以及致病性[13]。在Parastagonospora nodorum中,删除Hog1基因显著抑制了分生孢子形成,降低了其对小麦的致病性,并改变了真菌对药物的抗性和对环境胁迫的适应性[14]。在A. alternata(梨的病原菌)中,AaHog1对于附着器的形成、胁迫耐受性和致病性是不可或缺的[15]。同样,在Botryosphaeria dothidea中,敲除BdHog1完全消除了孢子形成,降低了致病性,并增加了对渗透压胁迫的敏感性[16]。
中国山药是Dioscorea属的一种多年生攀缘植物,在中国是一种有悠久种植历史的传统药用和食用作物[17]。在全球范围内,它排名第四重要的块茎作物,在某些非洲地区作为主食[18,19]。山药块茎富含淀粉、多糖、氨基酸和多种矿物质营养素。其生物活性成分,包括多糖和皂苷,具有多种生理功能,如增强免疫力、抗氧化能力和调节血糖[20,21]。河南省是中国山药的主要生产区。特别是来自焦作(34°48′16″-35°29′30″ N, 112°32′48″-113°39′45″ E)的‘Tiegun’山药以其出色的品质而闻名,被视为传统中药和优质食品的优质资源[17,22]。长期的无性繁殖会导致品种退化、抗逆性减弱以及病虫害(尤其是真菌病害)的频繁发生,造成严重的经济损失和品质下降。A. alternata是导致山药黑斑病的主要病原真菌[22,23]。这种病原菌主要感染山药叶片,产生不规则的深棕色病斑。在严重感染的情况下,叶片黄化和提前落叶现象常见,这会显著降低山药的产量和商业价值。目前,黑斑病已成为限制中国山药产业可持续发展的关键因素。
迄今为止,关于中国山药生长过程中病原真菌的研究仍然不足,其背后的致病机制尚未完全阐明。鉴于MAPK途径在疾病发展中的重要作用,本研究首次对A. alternata中与中国山药相关的Hog1同源基因进行了功能分析,并揭示了其在山药宿主-病原体相互作用中的独特作用。总体而言,这些发现丰富了关于感染块茎作物的病原真菌的分子机制研究。

章节片段

菌株和培养条件

野生型(WT)菌株A. alternata HB7之前是从具有典型黑斑病症状的‘Tiegun’山药病叶中分离得到的[23]。在本研究中,所有真菌菌株均在含有200 g/L马铃薯、20 g/L葡萄糖和18 g/L琼脂粉的土豆葡萄糖琼脂(PDA)培养基上常规培养。对于相关处理,PDA培养基添加了不同的化学试剂,所有真菌培养物均在28 °C的恒定温度下培养。Escherichia coli DH5α

AaHog1的序列分析

AaHog1基因的全长cDNA为1068 bp,编码一个355个氨基酸的多肽。使用ExPASy在线工具进行的理化特性分析显示,AaHog1蛋白的预测分子量为40.79 kDa,理论等电点(pI)为5.45。在AaHog1蛋白序列中未检测到跨膜结构域。蛋白质不稳定性指数计算为36.24,平均疏水性(GRAVY)为−0.264,表明

讨论

作为MAPK信号级联的核心组成部分,Hog1基因在真核生物中执行进化上保守但在功能上有所差异的调控作用,涉及胁迫适应、生长和发育以及致病性。Hog1的生物学作用已在多种模式生物中得到广泛研究,包括酵母和多种丝状真菌。然而,在A. alternata中,AaHog1基因的独特调控功能

结论

总之,本研究阐明了AaHog1基因在A. alternata(山药黑斑病的致病菌)的生长和发育、环境胁迫耐受性和致病性中的核心调控作用。我们初步阐明AaHog1通过调节多种代谢途径(包括MAPK信号级联、碳氮代谢和致病因子的合成)来发挥其调控作用。这项研究扩展了当前对

CRediT作者贡献声明

蒋立雄:撰写——原始草稿。马龙龙:研究。龚建平:研究。李宣章:研究。杨庆祥:资金获取、方法学。李朝阳:概念构思、资金获取、方法学、监督、撰写——审阅与编辑。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能会影响本文所述工作的竞争性财务利益或个人关系。

致谢

本研究得到了中国国家重点研发计划(2023YFD1600603)和河南省高等教育重点研究计划(24A210016)的资助。

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