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近期钱永健研究小组在《Nature Protocols》上发表了有关荧光标记的实验指导性文章，摘录其中部分内容，参考下科学大家的实验风范。
生物通报道：12月10日2008年的诺贝尔奖得主将在瑞典首都斯德哥尔摩参加诺贝尔奖颁奖典礼，本届获得诺贝尔奖医学/生理学奖的是来自德国科学家哈拉尔德·楚尔·豪森和两位法国科学家弗朗索瓦丝·巴尔－西诺西和吕克·蒙塔尼。而获得诺贝尔化学奖的则是日本科学家下村修、美国科学家马丁·沙尔菲和美籍华裔科学家钱永健（Roger Yonchien Tsien）。
近期钱永健研究小组在《Nature Protocols》上发表了有关荧光标记的实验指导性文章，摘录其中部分内容，参考下科学大家的实验风范。
在“Preparation of the membrane-permeant biarsenicals FlAsH-EDT2 and ReAsH-EDT2 for fluorescent labeling of tetracysteine-tagged proteins”这篇文章中，研究人员介绍了一种两步法，直接由便宜的染料荧光素和试卤灵（resorufin）准备膜渗透荧光双砷染料（biarsenical）：FlAsH-EDT2和ReAsH-EDT2 。
自从在生物体，组织和活细胞蛋白观测实验中引入了像是绿色荧光蛋白GFP这样的遗传编码的标记之后，细胞生物学有了长足的发展。但是由于荧光蛋白比较大（－30kD），而且会引起目标蛋白的活性和定位的不稳定，因此仍然需要更好的标记物。
在这篇文章中，研究人员介绍了一种尺寸较小的四半胱氨酸标记（tetracysteine tag）：<1kD，并且这种标记与膜渗透荧光双砷染料（biarsenical），比如FlAsH-EDT2和ReAsH-EDT2亲和性高（见下图）。这种tetracysteine标记最小序列是CysCysProGlyCysCys，这些双砷染料具有一种独有的特性：其荧光只有当与tetracysteine标记结合后才会淬灭，这就避免了蛋白成像过程中额外的清洗过程。
除了能用于标记蛋白的荧光标示，双砷染料还具有其它许多功能，比如通过双色脉冲追踪（two color pulse chase），染料触发（dye-triggered）蛋白聚集来判断蛋白“年龄”，通过发色基团激活的光灭活（chromophore-activated light inactivation），配合荧光和电子显微镜，以及荧光共振能量转移指示器等来定位非激活蛋白。
这种方法主要的限制是比较于FPs灵敏度降低，这是由于一些非特异性染色，以及对培养细胞和组织培养物的要求，并且染色后需要用二硫酚来清洗也限制了其在动物上的应用。
这里介绍的方法不同于之前出版的方法，可以将双砷染料的毒性降低到最小，这样一般的化学实验室就都可以进行了。另外利用这种方法也可以进行其它双砷染料和中间产物的实验。
具体步骤可于Tsien lab Website下载，或journal@ebiotrade.com 询要。
（生物通：张迪）
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