在中温和高温堆肥条件下,聚乳酸生物降解、细菌群落以及预测的功能基因之间的相关性

时间:2026年1月6日
来源:Polymer Degradation and Stability

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PLA降解特性及微生物-功能基因协同机制研究,比较了35℃和58℃堆肥条件下薄膜与颗粒PLA的降解速率(15天完全降解 vs 40天13.7%损失),证实热力学条件显著影响降解效率,通过宏基因组学分析发现芽孢杆菌科(高温)和Geobacillus属(低温)主导降解,并鉴定出关键酶基因K01126和K01048,成功分离降解菌Ralstonia sp. AF1。

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作者:Ian Cho | Kyung-Suk Cho
韩国首尔Ewha女子大学环境科学与工程系,邮编03760

摘要

作为石油基塑料的可持续替代品,可生物降解塑料(如聚乳酸PLA)受到了越来越多的关注。然而,尽管PLA是最广泛使用的可生物降解塑料,但关于其使用后降解过程的研究仍然有限。本研究比较了PLA样品在嗜温(35°C)和嗜热(58°C)堆肥条件下的降解行为,并分析了微生物群落及相关功能基因的变化。在嗜热条件下,PLA薄膜在15天内完全降解;而在嗜温条件下,40天后仅观察到13.7%的重量损失。对于PLA颗粒,65天后在嗜热条件下的重量损失为24.8%,在嗜温条件下为6.1%。扫描电子显微镜(SEM)和傅里叶变换红外光谱(FTIR)分析证实了微生物降解的证据,例如表面侵蚀和酯键断裂。Spearman相关性分析表明,在嗜热环境中,以芽孢杆菌科(Bacillaceae)为主的微生物群落在PLA降解过程中起积极作用;而在嗜温环境中,GeorgeniaCupriavidus可能具有降解PLA的能力。功能基因预测结果显示,与PLA降解相关的K01126(甘油磷酸二酯酶)和K01048(溶血磷脂酶)与降解速率呈强正相关,表明它们在PLA水解过程中起关键酶促作用。此外,在降解过程后从堆肥中分离出一种具有降解PLA能力的细菌Ralstonia sp. AF1。总体而言,本研究通过全面分析PLA的降解特性和细菌群落动态,证明了其在堆肥条件下的可生物降解性,并为提高PLA在堆肥环境中的降解效率提供了基础见解。

引言

由于重量轻、耐用性强、生产成本低且易于加工,基于石油的塑料在全球范围内得到广泛应用。随着生产和消费量的增加,塑料垃圾造成的“白色污染”约占人类产生垃圾总量的54%[1,2]。塑料垃圾在土壤和水生环境中积累,其分解成微塑料对生态系统和人类健康构成严重威胁[3]。作为可持续替代品,可生物降解塑料因使用后可生物转化为水、二氧化碳、甲烷和生物质而受到越来越多的关注[4,5]。聚乳酸(PLA)就是一个典型例子,它被广泛应用于包装、工业材料、纺织品和生物医学领域[2]。
堆肥是一种有氧生物过程,用于生产有机肥料或土壤改良剂,可分为家庭堆肥和工业堆肥,通常分别在嗜温(20–45°C)和嗜热(55–60°C)条件下进行[6][7][8]。由于PLA的玻璃化转变温度(Tg)约为55°C,因此在嗜热条件下酯键断裂和初始水解步骤会迅速发生,而在Tg以下则进展缓慢[9,10]。例如,Mayekar和Auras[11]报告称,PLA在嗜热范围(45–60°C)内会发生水解,导致分子量迅速下降,从而使堆肥微生物能够利用PLA单体作为碳源。Al Hosni、Pittman和Robson[12]发现PLA样品在50°C下完全降解,而在25°C或37°C下则没有明显降解现象。这些研究表明,在嗜温条件下PLA的降解受到限制。尽管ASTM D6400规定家庭堆肥的最低标准为28°C[8],但实验表明在该温度下PLA的降解极其有限,因为微生物活性较低。因此,选择35°C作为具有代表性的嗜温温度,以更好地反映生物活性堆肥条件,并便于与嗜热条件进行有意义的比较[11]。
随着PLA在堆肥环境中的降解,细菌群落组成会动态变化。Nguyen、Brdlík、Borůvka、Riha和Sevcu[13]观察了PLA薄膜堆肥过程中的细菌群落,并鉴定出GeobacillusThermoleophilumFilomicrobiumRoseisolibacter为潜在的PLA降解菌。根据Lors、Leleux和Park[9]的研究,从堆肥、土壤和活性污泥中分离出的PLA降解菌主要属于放线菌门(Actinomycetes),包括StreptomycesLaceyellaPseudonocardia;其他属还包括GeobacillusBacillusPseudomonasStenotrophomonas。功能基因预测也揭示了参与降解过程的具体酶和代谢途径。例如,有研究探讨了PLA微塑料对沉积物中微生物群落的影响,重点关注与塑料降解及碳氮循环相关的基因[14]。然而,大多数以往的研究仅限于测量降解速率和在分类学水平上描述细菌群落,而参与PLA降解的功能基因仍大多未被探索。特别是在嗜温堆肥条件下,PLA降解速率、微生物群落和功能基因之间的动态关系仍不清楚。因此,本研究旨在通过预测堆肥环境中与细菌活性相关的功能基因,提供关于PLA降解机制的新见解。
本研究评估了PLA薄膜和颗粒在嗜温(35°C)和嗜热(58°C)堆肥条件下的降解情况。具体目标包括:(1)根据温度和材料形态阐明PLA的降解特性;(2)分析降解过程中细菌群落组成的变化;(3)预测和评估关键功能基因的时间模式,以识别潜在的降解相关基因。此外,还进行了降解速率、细菌群落组成和预测功能基因丰度之间的相关性分析,以深入了解PLA在堆肥条件下的生物降解过程。最后,在降解实验后使用堆肥进行了纯培养分离,以鉴定具有降解PLA能力的细菌菌株。

实验部分

PLA颗粒和薄膜样品的制备

使用来自中国上海Yien化学技术有限公司的市售PLA颗粒(无需进一步纯化)。为了制备PLA薄膜样品,将10克PLA颗粒溶解在250毫升氯仿中,得到熔融聚合物溶液。将一块覆盖有特氟龙薄膜的玻璃板(20厘米×20厘米)放置在铝箔托盘上,然后将PLA溶液倒入通风橱内的表面上,让其干燥24小时,确保氯仿完全蒸发。

PLA薄膜和颗粒在堆肥条件下的降解

PLA薄膜和颗粒在堆肥条件下的降解行为如图1所示。在嗜热条件(58°C)下,PLA薄膜在15天内完全分解,完全失去形状。而在嗜温条件(35°C)下,40天后薄膜的重量损失为13.7%(图1a)。在嗜热条件下,65天后PLA颗粒的重量损失分别为24.8%;在嗜温条件下为6.1%(图1b)。
先前的研究

结论

本研究探讨了PLA薄膜和颗粒在嗜温(35°C)和嗜热(58°C)堆肥条件下的降解行为,重点关注了降解过程中细菌群落组成的变化和预测的功能基因。目的是识别影响PLA降解速率的潜在细菌分类单元和功能基因。
在嗜热条件下,PLA薄膜在15天内完全降解;而在嗜温条件下

作者贡献声明

Ian Cho:撰写初稿、数据可视化、验证、实验设计、数据分析、概念构建。Kyung-Suk Cho:审稿与编辑、监督工作、资金筹集。

作者贡献声明

Ian Cho:撰写初稿、数据可视化、验证、实验设计、数据分析、概念构建。Kyung-Suk Cho:审稿与编辑、监督工作、资金筹集。

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