拮抗细菌BY-S1可诱导烟草黑胫病的抗性:来自防御反应和代谢谱分析的综合见解

时间:2026年1月20日
来源:Pesticide Biochemistry and Physiology

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烟草黑胫病(TBS)由疫霉菌引起,威胁烟草生产。本研究从河南周口烟田土壤中分离出枯草芽孢杆菌BY-S1,其拮抗率达70.6%,田间试验显示对TBS防控效果53.45%。该菌通过溶磷、产铁载体、增强光合作用、激活SOD/POD/CAT等抗氧化酶及调控IAA/ABA/JA/SA激素平衡,同时调节抗坏血酸和醛酸代谢途径,协同提高烟草抗病性。

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张宇|张玉帅|李梦泽|张宇伟|李向龙|刘腾飞|王航|徐志成|徐家阳|贾伟
河南农业大学烟草科学学院,国家烟草栽培与生理生化研究中心,烟草工业烟草栽培重点实验室,中国河南省郑州市

摘要

烟草黑胫病(TBS)是一种由Phytophthora nicotianaeP. nicotianae)引起的土传病害,对烟草作物的产量和质量构成严重威胁。生物防治细菌在可持续农业中发挥着重要作用,包括对TBS的管理。因此,寻找能够有效抑制P. nicotianae的生物防治细菌对烟草生产至关重要。本研究从烟草植株的根际土壤中分离出一种对TBS具有良好控制效果的生物防治细菌,并将其命名为BY-S1。BY-S1被鉴定为Bacillus subtilis,其对P. nicotianae表现出70.60%的拮抗作用,并具有磷酸盐溶解和铁载体产生的能力。此外,还进行了室内盆栽实验以探讨BY-S1对烟草生长和抗性的影响。结果表明,BY-S1不仅促进了烟草生长,还显著降低了TBS的发生率,控制效果达到了53.45%。BY-S1的应用增强了光合作用,提高了抗氧化酶(SOD、POD和CAT)和防御酶(PPO和PAL)的活性,并调节了植物激素(IAA、ABA、JA和SA)的含量,从而提高了烟草对TBS的抗性。此外,BY-S1还通过调节抗坏血酸和醛酸代谢以及色氨酸代谢等途径保护烟草免受P. nicotianae的感染。这些发现突显了BY-S1在控制P. nicotianae感染方面的潜力。

引言

烟草在全球大约125个国家种植,然而,全球生产面临着来自真菌病害的严重威胁,这些病害显著影响了作物的产量和质量(Kakar等人,2020年;Ren等人,2022年)。烟草黑胫病(TBS)是由卵菌Phytophthora nicotianaeP. nicotianae)引起的,是最具破坏性和最广泛的土传病害之一,严重影响烟草生产(Liu等人,2024a;Liu等人,2024b)。该病害于1896年首次在印度尼西亚被Van Breda de Haan报道,随后于1950年传入中国(Ren等人,2022年)。由于P. nicotianae能够在烟草生长的各个阶段存活于土壤和植物组织中,TBS被认为是最难有效管理的病害之一(Liu等人,2020年)。在高温高湿条件下,烟草植株对TBS的敏感性较高(Tian等人,2022年)。感染后,菌丝会侵入茎基部,破坏维管组织,阻碍水分和养分的向上运输。这些紊乱最终导致植株黄化和萎蔫,症状通常从植株下部逐渐向上蔓延(Liu等人,2024a.b;Jing等人,2017年)。除了茎基部感染外,P. nicotianae还可在烟草叶片上引起暗色坏死病斑(Bittner和Mila,2017年;Ren等人,2018年)。
在传统的农业系统中,控制TBS的管理策略通常包括轮作(Niu等人,2017年)、培育抗病品种(Antonopoulos等人,2010年;Deb等人,2018年)以及施用化学杀菌剂(Cui等人,2018年;Thind,2022年)。然而,这些方法存在一些局限性。由于培育抗病品种需要大量时间和资金投入,因此仍面临挑战。尽管现代分子技术促进了抗病品种的开发,但其大规模应用和推广仍面临重大困难(Kakar等人,2020年)。此外,杀菌剂的广泛使用不仅推动了抗性病原体的进化,还导致了持久残留物,对人类健康构成重大风险(Munita和Arias,2016年)。因此,开发一种绿色高效的TBS控制方法至关重要。
使用生物防治细菌是一种非常有前景且可持续的控制土传病害(如TBS)的方法(Wei等人,2011年;Yang等人,2011年;Haas和Defago,2005年)。特别是,分离出的促进植物生长的根际细菌(PGPR)已成为生物防治研究的主要焦点,因为它们已被证明具有高效性和良好的环境安全性(Bhattacharyya和Jha,2012年;Ongena和Jacques,2008年;Ajar等人,2017年)。Bacillus subtilisBacillus属)、Trichoderma harzianumTrichoderma属)和Pseudomonas fluorescensPseudomonas属)是三种以促进植物生长而闻名的有益微生物,被广泛用于作物病害的管理(Singh等人,2021年;Yadav等人,2022年)。在这些有益微生物中,Bacillus属细菌是全球研究最成功和最广泛的生物防治细菌之一。作为土壤和各种植物相关生态位中的优势微生物群落,Bacillus属细菌具有强大的环境适应性和抑制植物病原体的潜力(Kovács,2019年;Caulier等人,2019年)。Guo等人(2020年)分离出一种名为Bacillus velezensis Ba168的PGPR菌株,并证明了其在田间条件下对TBS的生物控制效果。此外,B. subtilis Tpb55菌株在盆栽实验中的控制效果达到了70.66%,在田间试验中达到了59.34%(Han等人,2016年)。
Bacillus属细菌控制植物病害的机制主要涉及三个方面。首先,Bacillus属细菌通过分泌抗生素和细胞壁降解酶直接抑制病原体的活性。其次,Bacillus属细菌与病原体在根际竞争生态位和养分,从而减少病原体的定殖并产生间接的生物防治效果。第三,Bacillus属细菌诱导宿主植物产生系统抗性,提高其抵抗感染的整体能力(Choudhary和Johri,2008年;Etesami等人,2023年;Fira等人,2018年)。除了抑制病害的能力外,Bacillus属细菌还被证明可以通过增加生物量积累和提高光合作用效率来促进植物生长(Luan等人,2023年;Zhao等人,2023年;Xie等人,2020年)。在植物-病原体相互作用中,酶活性和激素信号通路是生物防治细菌激活植物防御反应的关键机制。B. velezensis BE1被证明可以提高番茄植株中苯丙氨酸氨裂解酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)的活性,有效抑制Botrytis cinerea的感染(Aboelez等人,2024年)。B. velezensis NEAU-242-2的植物有益特性,包括抑菌和促进生长的效果,与其产生吲哚-3-乙酸(IAA)的能力有关(Zhao等人,2023年)。同样,B. amyloliquefaciens FZB42也被证明可以通过调节水杨酸(SA)和茉莉酸(JA)/乙烯(ET)信号通路有效抑制TBS(Wu等人,2018年)。
生物防治细菌的应用效果高度依赖于当地生态条件(Haas和Defago,2005年)。为了专门针对TBS,本研究旨在从当地烟草种植区的根际土壤中分离并鉴定出对P. nicotianae有效的拮抗细菌。此外,还进行了盆栽实验来评估所选生物防治菌株在烟草中的促生长能力和病害控制机制。

部分摘录

土壤、病原体和植物

土壤样本来自中国河南省驻马店市烟草植株的根际。研究中使用的P. nicotianae由河南农业大学烟草学院的质量生态实验室提供。测试的烤烟品种为Y87,烟草种子来自河南农业大学烟草学院的育种实验室。

实验设计

实验1:采用稀释涂布平板法从

拮抗细菌的筛选

在烟草根际土壤样本上进行了微生物分离,并使用平板对抗法获得了拮抗细菌。图1显示,与对照组相比,P. nicotianae的菌落直径显著减小,平均拮抗效果为70.60%±1.34%(标准差)。

BY-S1的鉴定与分析

如图2 A和B所示,BY-S1通常呈现短杆状形态,具有明显的弯曲或弧形。其宽度约为0.6微米

从根际土壤中分离出的BY-S1对P. nicotianae具有拮抗作用

本研究从中国河南省驻马店市收集的烟草根际土壤样本中分离出一种B. subtilis菌株,命名为BY-S1。B. subtilis是一种广泛分布的细菌,此前已在植物、土壤、动物、发酵食品和许多其他生物材料中分离到(Di等人,2023年;Liu等人,2016年;Lei等人,2023年;Xu等人,2022年;Bolivar-Anillo等人,2021年;Tabari和Tabari,2017年;Abdelhafiz等人,2017年;Zhou等人,2018年;

结论

烟草根际细菌BY-S1被鉴定为Bacillus subtilis,它不仅直接拮抗Phytophthora nicotianae,还通过促进磷酸盐溶解和铁载体产生来促进植物生长。此外,BY-S1通过提高光合作用性能、增强防御和抗氧化酶活性、调节植物激素平衡(IAA、ABA、JA、SA)以及重新编程中心代谢途径(包括抗坏血酸和醛酸代谢)来增强抗病性

CRediT作者贡献声明

张宇:撰写——审阅与编辑、资源准备、方法学、调查、数据分析、概念构建。张玉帅:撰写——审阅与编辑、方法学、调查。李梦泽:撰写——审阅与编辑、调查。张宇伟:撰写——审阅与编辑、软件使用、数据管理。李向龙:撰写——审阅与编辑。刘腾飞:撰写——审阅与编辑。王航:撰写——审阅与编辑。徐志成:撰写——审阅与编辑、监督。徐家阳:撰写

利益声明

作者声明他们没有已知的竞争性财务利益或个人关系可能影响或似乎会影响本文所述的工作。

致谢

本工作得到了河南农业大学人才项目(30500846,30500999)的资助。

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