Materials（材料）所有化学试剂均购自商业供应商且未经进一步纯化直接使用。4-溴-1,8-萘二甲酸酐和5-羧基四甲基罗丹明购自上海贝得医疗科技有限公司；4-(2-氨乙基)吗啉和无水哌嗪购自上海赛恩化学技术有限公司；氢氧化钠购自天津丰川化学试剂有限公司。乙二醇单甲醚、过氧化氢、N,N-二甲基甲酰胺等溶剂为分析纯级别。实验用水为超纯水系统制备。Design and synthesis of probe Ro-Np（探针Ro-Np的设计与合成）基于5-羧基四甲基罗丹明和萘酰亚胺的荧光特性，我们设计了一种用于选择性检测过氧亚硝酸根（ONOO−）的比率荧光探针Ro-Np。具有螺内酰胺结构的5-羧基四甲基罗丹明在闭环状态下无荧光，通过引入酰肼作为ONOO−反应位点、吗啉作为溶酶体靶向基团，该探针将5-羧基四甲基罗丹明作为能量受体，萘酰亚胺作为能量供体，构建了高效的FRET体系。Conclusion（结论）总而言之，基于FRET机制，我们合理设计并合成了Ro-Np——一种专为特异性检测ONOO−而定制的溶酶体靶向比率荧光探针。该探针以萘酰亚胺为能量供体、5-羧基四甲基罗丹明为能量受体，整合吡咯烷基团实现精确溶酶体靶向，并通过苯肼响应单元实现ONOO−的特异性识别。探针表现出卓越性能：快速响应（10分钟内）、高灵敏度（检测限达80 nM）、优异的选择性以及抗生物硫醇干扰能力。细胞共定位实验证实其溶酶体靶向特异性（皮尔逊相关系数0.85），并能成功检测BV-2小胶质细胞中的内源性和外源性ONOO−。此外，该探针在小鼠活体模型中展现出可靠的成像性能，并在深部组织中实现高信噪比、高分辨率的ONOO−可视化，为研究溶酶体相关ONOO−功能及炎症疾病机制提供了强大工具。
