胆管癌(CCA)是一种起源于胆道上皮的高度侵袭性异质性恶性肿瘤，预后较差。小檗碱作为一种低毒性的治疗候选药物，其递送仍面临挑战。将其包封于脂质纳米粒中，为提高小檗碱的递送效率与安全性提供了一种前景广阔的、具有良好生物相容性的策略。本研究旨在开发并表征小檗碱负载的纳米结构脂质载体(N-Ber)，并在多种CCA细胞模型中评估其细胞毒性，同时与标准化疗药物顺铂及其纳米制剂(N-Cis)进行比较。研究的次要目标是评估该纳米载体用于潜在注射给药的体外生物相容性。研究人员采用溶剂蒸发法制备纳米粒，以Precirol 5 ATO和油酸为脂质材料，吐温20为稳定剂，并通过动态光散射(DLS)、形貌观察、包封率测定以及在生理(pH 7.4)和模拟肿瘤微环境(pH 5.5)条件下的体外药物释放实验进行表征。细胞毒性评估采用MTT法在三种CCA细胞系(TFK-1、EGI-1和HuCCT1)中进行，同时使用人脐静脉内皮样细胞(Ea.hy926)和人红细胞溶血试验评估安全性。结果显示，N-Ber和N-Cis的平均粒径分别为159.5 nm和146.7 nm，表面电荷为负(−27.95 mV和−50.75 mV)，包封率高(小檗碱：88.8%；顺铂：95.8%)。两种纳米制剂的溶出曲线与游离药物相比均发生显著改变。小檗碱对所有CCA细胞系均表现出强效的细胞毒性(IC500.4–5.2 µM)，效果与顺铂(IC50约10 µM)相当或更优，且纳米包封后活性得以保留。相比之下，在治疗浓度下，N-Ber对内皮细胞的毒性较低且无显著溶血作用(<5%溶血)，而N-Cis在所有测试剂量下均引起明显的溶血。研究表明，N-Ber兼具对CCA细胞的强效杀伤作用和优于N-Cis的生物相容性，其良好的体外数据支持进一步开展体内药效评价。
论文解读
胆管癌(CCA)是一种恶性程度高、预后极差的胆道系统肿瘤，早期症状隐匿，确诊时常已处于晚期，现有以吉西他滨联合顺铂为基础的化疗方案虽可一定程度延长生存，但伴随显著的肾毒性、耳毒性及神经毒性，且肿瘤易产生耐药性，临床疗效受限。天然活性成分小檗碱(Berberine)因具有多靶点抗肿瘤活性及较好的安全性，成为潜在的替代或补充治疗选择，但其水溶性差、口服生物利用度低、易被外排泵排出等缺陷限制了临床转化。纳米结构脂质载体(Nanostructured Lipid Carriers, NLCs)因其高载药量、良好的稳定性及肝靶向潜力，被认为是改善药物递送的理想平台。本研究旨在开发小檗碱与顺铂共载的NLCs，并在多种CCA细胞模型中系统比较其抗肿瘤活性与安全性，以探索NLCs作为CCA治疗载体的可行性。
在研究方法上，研究人员采用溶剂蒸发法制备空白NLCs(NE)、小檗碱负载NLCs(N-Ber)及顺铂负载NLCs(N-Cis)，并以动态光散射(DLS)、扫描电镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱(FTIR-ATR)、粉末X射线衍射(P-XRD)等方法进行理化表征；通过体外释放实验考察药物在不同pH环境下的释放行为；选用TFK-1、EGI-1及HuCCT1三种不同来源的CCA细胞系进行MTT细胞毒性检测；同时以人内皮细胞Ea.hy926和红细胞溶血试验评估载体的生物安全性。
研究结果如下：
理化表征：N-Ber和N-Cis粒径均小于200 nm，分布较窄，表面带负电荷，包封率高，SEM显示颗粒呈球形且表面光滑；FTIR-ATR与P-XRD结果表明药物主要以物理包封形式存在于脂质基质中，小檗碱在载体中由四水合物转变为二水合物，未与载体发生共价相互作用。
体外药物释放：N-Ber和N-Cis在生理pH下均呈缓释特征，且在模拟肿瘤酸性环境中药物释放增加，表明NLCs具有pH响应性释药潜能。
细胞毒性：小檗碱对三种CCA细胞系的IC50为0.4–5.2 µM，活性优于或与顺铂相当；纳米包封后，N-Ber与N-Cis的细胞毒性得以保留，且N-Ber在高浓度下仍保持较低的血管内皮细胞毒性。
安全性评价：N-Ber在有效浓度范围内溶血率低于5%，符合国际安全标准；而N-Cis在所有测试浓度下均引发明显溶血，提示顺铂纳米制剂的安全性仍需优化。
讨论部分指出，NLCs配方中油酸不仅提高药物包封率，还可能借助CCA细胞对脂肪酸的高摄取特性实现靶向递送。N-Ber在保留小檗碱抗肿瘤活性的同时显著降低对正常细胞的毒性，显示出比N-Cis更好的治疗窗口。此外，不同CCA细胞系对小檗碱敏感性存在差异，提示其疗效可能受肿瘤分子特征影响。研究局限性在于缺乏体内药代动力学、组织分布及深入的机制研究。
结论部分强调，本研究成功构建了小檗碱与顺铂的NLCs制剂，其在体外兼具高效抗肿瘤活性与良好生物相容性，为后续体内研究及临床应用奠定了基础。相关成果发表于《Nanotechnology, Science and Applications》，为胆管癌的纳米药物治疗提供了新的思路与实验依据。
