寄生虫病是爬行动物中一个重要但经常被忽视的健康问题，其后果不仅限于个体健康问题，还涉及更广泛的生态和保护问题。研究人员报告了一例从印度尼西亚进口的雄性红尾绿树蛇（Gonyosoma oxycephalum），在购买后隔离检疫期间一个月后死亡，除短暂厌食外无任何疾病迹象。该蛇死亡后，其主人观察到一条蠕虫状寄生虫从蛇口腔中逸出，遂将动物送交尸检。通过形态学和DNA分析（18S核糖体核糖核酸，18S rRNA）确认了40个五口虫纲（Pentastomida）物种东方舌状虫（Raillietiella orientalis）的高度感染。此外，组织学检查揭示了幼虫移行的宏观和组织学证据。该病例代表了红尾绿树蛇中首次记录的感染，也是欧洲少数几例东方舌状虫感染报告之一。该病例说明了在不进行充分进口前健康筛查的情况下，通过外来宠物贸易引入入侵性寄生虫的潜在风险。尽管该寄生虫在欧洲生态系统中建立的风险仍不确定，但此类引入可能对圈养爬行动物、动物园收藏及本地动物群构成挑战。此外，共感染可能改变疾病进程并加剧五口虫感染的致病性。
五口虫纲（Pentastomida）是一类与甲壳类动物亲缘关系较近的基干谱系内寄生虫，主要以爬行动物作为终末宿主（definitive host）。尽管其化石记录可追溯至晚寒武纪（约5亿年前），但在爬行动物病理学背景下，该类群的研究仍相对不足。五口虫遵循异宿主生活史（heteroxenous life cycle），涉及多种中间宿主，包括哺乳类、啮齿类、蜥蜴类、无尾类、鱼类和昆虫等。入侵性五口虫病属于正在削弱全球本地爬行动物种群的新兴传染病之一。在此背景下，东方舌状虫（R. orientalis）以其广宿主范围（euryxenous host range）而闻名，并已报道跨大陆传播。在佛罗里达州——一个因气候适宜而成为入侵物种和新兴传染病热点地区——该寄生虫最初在通过宠物贸易引入的缅甸蟒（Python bivittatus）中被发现，此后已在超过18种本地蛇类中建立感染。
东方舌状虫与其他舌状虫科（Raillietiellidae）物种类似，以蟑螂（Blattodea）作为第一中间宿主。实验和野外观察进一步提示其涉及两栖类和爬行类作为第二中间宿主或转续宿主（paratenic host）的复杂多宿主生活史。鉴于蛇类主要以脊椎动物为食，无尾类、爬行类和小型哺乳动物被认为在传播动态中发挥特别重要的作用。近年来，东方舌状虫在欧洲圈养食虫性爬行类中也被记录为终末宿主，包括德国的一例米勒避役（Triocerus melleri）和比利时的一例豹纹避役（Furcifer pardalis）。这些案例引发了对该寄生虫生活史及其在当前认知范围外建立可能性的疑问。
红尾绿树蛇（Gonyosoma oxycephalum）是一种原产于东南亚的游蛇科（Colubridae）物种，栖息于树栖生态位，捕食蝙蝠、啮齿类和鸟类。尽管该物种较为常见，但关于其内寄生虫群落的了解相对有限，现有报告主要局限于东南亚游蛇科的其他物种。由于其引人注目的外观，红尾绿树蛇是外来宠物贸易中的热门物种，大量个体直接来源于野生种群。
本研究介绍了野生捕获红尾绿树蛇中东方舌状虫与Kalicephalus sp.严重共感染的首例记录，该宿主物种此前未被报道过东方舌状虫感染，也是欧洲迄今记录的第三例。除记录宿主新颖性外，该病例报告还提供了感染全身病理学的新见解，正如组织学分析所证明的。这些发现揭示了由于寄生虫体移行（somatic parasite migration），东方舌状虫导致多器官广泛组织损伤，从而凸显了该寄生虫的致病潜力。此外，该病例强调了隔离检疫期、常规监测和早期检测被忽视寄生虫感染的重要性，这可能对爬行动物和人类健康具有意义。鉴于红尾绿树蛇的内寄生虫群落目前几乎未知，提供该方面的详细数据对于理解宿主-寄生虫动态至关重要。通过详细描述器官影响和共感染后果，该报告为未来关于宿主-寄生虫相互作用、致病机制以及与野生动物贸易相关的入侵性寄生虫引入潜在生态风险的研究贡献了宝贵知识。
研究人员为开展此项研究所采用的主要关键技术方法包括：对购自捷克爬行动物贸易商、原产于印度尼西亚婆罗洲的野生捕获雄性成体红尾绿树蛇进行病例描述和尸检；病理学检查、组织学分析（苏木精-伊红染色，H&E）和微生物学培养（包括哥伦比亚羊血琼脂、麦康凯琼脂和沙保弱葡萄糖琼脂）；寄生虫学检查，包括直接生理盐水粪便涂片（DSFS）和Sheather糖溶液浮聚-沉淀法（比重=1.27）；五口虫鉴定、DNA提取及聚合酶链式反应（PCR）扩增（针对18S小亚基核糖体RNA基因，使用五口虫特异性引物对Pent629F-Pent1011R），产物经ExoSAP-IT纯化后进行双向测序，通过基本局部比对搜索工具（BLAST）与GenBank数据库比对，并采用邻接法（Neighbor-Joining）构建系统发育树（Tamura-Nei替代模型，1000次bootstrap重复）；以及扫描电子显微镜（SEM）分析（样本经戊二醛固定、锇酸后固定、乙醇梯度脱水、临界点干燥和镀金处理，于Philips XL30扫描电镜下观察）。
研究结果部分呈现如下：
形态学与分子鉴定结果
尸检共发现40条成体五口虫，其中雄性19条，雌性21条。典型的两性异形（sexual dimorphism）明显：雄性体长8-11毫米（平均9.5毫米），雌性体长33-65毫米（平均49毫米）。粪便样本中检测到的胚胎卵具有 cephalobenida 目的形态特征，幼虫显示深口腔叉（buccal furca），从而与孔头虫目（Porocephalida）成员相区分。胚胎卵呈活跃运动状态，长度97.57微米。雄虫标本的显微镜检查显示其具有东方舌状虫典型的隆起网状结构和管状交合刺（spicules）。扫描电镜图像首次记录了雄性东方舌状虫的表面细微结构。基于18S rRNA序列的比较遗传分析显示，当前寄生虫与东方舌状虫具有100%序列同一性，从而确认了形态学鉴定结果。
寄生虫分布与组织病理学结果
尸检发现40条成体五口虫分布于整个体腔。6条雌虫位于气管腔，3条位于气管周，1条位于心包区。肺组织中发现4条雄性和2条雌性。肝被膜表面发现2条雌性和4条雄性。直肠区域有7条雄性。除嵌入肺组织和位于气管内的虫体外，所有五口虫均附着于器官浆膜表面。
组织学分析显示多器官广泛病变。气管中，成虫存在部位可见明显的肉芽肿性浸润导致的黏膜扩张，提示慢性、局灶性破坏宿主反应。肝实质多灶性扩张，存在五口虫幼虫，肉眼可见多灶至融合性病变（"乳白斑"，milk spot）。肠道病变显著，黏膜因寄生虫幼虫扩张并伴有炎症。广布的五口虫卵沉积于所有器官黏膜，提示成虫活跃繁殖及显著的异位卵定位。肺部病变反映直接寄生虫移行和全身炎症溢出，表现为肺泡壁（faveolar walls）弥漫性间质增厚，由淋巴-异嗜性细胞浸润导致。
共感染与继发性发现
此外，线虫Kalicephalus sp.被肉眼观察到嵌入肠黏膜，显示典型的括弧形口囊硬化结构和两性异形。死后粪便检查低度发现Kalicephalus sp.虫卵。肝细菌分离显示普罗威登斯菌（Proteus vulgaris）和铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的重度感染。
在讨论部分，研究人员指出：本病例中观察到的寄生虫负荷值得注意，因为红尾绿树蛇此前未被记录为东方舌状虫的终末宿主，尽管两种物种均原产于东南亚。研究人员认为，捕获、运输和随后圈养维持造成的应激可能导致显著的免疫抑制，加上观察到的共感染等潜在基础疾病，可能加剧了感染的严重程度。值得注意的是，雌性五口虫的大小与其他宿主（如蜥蜴）相比存在显著差异，这凸显了东方舌状虫显著的适应性和表型可塑性（phenotypic plasticity），可能促进其在广泛宿主范围内的感染。雌性远大于雄性，通常表现出高繁殖输出，这也是其流行病学成功的一部分，有助于向以前非地方性流行区域传播。
组织病理学发现与文献中多器官东方舌状虫感染相符，表明高寄生虫负荷导致机械损伤、肉芽肿性炎症和跨器官系统幼虫移行的组合。主人报告的成虫经口腔逸出行为，此前曾被描述为圈养蛇感染五口虫后的应激反应，这些寄生虫倾向于离开应激和/或缺氧宿主。气管寄生虫积聚是否导致生前窒息，抑或死后迁移，尚不明确；但相关组织学发现与其他爬行类宿主五口虫感染和寄生虫感染的肺炎样改变相当。肝实质中五口虫幼虫的存在证明了感染的全身性，这些病灶内幼虫反映了五口虫生活史中的体移行，最终发育为成熟成虫。肝中细菌的分离进一步表明，寄生虫相关组织损伤可能继发细菌感染。
关于诊断方法，尽管采用Sheather糖溶液离心，卵回收率仍明显低于直接粪便涂片。这一观察与Palmisano（2025）的报道一致，其发现Sheather溶液效果显著低于其他浮聚介质（如硝酸钠和硫酸锌），湿片法优于浮聚技术，对东方舌状虫诊断的卵检出率达100%。这种差异可能归因于五口虫卵的物理特性：相对致密、壳厚且常已胚胎化，可能限制其浮聚效率。因此，原生（直接）粪便涂片作为初始诊断步骤具有简便和高敏感性的优势。
Kalicephalus sp.感染最初被视为偶然发现，因为该线虫在鳞翅类中常见且感染常呈亚临床状态。然而，其临床相关性可能取决于感染强度；虽然低负荷可能被耐受，但重度寄生虫负荷已知可导致严重的出血性和坏死性肠炎。本病例观察到的中度感染，以内黏膜肉眼可见病变为特征，可能代表对宿主显著的新陈代谢和免疫消耗。胃肠道蠕虫已被证明可调节宿主免疫环境，常增加继发寄生虫感染的易感性。虽然爬行动物蠕虫感染期间的免疫反应特异性研究目前缺乏，但观察到的五口虫高负荷提示协同病理关系。这些发现意味着Kalicephalus sp.不应被视为背景发现；相反，其存在可能提示免疫反应改变，从而促进了高全身寄生虫负荷的建立。这表明共感染应被评估为相互作用的发病过程，而非孤立状况。
通过宠物贸易的人为迁移代表病原体引入新生态系统的重要机制。当前病例依赖于野生捕获和进口动物的寄生虫感染。这反映了北美近期的发展，感染的宠物贸易蛇类被运输给不知情的购买者。当前国际外来宠物贸易实践中存在的主要问题是，大量组织非法经营，即使贸易合法，异宠医学中的兽医监测也极其有限。在这些条件下，入侵性寄生虫以及其他病原体（如真菌、细菌和病毒）可能发生溢出，不仅在爱好性爬行动物饲养中造成问题，也在保护环境中造成问题——后者通常依赖严格的隔离协议来保护已然脆弱的种群免受新兴传染病侵害。
当外来爬行动物被有意释放或意外逃逸至野外时，它们可能作为此前该地区不存在的寄生虫的储存宿主。东方舌状虫传播和扩散的关键因素是蟑螂作为中间宿主的参与。许多伴人蟑螂的食粪性质提示广泛的潜在合适中间宿主范围。此外，如果感染可在无第二中间宿主或转续宿主参与的情况下发生，则直接食入感染蟑螂可能代表进口爬行动物与欧洲生态系统之间的可行生物学桥梁。这一途径可能有助于解释东方舌状虫在圈养食虫性爬行类中的出现，并可能表明该寄生虫传播生态学的灵活性大于目前假设。
研究结论部分翻译如下：该报告强调了通过全球野生动物贸易引入东方的舌状虫至欧洲的又一病例。虽然在进口自印度尼西亚的红尾绿树蛇中检测到此感染，这引起了爬行动物饲养者和动物学机构的合理关注，但向欧洲野生动物群溢出的风险仍属推测，尤其考虑到对该寄生虫生活史灵活性和传播生态学的了解有限。然而，这种广宿主寄生虫的广泛宿主谱提示，如果与本地动物群接触，存在潜在的感染途径。关键的是，该病例报告强调了此类引入的临床后果可能因共存病原体而加剧。在获得关于野生种群和爬行动物免疫反应的更多数据之前，实施更严格的隔离检疫协议和常规寄生虫学筛查仍是一项关键的预防性措施。进一步的爬行动物生态免疫学研究对于更好地理解共感染如何影响新兴外来物种（neozoan）的成功和致病性至关重要，最终有助于限制其对本地生物多样性的引入和影响。
