FAM114A1通过双重机制驱动三阴性乳腺癌免疫逃逸：靶向PI3K/AKT通路与E2F4相分离的新视角

本研究针对三阴性乳腺癌（TNBC）免疫检查点阻断（ICB）疗法耐药性难题，通过CRISPR激活（CRISPRa）筛选发现FAM114A1是介导免疫逃逸的关键因子。机制上，FAM114A1通过结合p85α破坏p85α/p110α复合体激活PI3K/AKT通路，同时抑制E2F4转录因子液-液相分离（condensate formation），促进E2F4驱动的MTDH转录，双重作用抑制肿瘤抗原呈递。动物实验中靶向FAM114A1可增强抗PD-1疗效，临床队列分析显示FAM114A1特征能预测ICB应答。该研究为TNBC免疫治疗耐药提供了新的生物标志物和联合治疗策略。

免疫检查点阻断（ICB）疗法为癌症治疗带来了革命性突破，但在三阴性乳腺癌（TNBC）中，多数患者因先天或获得性耐药而获益有限。如何克服耐药性、筛选潜在应答人群，成为TNBC免疫治疗领域的核心挑战。发表于《Signal Transduction and Targeted Therapy》的最新研究，通过创新性筛选与机制解析，发现了一个此前未被重视的免疫逃逸“枢纽”——FAM114A1，并揭示了其通过双重通路破坏抗原呈递、促进免疫逃逸的全新机制。

为系统探索TNBC免疫逃逸机制，研究团队首先构建了肿瘤-免疫细胞共培养体系，结合CRISPR激活（CRISPRa）技术进行全基因组功能增益筛选。在筛选出的候选基因中，FAM114A1显著富集。后续实验证实，敲低FAM114A1能增强CD8⁺ T细胞浸润与活化，抑制肿瘤生长；临床样本分析也显示FAM114A1高表达与CD8⁺ T细胞浸润减少显著相关。机制探索方面，研究综合运用免疫共沉淀-质谱、单细胞RNA测序（scRNA-seq）、染色质免疫沉淀（ChIP）、体外液-液相分离实验、荧光恢复后漂白（FRAP）等技术，并结合TCGA、FUSCC等临床队列数据验证。关键实验模型包括小鼠TNBC细胞系Py8119、人TNBC患者样本（如NCT03197389队列），以及OT-I转基因小鼠模型。

FAM114A1促进TNBC免疫逃逸

通过CRISPRa筛选及体内外验证，研究发现FAM114A1过表达可帮助肿瘤细胞逃避免疫清除。在OT-I小鼠模型中，敲低FAM114A1显著抑制肿瘤生长，并增加肿瘤内CD8⁺ T细胞比例和活化标志物表达。临床数据分析进一步证实，FAM114A1高表达的TNBC患者肿瘤中CD8⁺ T细胞浸润水平更低。

FAM114A1激活PI3K/AKT通路并抑制抗原呈递

机制上，FAM114A1与PI3K调控亚基p85α结合，破坏其与催化亚基p110α的相互作用，从而解除p85α对p110α的抑制，激活PI3K/AKT信号通路。同时，scRNA-seq和体外实验表明，FAM114A1高表达与抗原呈递相关基因下调相关，而抑制PI3K/AKT可逆转这一现象。

FAM114A1抑制E2F4液-液相分离

研究首次发现E2F4在细胞质中形成具有液体性质的相分离凝聚体，而FAM114A1通过结合E2F4的固有无序区域（IDR）和二聚化结构域，抑制其凝聚体形成。体外实验显示，重组FAM114A1蛋白可直接破坏E2F4液滴组装。

E2F4促进MTDH表达并抑制抗原呈递

进一步研究表明，E2F4作为转录激活因子直接结合MTDH启动子区域，促进其表达。而FAM114A1通过抑制E2F4相分离，促进E2F4核转位，增强MTDH转录活性，最终抑制抗原呈递。临床样本中FAM114A1与MTDH表达呈正相关。

FAM114A1靶向增强ICB疗效

功能上，敲低FAM114A1可显著提升抗PD-1疗法在小鼠模型中的抑瘤效果，并增加肿瘤内细胞毒性T细胞浸润。基于FAM114A1下游信号轴（PI3K/AKT、E2F4、MTDH）构建的分子特征，在多个TNBC免疫治疗队列中展现出优于PD-L1的预测效能。

该研究不仅揭示了FAM114A1作为免疫逃逸驱动因子的双重机制（激活PI3K/AKT与调控E2F4相分离），还提出了靶向FAM114A1可协同ICB的治疗策略。其所构建的FAM114A1特征模型为TNBC免疫治疗精准分型提供了新工具，同时拓宽了相分离在肿瘤免疫调控中的理论边界，为克服ICB耐药提供了新的靶点与思路。