细胞生长进程及短期微小温度变化对黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)胚胎细胞系线粒体生理的影响

时间:2026年2月7日
来源:Journal of Insect Physiology

编辑推荐:

本研究利用果蝇胚胎Schneider S2细胞系,通过高分辨率呼吸测定,探究细胞生长阶段(第2天早期与第7天晚期)及轻微温度变化(26℃ vs 28℃)对线粒体生理的影响。结果表明,生长阶段和温度升高协同增强基础呼吸、OXPHOS及泄漏呼吸,而线粒体耦合效率影响较小,提示线粒体生物生成与功能重编程的作用,为代谢适应及疾病治疗提供新见解。

广告
   X   

Rodiésley S. Rosa|Ana Paula M. Mendonça|Matheus P. Oliveira|Danielle B. Carvalho|Leonardo Vazquez|Marcus F. Oliveira
里约热内卢联邦大学Leopoldo de Meis医学生物化学研究所应激反应生物化学实验室,巴西里约热内卢,RJ 21941-590

摘要

果蝇Drosophila melanogaster是研究与哺乳动物共有的细胞和代谢过程的宝贵模型。利用其胚胎Schneider S2细胞系(一种广泛用于异源蛋白表达的系统),我们通过高分辨率呼吸测定法研究了细胞生长进程和短期温度变化如何影响线粒体生理功能。我们在培养的第2天(早期)和第7天(晚期),以及两种温度(26°C和28°C)下,评估了五个线粒体生物能量参数和两个耦合参数。我们观察到,培养时间是细胞密度变化的主要驱动因素,而温度的影响较为有限。重要的是,2°C的轻微升高,结合到细胞生长后期阶段,会协同增强基础呼吸、氧化磷酸化(OXPHOS)和泄漏呼吸,而对耦合效率的影响则很小。值得注意的是,无论是细胞生长还是轻微的温度升高,备用呼吸能力和最大呼吸能力都不成比例地增加,这表明线粒体发生了生物发生和功能重塑。这些发现表明,微小的短期温度变化可以迅速引发线粒体适应,从而提高生物能量能力和代谢灵活性,而不影响效率。这类响应体现了线粒体对环境和发育信号的适应性,可能为调节生物和生物医学环境中的线粒体生理功能提供策略。

引言

Drosophila melanogaster是一种强大的、成熟的模型生物,用于理解包括许多与人类健康相关的保守代谢途径在内的基本生物过程(Pandey和Nichols,2011)。果蝇具有类似哺乳动物肝脏和脂肪组织的器官(如昆虫脂肪体),这些器官在代谢和功能上具有相似性,是能量储存和内分泌信号传导的关键部位(Gutierrez等人,2007)。这种高度的保守性使Drosophila成为研究复杂状况(包括代谢紊乱、心血管疾病和神经退行性疾病)的宝贵工具。
为了便于进行细胞水平的研究,人们建立了来自Drosophila胚胎的细胞系(Schneider,1972)。其中,Schneider-2(S2)细胞系已成为一个广泛使用的平台。S2细胞可以在悬浮状态或贴壁单层状态下生长,被广泛用于研究多种细胞过程,并作为异源蛋白表达的稳健系统(Abrams等人,1992;Moraes等人,2012)。这些细胞能够实现高效的基因沉默、活细胞有丝分裂成像和大规模蛋白质生产,使其成为功能基因组学和宿主-病原体相互作用研究的宝贵工具(Cherbas等人,2011;Elwell和Engel,2005;Schneider,1972)。尽管应用广泛,但S2细胞的基本生物能量学特性,特别是线粒体生理及其调控机制,仍然知之甚少(Abrams等人,1992;Moraes等人,2012;Pamboukian等人,2008)。
细胞能量代谢受到内在生理状态和外部环境信号的动态调节。在细胞生长和细胞周期进展过程中,合成代谢需求强烈影响代谢活动,而pH值和温度等因素则显著调节这些过程(Humez等人,2004;Jandova等人,2012;Place等人,2017;Vander Heiden等人,2001)。最近的证据表明,由于氧化磷酸化(OXPHOS)产生的热量,线粒体能够维持比周围环境更高的温度,并且许多线粒体酶部分适应了在这种升高的温度条件下工作(Chrétien等人,2018;Di等人,2022;Fukushima等人,2024;Romshin等人,2023;Terzioglu等人,2023)。值得注意的是,线粒体产热似乎是线粒体能量代谢的内在特性。尽管OXPHOS活性的调节强烈影响线粒体温度,但只要替代代谢途径(如产热替代氧化酶(AOX)途径)保持活跃,线粒体倾向于维持其内部温度。重要的是,无论使用何种方法测量细胞或线粒体温度,这些发现都是一致的(Di等人,2022;Fukushima等人,2024;Romshin等人,2023;Terzioglu等人,2023)。相反,在热应激条件下,细胞似乎通过适应性稳态机制调节线粒体产热,从而在不长期破坏线粒体温度稳定性的情况下维持其稳定性(Jacobs等人,2024)。
多项研究探讨了S2细胞对温度波动和压力的响应(Bouchet等人,2014;Jevtov等人,2015;Klepsatel等人,2019;Moraes等人,2012;Nadeau和Teets,2020)。虽然有研究表明在24°C和28°C之间最大特定生长率没有显著差异,表明在这个范围内增殖稳定(Moraes等人,2012),但其他研究揭示了在热应激下应激和代谢途径的激活,包括TORC2介导的热休克反应(Jevtov等人,2015)。即使是微小的温度变化(例如从22°C升至24°C)也被证明会导致生理变化,如细胞大小的变化(Jalal等人,2015)。
我们假设微小的、生理相关的温度变化(26°C vs 28°C)以及细胞生长阶段的进展会独立和相互作用地调节S2细胞的线粒体生理功能。因此,本研究的主要目的是探讨细胞生长和轻微温度变化对S2细胞线粒体生物能量参数的不同影响。

试剂

所有通用试剂均从Merck-Sigma Aldrich(美国)购买。胎牛血清(FBS)和Schneider培养基从LGC Biotecnologia(巴西)获得。

细胞培养

Schneider的Drosophila melanogaster胚胎细胞系S2由里约热内卢联邦大学(UFRJ)生物医学科学研究所组织学和胚胎学系的Helena Araújo教授提供。细胞在25平方厘米的培养瓶中,在26°C或28°C(±1°C)下培养,使用Schneider培养基。

实验方案

我们使用Schneider S2Drosophila胚胎细胞系(S2)来研究细胞生长阶段和培养温度的变化如何影响线粒体生物能量能力和效率。通过高分辨率呼吸测定法测量五种线粒体呼吸状态:基础呼吸、氧化磷酸化(OXPHOS)、质子泄漏、备用呼吸能力和最大电子传输系统(ETS)能力。测量在两种培养温度(26°C和

讨论

这里的发现表明,细胞生长进程和轻微的温度升高显著激活了线粒体生理功能,主要是通过增加线粒体的最大和备用呼吸能力实现的。观察到的线粒体生理变化与报道的热应激诱导的线粒体生物发生和OXPHOS重塑一致(Jacobs等人,2024)。此外,由于细胞增殖基本保持一致

结论

总之,我们的结果表明,轻微的温度升高和细胞生长促进了线粒体适应,从而提高了生物能量能力,而不会损害耦合效率,前提是热应激保持在生理范围内。在这些条件下,S2细胞中线粒体生物能量能力的增加可能反映了线粒体含量的增加,同时保持了生物能量效率。这些发现对于理解

写作过程中生成式AI和AI辅助技术的声明

在准备这项工作时,作者使用了AI语言模型Gemini Pro 2.5和Perplexity Pro,用于两个目的:i) 生成用于统计分析的R代码,如方法部分所述;ii) 提高英语表达的质量。在需要修改时,这些模型被指令为:“修改以下部分,使其更加清晰,并采用以英语为母语的人进行写作”。作者对

CRediT作者贡献声明

Rodiésley S. Rosa:写作——审阅与编辑、方法论、研究、数据管理。Ana Paula M. Mendonça:写作——初稿撰写、监督、形式分析、概念构建。Matheus P. Oliveira:写作——初稿撰写、监督、形式分析、概念构建。Danielle B. Carvalho:写作——审阅与编辑、研究、形式分析、数据管理。Leonardo Vazquez:写作——审阅与编辑。Marcus F. Oliveira:写作——审阅与编辑、初稿撰写

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的可能会影响本文报告工作的财务利益或个人关系。

致谢

我们感谢编辑和审稿人对原稿提出的宝贵意见和批评。本研究部分由巴西高等教育人员培训协调委员会(CAPES)[资助代码001]、国家科学技术发展委员会(CNPq)[资助编号:308629/2021-3]和圣保罗州研究资助基金会[资助编号:2021/06711-2]提供资金支持。资助方未参与

生物通微信公众号
微信
新浪微博


生物通 版权所有