基于VEEV-VSVG载体的SVA病毒样囊泡疫苗在猪体内能够引发高效的免疫反应并提供保护作用

时间：2026年1月19日

来源：Veterinary Microbiology

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本研究基于VEEV-VSVG系统构建了表达SVA VP1和VP2蛋白的重组病毒样颗粒疫苗，评估了其特性与稳定性。免疫实验表明，VP2疫苗在小鼠和猪中均激发强烈的体液和细胞免疫应答，其中猪的攻毒试验显示完全保护（100%），而VP1疫苗的保护效能为60%。该结果为开发更有效的SVA疫苗提供了依据。

荣振祥|焦明金|曹楠|卢明星|刘淑丹|张超|魏柳青|李亚梅|陈焕春|李向敏|钱平

中国农业大学生物技术学院洪山实验室农业微生物国家重点实验室，中国湖北武汉430070

摘要

塞内卡谷病毒（SVV）属于杯状病毒科，与猪特发性水泡病（PIVD）密切相关，该病毒传播迅速，对多个国家的养猪业构成了潜在威胁。目前，SVV持续发生基因进化，但市场上尚无获许可的疫苗或有效的治疗方法来控制这种疾病，这凸显了预防和控制SVV感染策略的重要性。在初步研究中，构建了一种表达水泡性口炎病毒糖蛋白（VSVG）的委内瑞拉马脑炎病毒（VEEV）复制子系统。在本研究中，我们基于VEEV-VSVG系统开发了一种重组类病毒颗粒（rVLVs）疫苗，该疫苗表达了SVV的VP1和VP2蛋白，并对其特性和稳定性进行了评估。随后，小鼠和猪接种rVLVs疫苗后均产生了强烈的体液和细胞免疫反应。此外，猪挑战实验表明，接种rVLVs-SVA-VP2疫苗可提供完全保护，其效果与灭活疫苗相当；而接种rVLVs-SVA-VP1疫苗的保护效果为60%。

引言

塞内卡谷病毒（SVV），也称为Senecavirus A（SVA），是一种无包膜的单链正链RNA病毒，全长基因组约为7.3 kb。作为Senecavirus属的唯一成员，它仅有一种血清型（Maggioli等人，2018年）。SVV最初被报道与猪特发性水泡病（PIVD）有关，这种疾病的临床表现类似于口蹄疫（FMD）、猪水泡病（SVD）、猪水泡性疱疹和猪水泡性口炎病毒（Pasma等人，2008年；Leme等人，2017年）。自首次发现以来，SVV已广泛传播到包括美国、巴西、中国、泰国、哥伦比亚和越南在内的多个国家（Pasma等人，2008年；Zhang等人，2015年；Leme等人，2015年；Arzt等人，2019年；Wu等人，2016年；Wu等人，2017年；Sun等人，2017年）。在中国，目前有多种SVV株在传播，大多数地区都发现了病例，其中西南地区的个体阳性率（11.70%）和群体阳性率（50.00%）最高（Li等人，2024年）。然而，近年来检测率呈下降趋势（Bai等人，2020年；Li等人，2024年）。值得注意的是，一些中国SVV株中观察到了基因重组事件，表明病毒正在向更具毒力、致病性更强的表型进化。这些发现凸显了迫切需要制定有效的SVV预防和控制策略。

目前，中国唯一获许可的SVV疫苗是灭活疫苗。先前的研究已经开发出了SVV的减毒活疫苗和亚单位疫苗。尽管灭活疫苗能诱导高滴度的中和抗体并对SVV提供特异性保护，但其激发细胞免疫的能力仍有待进一步提高（Yang等人，2018年；Fuenmayor等人，2017年）。与灭活疫苗和减毒活疫苗相比，亚单位疫苗具有更高的安全性。研究表明，VP1和VP2蛋白都含有多个抗原表位（Wen等人，2022年）。Cao等人证明，基于VP1 21–26和VP2结构蛋白的纳米颗粒疫苗可在小鼠和猪体内诱导高水平的SVV中和抗体，表明VP1和VP2蛋白具有免疫原性（Cao等人，2024年）。基于甲病毒复制子的疫苗介于灭活疫苗和减毒活疫苗之间，兼顾了安全性和免疫原性。最常用的递送载体基于三种甲病毒：塞姆利基森林病毒（SFV）、辛德比斯病毒（SINV）和VEEV（Lundstrom，2003年）。后续研究将水泡性口炎病毒（VSV-G）的糖蛋白插入SFV的RNA复制子中，得到了所谓的重组类病毒颗粒（rVLV）（Rose等人，2014年）。Wang等人证明，用表达PCV2d Cap和PCV3 Cap蛋白的rVLVs接种C57小鼠后，可显著增加PCV2d Cap和PCV3 Cap蛋白的特异性抗体，并引发有效的细胞免疫反应（Wang等人，2024年）。

基于上述研究，本研究在实验室保存的VEEV-VSVG载体中分别获得了rVLV-VP1和rVLV-VP2，并评估了它们在小鼠和猪体内的免疫和保护效果。

细胞、病毒、动物和材料

BHK-21（幼年仓鼠肾）细胞在含有10%胎牛血清（FBS，Fisher Scientific Inc.，美国）、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM；Thermo Fisher Scientific Inc.，美国）中培养，培养条件为37°C和5% CO₂（Rong等人，2025年）。SVA LNSY01–2017（MH064435）是从患有猪特发性水泡病（PIVD）的猪体内分离得到的，该病毒在含有2%热灭活胎牛血清的DMEM培养基中的BHK-21细胞中繁殖

表达SVV-VP1和SVV-VP2蛋白的rVLV的生成和特性分析

为了生成表达SVV-VP1和SVV-VP2蛋白的rVLVs，使用了之前描述的VEEV-VSVG复制子载体（Rong等人，2025年）构建了重组质粒（VEEV-VSVG-SVA-VP1和VEEV-VSVG-SVA-VP2）。rVLV的构建、组装机制和验证策略示意图见图1A。简而言之，转染后48小时收集上清液（P0），用于重新感染新鲜细胞以扩增rVLVs。

讨论

SVV感染对中国的猪肉产业的生产力和经济效益具有显著影响。2016年至2018年间，中国至少有14个省份发现了SVV感染，且感染率逐年上升（Leme等人，2017年）。Chen等人研究了在中国新分离的两种SVV株（GD-S5/2018和GD04/2017）的致病性，强调了病毒的持续传播和进化（Chen等人，2019年）。这些因素凸显了...

结论

总结来说，我们基于VEEV-VSVG载体成功开发出了具有感染性和稳定性的SVV rVLV疫苗。用LVV-SVA-VP1和LVV-SVA-VP2接种小鼠和猪后，均产生了有效的体液和细胞免疫反应。值得注意的是，接种LVV-SVA-VP2可提供完全（100%）的保护效果，而LVV-SVA-VP1仅提供部分（40%）保护。这种差异表明需要进一步优化疫苗设计。

作者贡献

P.Q.和X.L.提出了项目方案，Z.R.、M.J.、N.C.、M.L.、S.L.、L.W.、Y.L.和C.Z.进行了实验。Z.R.和M.J.分析了数据。Z.R.撰写了论文。P.Q.和X.L.参与了结果的讨论和解释。所有作者都阅读并批准了最终稿件。

作者贡献声明

卢明星：方法学研究。曹楠：数据管理。钱平：资源调配和项目管理。李向敏：监督和资金获取。焦明金：数据管理。荣振祥：写作、审稿与编辑、初稿撰写、正式分析。魏柳青：资源协调。张超：方法学研究。陈焕春：监督。李亚梅：方法学研究。刘淑丹：方法学研究。