噬菌体联免疫吸附法：突破Aβ42超灵敏检测新纪元

阿尔茨海默病关键生物标志物β-淀粉样蛋白42（Aβ42）在血液中浓度极低，其临床前筛查面临技术瓶颈。本研究通过杂交瘤筛选获得高亲和力单克隆抗体2E7与3B6，分子对接显示二者分别靶向Aβ42的N端与C端，形成非竞争性结合模式。基于T4噬菌体展示系统，构建了同时展示81个2E7单链抗体（scFv）和203个辣根过氧化物酶（HRP）的双功能噬菌体（T4@scFv@HRP），进而建立以3B6为捕获抗体、噬菌体同时承担识别与信号放大功能的PLISA法。该技术检测线性范围达1.56–100 pg/mL（R2=0.9926），检测限低至0.89 pg/mL，灵敏度较传统ELISA提升17倍，为血液超低丰度蛋白分析提供了创新平台技术。

针对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）关键生物标志物——β-淀粉样蛋白42（Aβ₄₂）在血液中浓度极低导致的临床前筛查技术难题，研究人员通过杂交瘤筛选获得两种高亲和力单克隆抗体（monoclonal antibodies, mAbs）2E7和3B6。分子对接与表位鉴定表明，2E7的互补决定区（complementarity-determining regions, CDRs）靶向Aβ₄₂的N端，而3B6靶向其C端，形成非竞争性结合模式。基于T4噬菌体展示系统，团队成功构建了一种双功能展示噬菌体（T4@scFv@HRP），其表面同时整合了81个2E7的单链抗体片段（single-chain fragment variables, scFv）和203个辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase, HRP）。以此为核心开发的噬菌体联免疫吸附法（phage-linked immunosorbent assay, PLISA），以mAb 3B6作为捕获抗体，双展示噬菌体同时承担目标识别（通过scFv）与信号放大（通过HRP）功能。实验数据显示，PLISA检测Aβ₄₂在1.56–100 pg/mL范围内呈现优异线性（R² = 0.9926），检测限（limit of detection, LOD）低至0.89 pg/mL，灵敏度较传统夹心酶联免疫吸附法（sandwich enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）提升17倍（ELISA的LOD为15.51 pg/mL）。该研究建立的PLISA技术为血液中超低丰度蛋白质分析提供了创新方法，可视为ELISA的升级版，理论上通过更换噬菌体展示抗体即可应用于任何目标多肽或蛋白的检测。