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Bio-Rad公司近日推出了新的ddPCR™文库定量试剂盒,用于Ion Torrent文库的制备。与Bio-Rad的QX100或QX200微滴式数字PCR平台结合使用,这一试剂盒让研究人员能够精确、直接地检测文库质量和拷贝数,实现对测序文库的质量控制。
Bio-Rad公司近日推出了新的ddPCR™文库定量试剂盒,用于Ion Torrent文库的制备。与Bio-Rad的QX100或QX200微滴式数字PCR平台结合使用,这一试剂盒让研究人员能够精确、直接地检测文库质量和拷贝数,实现对测序文库的质量控制。
目前的各种NGS技术都需要用户将精确量的DNA文库分子上样到仪器上,以便优化数据产量。若测序运行时的文库分子过多或过少,都会使数据质量受损,有时甚至没有数据。这不仅浪费宝贵的样品和试剂,也浪费用户和仪器的时间。
因此,要控制NGS测序仪上测序文库的上样量,保证测序数据的质量,就需要在测序前对DNA测序文库进行定量分析。此外,为减少NGS运行成本,用户往往需要将不同测序文库等摩尔量合并为一份测序样品同时测序,这也以测序文库的准确定量分析为前提,如此才能保证不同文库的测序数据的可靠性。
仪器制造商通常建议用定量PCR的方法来定量文库,并利用凝胶或毛细管电泳来确定其大小范围。然而,这些方法都存在一些限制。以qPCR法为例,它仅能检测可扩增文库,依赖标准曲线评估文库拷贝数,不能完全显示测序文库片段长度的差异,容易受引物二聚体或背景污染影响,受制于扩增效率从而造成定量结果偏差。
Bio-Rad QX100/200™ ddPCR™ 测序文库定量试剂盒,可简单快捷地实现对Ion Torrent AmpliSeq和Ion RNA-seq测序文库的质量控制;无缝整合进测序工作流程,同时提供对测序文库的定量分析(拷贝/微升,还可转成摩尔浓度)和质量评估信息(接头二聚体和测序片段长度等反映测序文库质量的信息):
• 可对测序文库进行绝对定量,无需标准曲线;还可对测序文库质量进行评估,从而实现对测序文库的质控以提高NGS测序数据质量
• 相比qPCR更准确的测序文库质量评估
测序文库装定量分析结果可靠性高、重复性好
• 有助于多样本合并测序时各样本测序文库含量的配平
• 能无缝整合进PGM和Ion Proton工作流程
目前,Bio-Rad仅推出了适用于Ion Torrent测序平台的文库定量试剂盒。据悉,其他NGS平台的试剂盒正在开发之中。如需ddPCR文库定量试剂盒的更多资料,请点击此处索取。(生物通 薄荷)
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