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本研究分离鉴定烈性噬菌体vB_ValS_R12Z,其具有短潜伏期(35分钟)、大爆发量(105±27 PFU/细胞)及广谱宿主特异性(覆盖3种弧菌属),能有效抑制溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)并提升凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)幼体存活率,为替代抗生素的水产弧菌病治疗提供安全高效的生物防治方案。
Highlight
R12Z展现出短潜伏期(35分钟)与大爆发量(105±27 PFU/细胞)的快速增殖特性
该噬菌体对pH 4-11及温度4°C–50°C具备卓越环境稳定性
基因组分析确认其属于Mardecavirus属,且无耐药基因或毒力因子
对溶藻弧菌、副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)及奈氏弧菌(V. natriegens)具跨物种裂解能力
在感染复数(MOI)0.001–10范围内平均溶菌效率超75%
Phage isolation and purification
以溶藻弧菌ATCC 17749T为宿主,从厦门第八海鲜市场废水样本中通过0.22μm滤膜过滤及双层琼脂平板法分离纯化噬菌体。宿主菌于2216E培养基(人工海水含10g/L胰蛋白胨、2g/L酵母提取物,pH 7.5)中28°C震荡培养(160rpm),噬菌体富集后通过噬斑形态筛选并保存于4°C SM缓冲液。
Morphology and life cycle of R12Z
透射电镜(TEM)显示R12Z呈典型短尾噬菌体(siphovirus)形态,头部直径62.5±1.9nm,尾长142.5±2.5nm(图1A)。一步生长曲线揭示其35分钟潜伏期后进入爆发期,平均每个感染细胞产生105±27个噬斑形成单位(PFU)。
R12Z possesses characteristics of rapid proliferation
巨大爆发量与短潜伏期赋予R12Z高效杀菌特性,其增殖速率受宿主细胞尺寸、噬菌体复制转录效率等多因素调控。吸附实验表明10分钟内对宿主菌吸附率达78.3%,远超同类噬菌体平均水平。
Conclusion
R12Z凭借短潜伏期、大爆发量、遗传安全性、广谱抑菌能力及环境稳定性,成为水产弧菌病治疗的潜力候选者。其在凡纳滨对虾幼体保护实验中显著提升存活率,证实其实际应用价值。
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