消毒并不意味着解毒:尽管饮用水生物膜中的微生物被氯胺和紫外线灭活,内毒素仍会继续积累

时间:2026年5月30日
来源:Journal of Environmental Chemical Engineering

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边一豪|冯静怡|薛阳兴|欧阳青|王军|郭子轩|徐若彤|何迅|唐玉林|张永吉中国同济大学环境科学与工程学院,水污染控制与绿色资源回收国家重点实验室,上海200092摘要来自革兰氏阴性细菌的内毒素越来越多地被认为是饮用水系统中微生物裂解的指标。尽管许多研究已经探讨了悬浮细菌释放内毒素

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边一豪|冯静怡|薛阳兴|欧阳青|王军|郭子轩|徐若彤|何迅|唐玉林|张永吉
中国同济大学环境科学与工程学院,水污染控制与绿色资源回收国家重点实验室,上海200092

摘要

来自革兰氏阴性细菌的内毒素越来越多地被认为是饮用水系统中微生物裂解的指标。尽管许多研究已经探讨了悬浮细菌释放内毒素的情况,但其对饮用水分配系统中生物膜相关过程的影响仍不够清楚。在本研究中,使用浮游大肠杆菌悬浮液来表征消毒引起的内毒素积累,并采用旋转圆盘反应器生物膜系统来评估生物膜对外源内毒素的响应。进一步通过直接RDR生物膜消毒和浓度梯度暴露实验,将消毒引起的内毒素释放与生物膜相关反应联系起来。在受控条件下比较了氯胺和紫外线(UV)消毒的效果。液体相中的可测量内毒素积累随着初始细菌浓度的增加而增加。当初始浓度达到1.2×10^5 CFU/mL时,5 mg/L的氯胺在300分钟后使内毒素浓度增加到3.42 EU/mL。360 mJ/cm的紫外线处理产生的可检测内毒素水平较低,为1.63 EU/mL。氯胺导致氧化性膜损伤和钾离子快速泄漏,而紫外线则导致DNA损伤、培养能力迅速丧失以及膜破坏延迟。浓度梯度暴露实验表明,低EU/mL的内毒素仅引起有限的短期高细菌群落(HPC)变化,而在中等和高负荷暴露下则出现更明显的响应。在500 EU/mL的高负荷挑战下,生物膜α多样性减少了35%以上。群落组成也发生了变化,芽孢杆菌减少,而包括酸食菌(Acidovorax)和杆状菌(Caulobacter)在内的革兰氏阴性菌属增加。总体而言,氯胺导致持续的内毒素释放,而紫外线虽然降低了可检测的内毒素水平,但并未消除内毒素活性。

引言

内毒素是革兰氏阴性细菌外膜中的脂多糖成分,在细胞死亡或裂解时释放到环境中[1]。它具有强烈的致热性和促炎活性,可引发发热、炎症反应甚至败血症休克,对人类健康构成严重威胁[2]。尽管内毒素在空气颗粒和医疗用水系统(如透析液)中的暴露已得到广泛研究,但在饮用水中的存在却较少受到关注。通过饮用水摄入内毒素仍可能对健康造成潜在风险,特别是对于婴儿或免疫系统受损的人群,因为即使在低浓度下,脂多糖也能引发炎症反应[2][3]。目前国际上尚未制定饮用水中内毒素的强制性限值,但许多研究强调了加强对其产生和迁移监测的必要性[4]。
氯胺和紫外线消毒是饮用水系统中广泛应用的两种消毒方法。这两种方法分别代表了典型的化学和非化学消毒策略。游离氯和氯胺都是饮用水系统中常用的消毒剂。在某些地区,游离氯残余物在整个分配网络中持续存在;而在其他地区,由于氯胺的稳定性更强且残余时间更长,因此作为二次消毒剂使用。本研究选择氯胺作为代表性化学消毒剂,以评估在持续残余消毒条件下的内毒素释放[5]。氯胺主要通过氧化细胞膜和蛋白质来使微生物失活[6]。也有研究表明,氯胺降解游离内毒素的能力有限,导致释放的内毒素在水中长时间存在[1][7]。相比之下,紫外线消毒主要通过诱导DNA损伤(如嘧啶二聚体形成)来使微生物失活,而不是通过常规饮用水处理剂量下的氧化作用。然而,紫外线对内毒素分子没有直接影响,常规剂量往往无法降低内毒素水平,有些研究甚至报告其活性保持不变[8]。综述表明,氯胺、游离氯和紫外线通常对内毒素的去除效率较低,而臭氧和其他高级氧化工艺的去除效率较高,通常超过70%[9][10]。
由微生物、胞外聚合物物质和无机颗粒组成的生物膜在分配系统中普遍存在。这些生物膜为微生物提供了保护性栖息地,增强了其对消毒剂的抵抗力,并能在环境压力下释放细胞内成分[11][12]。在氯胺消毒下,生物膜中的氨氧化细菌表现出耐受性,常常导致氯胺残余物迅速降解和随后的微生物再生[13]。研究表明,有无氯胺残余的系统中微生物群落结构存在明显差异。暴露于氯胺下的生物膜通常多样性较低,特定细菌群落富集[5][14]。这些发现表明,生物膜不仅影响细菌的失活,还可能改变内毒素的释放动态。
先前的研究比较了不同消毒方法对大肠杆菌内毒素释放的影响[1],但大多数研究仅限于悬浮细胞或培养基。然而,在受控条件下进行机制比较以及在饮用水生物膜中的生态相关观察仍然不足。在本研究中,使用简化的浮游大肠杆菌模型在严格控制条件下量化了消毒引起的内毒素释放动力学,因为大肠杆菌是一种具有明确脂多糖结构的代表性革兰氏阴性细菌,并且已被广泛用于消毒研究。同时,使用旋转圆盘反应器(RDR)以自来水为培养基,在与分配系统相关的低营养和流体剪切条件下培养多物种饮用水生物膜,以检查是否也能在生物膜相关系统中观察到与内毒素相关的响应。为了解决这一空白,本研究旨在将消毒过程中的内毒素释放与生物膜相关过程联系起来。首先,使用浮游大肠杆菌作为受控的革兰氏阴性模型,比较氯胺和紫外线消毒过程中的内毒素释放。其次,将成熟的RDR生物膜直接暴露于氯胺和紫外线下,以确定消毒引起的钾离子泄漏和内毒素释放是否也会发生在生物膜相关微生物群落中。第三,将RDR生物膜暴露于外源内毒素的浓度梯度下,以区分接近消毒产生的低EU/mL暴露和高负荷挑战暴露。这种综合设计为饮用水系统中微生物失活、内毒素释放和生物膜响应之间提供了更清晰的实验联系。
这一空白限制了我们对消毒风险的全面理解,特别是在考虑生物膜相关微环境的复杂性时。为了解决这个问题,本研究构建了一个模拟的饮用水生物膜,并比较了氯胺和紫外线消毒在饮用水相关条件下的内毒素积累情况。本研究不是重新定义已知的氯胺和紫外线的主要失活机制,而是比较了它们在饮用水相关条件下的内毒素积累模式,并进一步评估了生物膜群落对释放内毒素的潜在响应。这项工作旨在为优化分配系统中的消毒策略提供科学支持,并有助于保障饮用水安全。

章节摘录

实验设计

本研究使用了两种实验系统。氯胺和紫外线消毒实验使用浮游大肠杆菌悬浮液进行,以评估在受控细菌条件下的内毒素积累。这种单菌株模型并非旨在再现饮用水生物膜的分类复杂性,而是为了提供一个可重复的革兰氏阴性参考系统,以便比较不同条件下的内毒素释放途径

氯胺和紫外线消毒对不同初始浓度下大肠杆菌内毒素释放的影响

液体相中的LAL可检测内毒素活性随着大肠杆菌初始浓度的增加而增加。在1500 CFU/mL时,消毒仅导致低且稳定的内毒素释放。在120,000 CFU/mL时,内毒素释放急剧增加,表明在低剂量下裂解不完全,高密度系统中的内毒素库更大(图2)。在0.2-5 mg/L的氯胺浓度下,两种细菌水平下的内毒素活性均呈几乎线性增加(图2a)。低剂量导致

结论

本研究调查了氯胺和紫外线消毒过程中的内毒素释放,并评估了饮用水生物膜群对外源内毒素暴露的响应。LAL可检测内毒素活性随着初始细菌浓度的增加而增加,在5 mg/L的氯胺作用下300分钟后达到3.42 EU/mL,而紫外线处理通常导致可检测内毒素水平低于氯胺,在测试的辐照范围内最低水平为360 mJ/cm

CRediT作者贡献声明

唐玉林:撰写 – 审稿与编辑。何迅:撰写 – 审稿与编辑。张永吉:撰写 – 审稿与编辑、验证、资源管理、项目协调。王军:撰写 – 审稿与编辑。欧阳青:撰写 – 审稿与编辑。徐若彤:撰写 – 审稿与编辑。郭子轩:撰写 – 审稿与编辑。边一豪:撰写 – 初稿撰写、调查、数据分析、概念构思。薛阳兴:撰写 – 审稿与编辑。冯静怡:撰写 – 审稿与编辑,

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能会影响本文工作的竞争性财务利益或个人关系。

致谢

本研究得到了国家自然科学基金(52070145和51778453)的支持。我们感谢TargetMol(美国)提供的材料支持以及Figdraw提供的绘图支持。

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