依维莫司和舒尼替尼：婴儿血管瘤潜在的治疗新希望

时间：2025年4月6日

来源：Pediatric Research

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婴儿血管瘤（IH）是常见的婴儿血管肿瘤，目前缺乏明确有效的治疗药物和用于体外研究的永生化细胞系。研究人员建立永生化血管瘤来源的内皮细胞（iHemEC）模型筛选药物。结果发现依维莫司和舒尼替尼抑制 iHemEC 效果优于一线药物，为 IH 治疗研究提供了新方向。

婴儿血管瘤（Infantile hemangiomas，IH）是新生儿时期常见的肿瘤，如同隐藏在宝宝身体里的 “小麻烦”。它由毛细血管内皮细胞及其支持组织的良性增殖引起，发病率在新生儿中约为 2% - 10%。这些血管瘤通常在宝宝出生时并不明显，却会在出生后的 2 - 7 周悄然出现，随后像小树苗一样迅速生长，在 4 - 18 个月内达到最终大小的 80% 左右，之后才逐渐开始消退。然而，大约 10 - 15% 未经治疗的患儿在血管瘤消退后，可能会留下皮肤和皮下组织的问题，比如皮肤出现瘢痕、变形，严重的还会影响外观和功能。

目前，临床上治疗 IH 的药物选择有限。普萘洛尔（Propranolol）作为一线治疗药物，虽然广泛应用，但并非对所有患儿都有效。而长春新碱（Vincristine）和干扰素（Interferon）等药物，虽然有一定疗效，却因毒性和副作用较大，通常只用于病情严重的患儿。此外，对 IH 的研究大多依赖从婴儿身上分离的肿瘤细胞，但这些原代细胞在体外培养时，只能传代 6 - 8 次左右，这极大地限制了系统的体外研究。

为了解决这些问题，中山大学深圳校区药学院等机构的研究人员开展了相关研究。研究人员成功建立了一种永生化血管瘤来源的内皮细胞（iHemEC）模型，该模型高表达血管瘤标志物。通过对 18 种潜在药物的筛选，发现依维莫司（Everolimus）和舒尼替尼（Sunitinib）对 iHemEC 具有高效的抑制作用，其半数抑制浓度（IC₅₀）远低于一线药物普萘洛尔。相关研究成果发表在《Pediatric Research》上，为 IH 的治疗提供了新的潜在药物和研究方向。

在研究过程中，研究人员运用了多种关键技术方法。首先，从 IH 标本中分离出原代 HemEC 细胞，经慢病毒介导的 SV40 大 T 抗原和 hTERT 转导，筛选出稳定的 iHemEC 细胞系。接着，采用 MTT 法检测不同药物对 iHemEC 的细胞毒性，计算 IC₅₀值以筛选有效药物。随后，对依维莫司和舒尼替尼处理的 iHemEC 进行 RNA 测序（RNA-seq）分析，结合基因集富集分析（GSEA）探究药物作用机制。同时，运用蛋白质免疫印迹（Western blotting）、免疫荧光染色、流式细胞术等技术，从蛋白水平和细胞水平验证药物的作用效果。

研究结果如下：

HemEC 的分离与 iHemEC 的建立：成功从 IH 标本中分离出原代 HemEC 细胞，其具有典型的内皮细胞形态，表达关键蛋白 GLUT-1、VEGFR2 和 CD31。通过慢病毒感染，构建出稳定的 iHemEC 细胞系，该细胞系可稳定传代超过 50 代，保留了原代细胞的特征，为后续研究提供了可靠的细胞模型。
药物筛选：研究人员选取 18 种针对 HIF、VEGF、Notch 等潜在靶点的药物进行筛选。结果显示，舒尼替尼、依利莫司替布（Elimusertib）、HIF-1 抑制剂 - 4、瑞巴斯替尼（Rebastinib）和依维莫司对 iHemEC 的抑制效果优于雷帕霉素（Rapamycin），其 IC₅₀值较低，表明 ATR 介导的 DNA 损伤反应、HIF 信号通路、VEGF 信号通路和 PI3K/AKT/mTOR 信号通路可能是治疗 IH 的关键途径。
转录组分析：对依维莫司和舒尼替尼处理的 iHemEC 进行转录组分析，发现依维莫司处理的细胞中有 118 个基因显著上调，95 个基因显著下调；舒尼替尼处理的细胞中有 209 个基因上调，268 个基因下调。GSEA 分析表明，两种药物均抑制细胞周期，激活 P53 通路。此外，依维莫司还抑制了细胞周期、ATP 生成和基因转录等过程，而舒尼替尼则通过影响染色体稳定性抑制细胞增殖。
药物作用机制验证：免疫荧光染色显示，依维莫司和舒尼替尼干预后，Ki67 阳性细胞比例显著降低，表明两种药物均能抑制 iHemEC 增殖。蛋白质免疫印迹分析表明，依维莫司通过抑制 PI3K/AKT/mTOR 通路抑制 iHemEC 增殖，而高浓度的舒尼替尼（20 μM）才降低 p - AKT 表达。此外，舒尼替尼诱导的染色体不稳定导致 DNA 损伤，进而产生更多活性氧（ROS），激活 P53 通路，引发细胞凋亡，且在较低浓度（0.2 μM）时即可触发，效果比依维莫司更显著。

研究结论与讨论部分指出，研究人员成功建立的 iHemEC 细胞系可用于 IH 的药物筛选和机制研究。依维莫司和舒尼替尼作为潜在的治疗药物，分别通过抑制 PI3K/AKT/mTOR 通路和诱导 DNA 损伤，引发 P53 依赖的细胞凋亡，抑制 iHemEC 生长。然而，目前仍不清楚其他信号通路对 iHemEC 存活的影响，未来可通过基于 CRISPR/Cas9 的全基因组筛选进一步探索关键信号通路。这项研究为 IH 的治疗开辟了新的道路，提供了稳定的细胞模型，对优化临床治疗方案具有重要意义，有望为 IH 患儿带来更安全、有效的治疗方法。