越南养殖鲳鲹（Trachinotus spp.）无乳链球菌（Streptococcus iniae）感染：基于现场的特征鉴定、致病性及抗菌药物敏感性

无乳链球菌（Streptococcus iniae）是海水养殖业中的一种重要细菌性病原体。然而，关于越南鲳鲹养殖中无乳链球菌的现场流行病学数据及群体水平特征分析仍较为有限。本研究采用多养殖场、基于现场的综合研究策略，对越南养殖鲳鲹（Trachinotus spp.）链球菌病暴发进行了调查，整合了流行病学调查、细菌学与分子生物学鉴定、毒力基因谱分析、人工攻毒试验以及抗菌药物敏感性检测。研究人员从多个养殖场和省份的病鱼中共分离获得54株无乳链球菌，结合表型特征、生化谱分析以及物种特异性聚合酶链式反应（PCR）检测结果，证实该病原广泛存在于网箱和池塘养殖系统中。对14个毒力相关基因进行筛查显示，这些分离株具有显著的遗传异质性，提示养殖群体中存在多种循环传播的毒力表型。人工感染试验成功再现了自然病例中观察到的临床症状和组织病理学损伤，代表性现场分离株在实验条件下的半数致死量（LD₅₀）为2.2 × 10⁴ CFU/鱼，表明其具有较高致病性。抗菌药物敏感性试验表明，所有分离株对多西环素和阿莫西林-克拉维酸均完全敏感，但对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑和新霉素表现出较高耐药性，凸显了基于证据实施抗生素使用的重要性。总体而言，这些结果为越南养殖鲳鲹中无乳链球菌病的现场发生提供了直接证据，并系统揭示了该病原的致病性、遗传多样性及抗菌药物耐药特征。

该论文发表于《Aquaculture Reports》，围绕越南北部养殖鲳鲹（Trachinotus spp.）中无乳链球菌（Streptococcus iniae）感染的流行现状、病原学特征、毒力差异、致病能力及药敏特征展开系统研究。鲳鲹是热带与亚热带地区重要的高价值海水养殖鱼类，具有生长快、耐盐范围广、适于集约化养殖等优势，近年来在越南海水养殖产业中发展迅速。然而，伴随养殖规模扩大，细菌性疾病已成为制约产业可持续发展的关键因素。链球菌病是海水养殖中的重要细菌病之一，可引发游泳失衡、突眼、脑膜炎、败血症及多器官出血等严重症状，造成显著经济损失。既往关于S. iniae的研究多基于单次暴发或少量菌株，难以全面反映商业化养殖系统中流行菌群的遗传多样性、毒力潜能与耐药谱。越南此前对该菌在海水鱼中的报道亦较零散，主要局限于个案，缺乏针对鲳鲹养殖体系的多场点、群体水平综合研究。因此，开展本研究对于明确该病原在越南鲳鲹养殖中的流行病学特征、评估其健康风险并为疾病防控和合理用药提供依据具有重要意义。

研究人员于2025年4月至10月对越南北部广宁、海防和宁平3省54个鲳鲹养殖场的疾病暴发开展现场调查，覆盖海水网箱和土池两类养殖模式。研究整合了病鱼采样、细菌分离培养、形态学与生化鉴定、16S rRNA和乳酸氧化酶基因（lctO）物种特异性PCR鉴定、14个毒力相关基因多重PCR检测、代表菌株腹腔注射攻毒、组织病理学观察以及纸片扩散法药敏试验，构建了从现场流行病学到实验室验证的完整证据链。研究表明，S. iniae已在越南北部鲳鲹养殖中广泛分布，且不同毒力表型在多个地区共同流行；代表性分离株具有较强致病性；同时，病原对部分常用抗菌药物已出现明显耐药。上述结论为鲳鲹链球菌病监测、防控及精准治疗提供了基础数据，也提示该产业亟需加强生物安全与抗菌药物管理。

本研究的关键技术方法主要包括：其一，基于54个养殖场、699尾病鲳鲹样本的现场流行病学调查与病原分离；其二，通过常规细菌学、生化鉴定及16S rRNA、lctO基因PCR实现病原确认；其三，采用6组多重PCR对54株分离株的14个毒力相关基因进行谱系化检测并据此划分毒力表型；其四，选择代表性现场菌株开展人工攻毒并计算LD₅₀；其五，结合组织病理学检查比较自然感染与实验感染损伤特征；其六，依据临床和实验室标准协会（CLSI）原则进行13种抗菌药物的敏感性评估。

3.1. Clinical signs, gross lesions, bacterial isolation and identification
研究结果显示，来自54个养殖场的自然发病鲳鲹均表现出典型链球菌病症状，包括厌食、异常游泳、失衡和死亡增加。外观上常见突眼和皮肤、鳍部点状出血；剖检可见脑、肝、肾和肠道明显出血与充血。这一结果说明现场暴发病例具有高度一致的临床与病理表现。流行病学数据显示，采样鱼体重范围为30–615 g，暴发后7 d内累计死亡率约为10%–60%。水温为27.5–33.5°C，其中68.5%的养殖场在≥29°C时发生暴发，且全部暴发集中于4月至10月暖季，提示高温与季节性升温是疾病发生的重要环境背景。

细菌学检查从54个养殖场各获得1株代表性菌株，共54株。菌落在含2% NaCl的胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）上呈小型、圆形、不透明、无色素、边缘整齐特征；镜检为成链排列的革兰氏阳性球菌。生化特征表现为氧化酶阴性、过氧化氢酶阴性、无运动性，且与参考菌株Streptococcus iniae ATCC 29178基本一致。进一步PCR检测中，全部分离株均扩增出约300 bp的16S rRNA片段及约870 bp的lctO片段，从而在分子水平确认全部代表菌株均为S. iniae。该部分结果通过形态学、生化学和分子生物学多重证据证明，越南北部鲳鲹养殖暴发中的主要病原为S. iniae。

3.2. Distribution of virulence-associated genes
研究人员对54株S. iniae分离株的14个毒力相关基因进行了检测。结果表明，pdi、pgm、cpsD和hasA在全部分离株中均可检出，说明这些与多糖去乙酰化、磷酸葡萄糖变位酶功能、荚膜多糖合成和透明质酸荚膜形成相关的基因属于当前流行菌株中的保守毒力成分。simA、scpI、nisF、ykpA和ydfG也具有较高检出率，而cfi检出率最低，sagA和cpsC则呈中等检出水平。这些结果提示，循环菌群在核心毒力因子上具有高度保守性，但在附属毒力因子上存在明显变异。

基于14个毒力基因的有无模式，研究人员将54株分离株划分为5种毒力表型（V1–V5），各表型携带9–13个毒力基因不等，其中V3为最常见表型，占38.9%。进一步分析显示，这些毒力表型在广宁、海防和宁平三地均有分布，未见显著地理聚类现象。该结果说明，在越南北部鲳鲹养殖区内并非单一高毒克隆传播，而是多种遗传背景不同的S. iniae毒力谱系共同循环。这对于疫苗靶点筛选和区域性疾病传播监测具有重要意义。

3.3. Bacterial challenge experiments
为验证现场分离株的致病作用，研究人员选取携带较丰富毒力基因谱的代表株SIQN21–3开展人工攻毒。结果显示，腹腔注射后鲳鲹死亡呈现明确的剂量依赖性：高剂量组（10⁶–10⁷ CFU/鱼）死亡快且累计死亡率高，中等剂量组（10⁴–10⁵ CFU/鱼）死亡程度中等，低剂量组（10²–10³ CFU/鱼）死亡延后且存活率较高，对照组无死亡。统计学分析证实不同感染剂量组间累积死亡差异极显著。

实验感染鱼出现异常游泳、突眼和内脏出血等症状，与自然病例高度一致，说明该代表菌株能够在实验条件下稳定复制现场疾病表型。依据死亡数据计算，SIQN21–3的LD₅₀为2.2 × 10⁴ CFU/鱼，表明其对鲳鲹具有较强致病性。研究人员还从实验感染病鱼脑、肝和肾中再次分离并确认S. iniae，从而满足Koch法则。该部分结果直接证明，现场分离的S. iniae是导致鲳鲹链球菌病暴发的致病因子。

3.4. Histopathological examination
组织病理学检查显示，S. iniae感染可在鲳鲹体内引发广泛的系统性组织损伤。自然感染鱼与实验感染濒死鱼在脑、肝、肾、脾、鳃和肠等多个器官中均出现相似病理改变，而健康对照未见此类病变。最突出的共同特征为血管障碍、炎症反应及实质组织变性，符合败血性疾病的病理过程。

具体而言，脑组织可见血管充血及局灶性出血；肾脏表现为肾小管和肾小球结构破坏，并伴有透明滴积聚与局灶性出血，提示肾组织完整性严重受损；肝脏出现肝血窦扩张、中央静脉充血及肝细胞脂质沉积，说明感染同时导致循环障碍和代谢紊乱；脾脏呈显著充血和炎性改变，符合脾炎表现；鳃丝结构破坏并伴出血充血；肠道可见严重上皮坏死、炎细胞浸润及肠腔细胞碎屑积聚。该部分结果进一步强化了S. iniae感染在鲳鲹中引起全身性败血性病变的判断。

3.5. Antibiotic resistance
药敏试验结果表明，54株S. iniae对13种抗菌药物的反应存在明显差异。多西环素和阿莫西林-克拉维酸均表现为100%敏感，是本研究中最稳定有效的药物。头孢噻肟、头孢呋辛和四环素也保持较高敏感率；阿莫西林、土霉素和氟苯尼考总体上仍具有一定活性。与之相对，甲氧苄啶-磺胺甲噁唑和新霉素的耐药率分别达到61.1%和63%，为最不理想的药物；红霉素和苯唑西林亦存在一定比例耐药或中介敏感菌株。

总体上，96.3%的分离株至少对1种抗菌药物耐药，仅有2株对全部检测药物完全敏感；其中24株表现为多重耐药。该结果说明越南北部鲳鲹养殖中的S. iniae群体已广泛存在耐药现象，经验性选药面临较大失效风险。研究结果强调，在实际生产中应依据药敏结果进行证据支持的精准用药，并减少对高耐药药物的盲目使用。

讨论部分总结
论文讨论指出，本研究通过多养殖场、现场取样和多层次实验验证，较以往单点或少量分离株研究更全面地揭示了越南鲳鲹养殖中S. iniae感染的真实状况。疾病暴发集中在4月至10月，且多发生于较高水温条件，表明升温环境可能通过促进病原增殖传播和削弱宿主免疫而加剧链球菌病风险。自然病例与人工感染在临床表现和组织病变上的高度一致性，巩固了S. iniae作为主要病原的因果证据。

关于毒力机制，讨论部分强调，当前流行菌群既具有保守的核心毒力因子，也具有可变的附属毒力基因组合，提示其致病性具有菌株依赖性。缺乏明显地理聚类说明不同毒力谱系可能已在区域养殖网络中广泛传播。关于致病性评价，LD₅₀处于相关研究报道的较低范围，支持该代表分离株具较高毒力。关于耐药性，研究指出四环素类和部分β-内酰胺类仍可作为较可靠治疗选择，但甲氧苄啶-磺胺甲噁唑和新霉素治疗价值有限。整体而言，论文主张加强季节性监测、规范抗菌药物使用、提升生物安全水平，并将疫苗开发和可持续健康管理作为未来重点方向。

研究结论翻译
综上所述，本研究为越南北部养殖鲳鲹中无乳链球菌（Streptococcus iniae）相关疾病的发生提供了基于现场的证据，并对该病原进行了系统性的群体水平表征。研究结果凸显出在海水养殖中加强疾病监测、实施基于证据的抗菌药物使用以及提升生物安全措施的必要性。未来应优先推动疫苗研发和可持续健康管理策略，以减轻链球菌病对这一快速发展的养殖产业所造成的影响。