在全球范围内，幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染影响着约44亿人口，这种微需氧革兰氏阴性菌不仅是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因，更被世界卫生组织列为I类致癌物。随着抗生素的广泛使用，H. pylori对克拉霉素、阿莫西林等常用药物的耐药率持续攀升，导致标准三联/四联疗法失败率显著增加。同时，抗生素滥用引发的肠道菌群紊乱等副作用也制约了其长期应用效果。因此，开发兼具高效性和安全性的新型抗H. pylori制剂成为亟待解决的临床难题。
在这一背景下，抗菌肽(Antimicrobial peptides)因其独特的膜靶向作用机制和不易诱导耐药性的特点受到广泛关注。与传统抗生素作用于特定分子靶点不同，抗菌肽通过破坏微生物细胞膜结构发挥杀菌作用，这使其能够有效规避常见耐药机制。特别值得注意的是，源自食品蛋白质（如小麦蛋白）的抗菌肽具有天然、易吸收及符合清洁标签趋势等优势，在功能性食品和营养制剂领域展现出巨大潜力。
发表于《Journal of Agriculture and Food Research》的最新研究中，西南民族大学研究团队从小麦胚芽蛋白水解物中分离出一种仅由甘氨酸-酪氨酸-脯氨酸构成的三肽GYP，系统探究了其对H. pylori感染的抑制作用及分子机制。研究人员通过反向高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化小麦蛋白水解物，采用Edman降解测定氨基酸序列，并利用固相合成技术获得高纯度（98.3%）GYP肽。体外实验通过最小杀菌浓度测定、扫描电镜观察、脲酶活性检测和实时荧光定量PCR等技术评估GYP对H. pylori的直接抑制作用；体内实验采用H. pylori感染BALB/c小鼠模型，通过组织病理学染色、快速脲酶试验和ELISA检测评估GYP对胃部感染和炎症的改善效果；细胞实验则通过CCK-8法、流式细胞术和Western blotting等技术分析GYP对人胃黏膜上皮细胞(GES-1)的保护作用及AMPK信号通路的调控机制。
3.1. 肽制备
研究团队通过碱性蛋白酶和中性蛋白酶分步水解小麦谷蛋白，获得具有抑菌活性的寡肽混合物。经RP-HPLC分离后，第3组分显示出最强的H. pylori抑制活性（抑菌圈直径8.3±0.2 mm），进一步纯化鉴定出其活性成分为三肽GYP。合成GYP的抑菌效果与天然提取物相当（抑菌圈直径7.7±0.2 mm），且其仅含三个氨基酸的短链结构相较于已知抗H. pylori肽更具应用优势。
3.2. GYP抑制H. pylori生长
浓度梯度实验显示GYP对H. pylori的最小杀菌浓度为5 mg/mL，可使细菌数量减少99.9%。同时，GYP剂量依赖性地抑制H. pylori脲酶活性（5 mg/mL时降至0.41±0.04倍）及毒力基因表达（UreB、CagA和VacA基因表达分别降至0.40±0.03、0.28±0.03和0.46±0.06倍）。扫描电镜观察发现GYP处理导致H. pylori细胞膜皱缩、边界模糊，证实其通过破坏细菌膜结构发挥杀菌作用。
3.3. GYP干扰H. pylori在小鼠胃组织定植
动物实验表明，口服GYP（1 mg/[g·d]）可有效清除H. pylori感染小鼠胃内细菌（8只中6只转阴），效果与四联疗法相当。GYP治疗组小鼠体重恢复、活动及摄食量改善，快速脲酶试验显示胃组织由紫红色转为淡黄色，证实GYP能显著减少H. pylori胃内定植。
3.4. GYP减轻H. pylori感染后小鼠炎症
组织病理学分析显示，GYP治疗显著减少胃黏膜下层炎性细胞浸润和血管充血现象。ELISA检测发现GYP剂量依赖性地降低血清促炎因子IL-1β（从160.09±4.44 pg/mL降至103.19±3.26 pg/mL）和TNF-α（从753.40±22.2 pg/mL降至583.94±16.46 pg/mL）水平，同时提升抗炎因子IL-10含量（从370.90±15.95 pg/mL升至483.47±14.02 pg/mL）。
3.5. GYP干扰H. pylori对人胃上皮细胞的黏附
细胞实验证实GYP可浓度依赖性地抑制H. pylori对GES-1细胞的黏附，并下调细菌黏附素BabA基因表达。该作用与前期报道的豌豆肽、玉米蛋白水解物的抗黏附效应类似，为抗H. pylori感染提供了非抗生素干预策略。
3.6. GYP保护人胃上皮细胞免受H. pylori损伤
显微镜观察和CCK-8检测显示，GYP处理显著逆转H. pylori引起的GES-1细胞数量减少和活力下降（5 mg/mL组细胞存活率接近正常对照组）。表明GYP通过抑制细菌黏附直接保护胃黏膜屏障完整性。
3.7. GYP抑制H. pylori诱导的人胃上皮细胞凋亡
流式细胞术检测发现GYP剂量依赖性地降低细胞早期和晚期凋亡率。Western blotting分析揭示其分子机制涉及下调促凋亡蛋白Bax表达、上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达，并激活AMPK磷酸化（5 mg/mL组p-AMPK/AMPK比值升至2.25±0.13倍）。表明GYP通过调控AMPK能量代谢通路抑制H. pylori触发的线粒体途径凋亡。
3.8. GYP抑制H. pylori诱导的人胃上皮细胞炎症
细胞因子检测显示GYP处理显著降低GES-1细胞内IL-1β（从118.57±2.11 pg/mL降至74.22±1.92 pg/mL）和TNF-α（从118.01±2.87 pg/mL降至74.30±2.59 pg/mL）水平，同时升高IL-10含量（从368.97±11.58 pg/mL升至569.83±11.99 pg/mL），与动物实验结果相互印证，证实GYP对H. pylori相关炎症的系统性抑制作用。
本研究首次报道小麦源三肽GYP通过多重机制发挥抗H. pylori作用：直接破坏细菌膜结构、抑制毒力因子产生、干扰胃黏膜定植、减轻炎症反应和保护上皮细胞功能。特别重要的是，GYP激活AMPK信号通路这一新机制的揭示，为理解抗菌肽的宿主定向保护作用提供了新视角。相较于传统抗生素，GYP具有原料来源广泛、结构简单、作用机制多靶点等优势，在功能性食品、营养补充剂及幽门螺杆菌感染辅助治疗领域具有广阔应用前景。未来研究需进一步探讨GYP在复杂胃环境中的稳定性及其与宿主细胞的精确互作靶点，以推动其临床转化应用。
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