基于SoAce-LC-MS/MS技术的五种脂溶性维生素快速同步检测新方法开发与验证

本研究开发了一种基于盐析-乙腈萃取（SoAce）前处理技术的LC-MS/MS方法，可在30分钟内同步检测血清中维生素A、D2、D3、E和K1。该方法线性优异（R2>0.996），灵敏度达pg级，显著降低检测成本与有机溶剂使用量，为临床脂溶性维生素（FSVs）大规模筛查提供高效解决方案。

Highlight

试剂与仪器

采用Triple Quad 4500+ LC-MS/MS系统（AB Sciex公司）进行脂溶性维生素分离定量。维生素标准品购自Cerilliant（Sigma）和J&K公司，同位素内标（IS）包括维生素A-d₆、D₂-d₆、D₃-d₆、E-d₆及K₁-d₇。

数据采集与分析

单样本分析时长仅6分钟！维生素A、D₂、D₃、E和K₁的保留时间分别为3.20/4.08/3.15/3.19/4.54分钟（图2）。通过MultiQuant 3.0.3软件完成质谱数据采集与定量分析。

萃取剂优化

惊喜发现：乙腈-饱和氯化钠组合溶液展现出卓越的萃取效率！该配方通过盐析效应有效分离有机相与水相，显著提升脂溶性维生素的提取回收率。

讨论

虽然已有LC-MS/MS方法报道FSVs检测，但我们的SoAce法首次实现五指标同步检测+两步前处理的完美组合！该方法较传统液液萃取（LLE）耗时降低70%，且避免使用致癌性氯仿。独特的盐析效应使维生素D₂和K₁的检测灵敏度达到临床要求新高度。

结论

本研究成功建立临床适用的SoAce-LC-MS/MS五联检方案！维生素A/D₂/D₃/E/K₁的定量范围分别覆盖25–1600 ng/mL、0.62–40 ng/mL、3.12–200 ng/mL、1250–80000 ng/mL和0.16–10 ng/mL，各项验证参数均符合CFDA指南要求。该技术为营养学研究与临床诊断提供强大工具包。