亨廷顿病（Huntington's disease, HD）是一种令人绝望的遗传性神经退行性疾病，患者会逐渐出现运动失调、精神异常和认知衰退。其根源在于亨廷顿蛋白（huntingtin, HTT） 基因外显子1中的一段CAG重复序列异常扩增。这段“重复密码”的扩增不仅会产生带有超长多聚谷氨酰胺（polyQ）链的毒性突变蛋白，其自身还会在人的一生中，于特定神经元内像“雪球”一样不断变长，这一过程称为体细胞CAG重复扩增，是驱动疾病发生和进展的关键动力。随着CAG重复序列越来越长，HTT 基因的前体信使RNA（pre-mRNA）还会发生一种特殊的“错误加工”，产生一个名为HTT1a 的短转录本，其编码的HTT1a蛋白被证明具有极强的聚集倾向和致病性。因此，科学家们认为，降低HTT 转录本水平是治疗HD的核心策略之一。然而，一个关键问题悬而未决：应该降低哪一个转录本？是同时靶向全长HTT 和HTT1a ，还是仅仅靶向全长HTT ？此前一项靶向全长HTT 的反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide, ASO）疗法的三期临床试验未能显示益处，这促使研究人员重新审视治疗靶点的选择。
在此背景下，由Papadopoulou等人开展的研究发表于《科学·转化医学》（Science Translational Medicine ），旨在直接比较在HD小鼠模型中，选择性降低毒性Htt1a 转录本与降低全长Htt 转录本，哪种策略对缓解疾病核心分子病理更为有效。他们的研究发现，尽管降低全长Htt 的药物效力更强，但选择性降低Htt1a 在延缓突变蛋白（HTT）聚集和纠正基因转录失调方面表现出更优的效果。这项研究为亨廷顿病的治疗开发指明了新的方向：针对致病性更强的HTT1a 转录本进行干预，可能比泛泛地降低所有HTT 转录本更具治疗前景。
为开展此项研究，作者运用了多项关键技术：首先，他们设计并筛选了能够特异性靶向小鼠Htt1a 转录本的小干扰RNA（siRNA）；其次，使用了经过充分表征的zQ175基因敲入小鼠作为疾病模型，并设计了包含早期干预、双重干预和晚期干预的多个治疗队列；再者，通过脑室注射给药，并利用QuantiGene多通路检测和均相时间分辨荧光（homogeneous time-resolved fluorescence, HTRF）等技术，精准定量不同脑区中Htt /Htt1a 转录本和蛋白的水平变化；最后，结合免疫组织化学、RNA测序（RNA-seq）等高通量技术，系统评估了治疗对HTT蛋白聚集和全基因组转录谱的影响。
研究结果
识别靶向小鼠Htt 内含子1的siRNAs
研究人员设计并筛选了24个靶向小鼠Htt 基因内含子1（第一个隐性polyA位点之前）的siRNA。通过荧光素酶报告基因系统在HeLa细胞和小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts, MEFs）中进行初筛和验证，最终鉴定出编号为634和486的siRNA能有效且选择性地降低Htt1a 转录本，而对全长Htt 影响甚微。同时，他们使用了一个已知可高效降低全长Htt 的siRNA（10150）作为对照。
10150 siRNA和643/486 siRNAs在体内对其靶标具有特异性
将10150和634/486 siRNA进行二价修饰以增强其在中枢神经系统的效力和持久性后，通过脑室注射给野生型和zQ175小鼠。注射后一个月的数据显示，10150能特异性且显著降低海马、纹状体等脑区的全长HTT蛋白，而不影响Htt1a mRNA；相反，634/486组合能特异性降低HTT1a蛋白，对全长HTT无影响。研究还观察到一个有趣现象：降低全长HTT后，HTTRF检测显示HTT1a蛋白似乎有所增加，但随后的免疫沉淀- Western blot实验在变性条件下并未证实此增加，其机制尚不明确。
评估靶向Htt 或Htt1a 疗效的干预性试验
研究设计了严谨的干预试验，在zQ175小鼠2月龄（症状出现前）或6月龄（症状已确立）时开始治疗，并设立早期（EARLY）、双重（DOUBLE）和晚期（LATE）治疗队列，以比较10150（靶向全长Htt ）和634/486组合（靶向Htt1a ）的长期效果。
对Htt1a 的持续降低在海马区最为显著
治疗后4个月的评估显示，两种siRNA的效力在海马区最为显著和持久。10150能持续降低全长HTT蛋白，而634/486组合能在双重和晚期治疗队列中持续降低HTT1a蛋白，但在纹状体和皮层，其效果的持久性较弱。
靶向Htt1a 延迟了海马区的核内HTT聚集
海马区的免疫组织化学分析显示，HTT聚集是该模型最早出现的病理表型之一。尽管10150在降低全长HTT方面效力更强，但634/486在延缓海马CA1、CA3和齿状回神经元核内的弥漫性HTT聚集和核内包涵体形成方面效果更为突出。两种治疗对CA3区和海马门区的神经毡（细胞外）聚集均有减少作用。定量分析证实，在延缓海马区整体HTT聚集方面，靶向Htt1a 的效果优于靶向全长Htt 。
靶向Htt1a 比靶向Htt 更能延迟海马区的转录失调
RNA测序分析显示，转录失调是核内HTT聚集的后果。在2月龄开始治疗（早期和双重队列）能部分恢复zQ175小鼠海马区的异常转录组，且634/486（靶向Htt1a ）的效果比10150更显著。然而，在6月龄开始治疗（晚期队列）则效果甚微，甚至可能加剧部分基因的失调。
降低全长HTT对纹状体的HTT聚集或转录失调无影响
在纹状体，10150治疗能持续降低约30%-60%的全长HTT蛋白，但这对纹状体的HTT聚集（无论是组织切片观察还是HTRF定量）均无改善作用。对纹状体转录组的分析也显示，10150治疗仅使6%的失调基因表达向野生型水平回调，效果微弱。这与历史上使用Lac 阻遏子系统在Q140小鼠中同时降低突变Htt 和Htt1a 表达（约50%），能显著逆转大部分纹状体转录失调的结果形成对比，暗示同时降低Htt1a 可能是产生益处的关键。
研究结论与意义
本研究通过头对头比较，在zQ175亨廷顿病小鼠模型中证实，尽管选择性降低Htt1a 转录本的siRNA在药效上不如降低全长Htt 的siRNA强，但在延缓疾病的两个核心分子病理特征——HTT蛋白聚集和转录组失调——方面却更为有效。尤其是在海马区，靶向Htt1a 能几乎完全阻止神经元核内弥漫性聚集和包涵体的形成，并对神经毡聚集也有显著抑制作用。相比之下，仅降低全长HTT对某些脑区（如纹状体）的病理改善有限。
这些发现具有重要的理论和临床意义。首先，它深化了人们对HD致病机制的理解，强调了毒性剪接变体HTT1a在疾病早期病理，特别是蛋白聚集启动中的关键作用。随着CAG重复的体细胞扩增，HTT1a 产生增加，其编码的蛋白可能成为聚集过程的主要“ nucleation”（成核）种子。其次，研究结果为当前HD的基因沉默治疗策略提供了关键的决策依据。此前靶向全长HTT 的临床试验未达预期，而本研究数据不支持仅靶向全长HTT的策略。相反，它强烈支持那些能够同时降低HTT 和HTT1a 的治疗方法（如某些 miRNA、锌指蛋白或反义寡核苷酸），或未来开发特异性靶向人源HTT1a 的新型药物。最后，研究再次提示早期干预的重要性，在蛋白聚集等病理显著确立后再进行治疗，效果将大打折扣。
总之，这项研究指明了一条更具靶向性的亨廷顿病治疗新路径：将火力对准那个更具“毒性”、与疾病驱动因素关联更直接的“坏分子”——HTT1a，或许能为攻克这一顽疾带来新的曙光。
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