CDC6通过CCND1/P53信号通路促进缺血-再灌注损伤引起的压力损伤中的角质形成细胞衰老

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CDC6通过CCND1/P53信号通路促进缺血-再灌注损伤引起的压力损伤中的角质形成细胞衰老

时间：2026年1月23日

来源：Experimental Cell Research

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压力性损伤的病理机制研究揭示缺血再灌注损伤诱导角质形成细胞衰老的关键调控蛋白CDC6通过p53/CCND1通路促进衰老并直接与ORC2相互作用，为溃疡治疗提供新靶点。

陈明王|朱珊珊|戴美格|陈慧

中国浙江省杭州市杭州老年病医院伤口修复科

摘要

压力性损伤是由于皮肤和皮下组织长时间受压导致血液循环受阻，进而引起局部组织缺血、变性，最终发生坏死。缺血-再灌注（I/R）损伤是压力性损伤形成的关键病理机制之一。虽然细胞衰老已被证实与I/R相关的病理过程有关，但其在压力性损伤发展中的作用仍不明确。本研究旨在阐明角质形成细胞在皮肤I/R损伤中的衰老机制。我们使用体外缺氧/再氧合（H/R）模型，以人永生化角质形成细胞（HaCaT）模拟I/R损伤。H/R处理显著加剧了细胞衰老反应，表现为细胞增殖减少、凋亡增加、SA-β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）活性升高以及衰老标志物（p16和p21）的表达上调。定量蛋白质组学分析显示，在H/R条件下CDC6蛋白显著上调。siRNA介导的CDC6敲低实验可减轻角质形成细胞的衰老，恢复G1/S期周期蛋白D1（CCND1）的表达，并抑制p53水平，这表明CDC6通过p53/CCND1通路调节细胞衰老。此外，蛋白质相互作用网络分析和实验验证表明CDC6直接与起源识别复合体2（ORC2）结合，这一结合通过核共定位（免疫荧光）和物理相互作用（共免疫沉淀）得到证实。总体而言，我们的发现为压力性损伤病理机制的研究开辟了新途径，并提出了以衰老为靶点的干预措施作为治疗溃疡的新策略。

部分内容摘录

引言

压力性损伤（PI），也称为褥疮或压迫性溃疡，是临床上的一大挑战，尤其是在行动不便或老年人群中，会导致严重的发病率和经济负担[1]、[2]、[3]。压力性损伤的发病机制较为复杂，其中缺血-再灌注（I/R）损伤是一个关键因素。皮肤组织中的反复缺血和再灌注循环会导致氧化应激、炎症细胞浸润和内皮功能障碍，最终造成组织损伤。

抗体和试剂

针对p21、p16和ORC2(3G6)的一抗购自Cell Signaling Technology（美国马萨诸塞州丹弗斯）。针对GATA6和CDC6的一抗购自Abcam。针对p53和CCND1的一抗购自Proteintech Group, Inc。辣根过氧化物酶标记的二抗购自Proteintech Group, Inc。FITC标记和Fluor 549标记的二抗购自servicebio。用于检测衰老的β-半乳糖苷酶染色。

缺血-再灌注损伤诱导人类角质形成细胞衰老

为了模拟体内的缺血-再灌注过程，将人类皮肤角质形成细胞HaCaT暴露于缺氧-葡萄糖剥夺（OGD/R）和再氧合处理。实验组包括对照组（NC）、OGD/R（2小时缺氧-葡萄糖剥夺后24小时再氧合和重新供应葡萄糖，OGD2h_R）以及OGD/R（6小时缺氧-葡萄糖剥夺后24小时再氧合和重新供应葡萄糖，OGD6h_R）。通过CCK8检测细胞增殖，通过流式细胞术检测细胞凋亡。

讨论

本研究首次揭示CDC6通过CCND1/P53信号通路促进压力性损伤中的角质形成细胞衰老，为压力性损伤的治疗提供了新的靶点和思路。结果表明，CDC6通过调节CCND1/P53通路并直接与ORC2蛋白相互作用，在I/R诱导的角质形成细胞衰老中起关键作用。这些结果加深了我们对压力性损伤发病机制的理解。

结论

总之，本研究表明CDC6通过P53/CCND1信号通路促进缺血-再灌注损伤引起的压力性损伤的发展，为压力性损伤的治疗提供了理论依据。

作者贡献声明

陈慧：撰写 – 审稿与编辑、初稿撰写、数据可视化、结果验证、项目监督、软件使用、资源管理、方法设计、实验设计、资金申请、数据分析、概念构建。朱珊珊：数据管理。戴美格：数据管理。陈明王：撰写 – 审稿与编辑、初稿撰写、数据可视化、结果验证、项目监督、软件使用、资源管理、方法设计、实验设计、资金申请。