通过将传统的聚乳酸双层底容器包装与具有动态抗菌作用的反式-2-己烯醛和壳聚糖衍生物相结合,延长新鲜切水果沙拉的保质期

时间:2026年3月29日
来源:Food Chemistry

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采用可逆希米特-埃德曼反应将trans-2-己烯醛稳定于壳聚糖薄膜,集成到PLA双底孔包装容器中,通过水果渗出液触发醛类释放,有效抑制鲜切混合果沙拉的微生物生长,延长保鲜期达12天,并验证了低剂量下对线虫的的安全性。

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帕特里夏·埃斯特韦-雷东多(Patricia Esteve-Redondo)|拉克尔·埃拉斯-莫索斯(Raquel Heras-Mozos)|格拉西亚·洛佩兹-卡尔瓦略(Gracia López-Carballo)|拉斐尔·加瓦拉(Rafael Gavara)|皮拉尔·埃尔南德斯-穆尼奥斯(Pilar Hernández-Muñoz)
包装组,农业化学与食品技术研究所(IATA-CSIC),阿古斯丁·埃斯卡迪诺大道(Av. Agustín Escardino)7号,46980帕特纳,西班牙

摘要

反式-2-己烯醛(HX)通过可逆的亚胺形成被稳定在氨基多糖壳聚糖薄膜中,并被整合到含有穿孔双底的脂肪族聚乳酸(PLA)容器中,用于保存最小程度加工的混合水果沙拉。水果渗出物会引发亚胺水解,从而实现HX的控释。在6°C下储存12天后,对照样品中的霉菌、酵母和中温细菌的菌落数量达到5.2 log CFU/g,而活性包装组的菌落数量显著降低。此外,活性系统显著减少了沙门氏菌肠炎亚种Salmonella enterica)、李斯特菌无害亚种Listeria innocua)和大肠杆菌Escherichia coli)的数量,同时有效保持了菠萝和甜瓜的颜色等品质特性。在第12天时,使用0.5克和0.25克活性薄膜时,沙拉中吸附的HX含量分别为3.1 ± 0.4 μg/g和2.0 ± 0.4 μg/g。使用秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans)进行的毒理学评估显示其存活率为100%,证实了沙拉中HX含量的安全性。

引言

近年来,对方便食品和即食食品的需求显著增加。其中,新鲜切割的水果因其便利性、营养价值以及与健康益处的关联而受到广泛欢迎(Mesías等人,2021年)。然而,确保新鲜切割水果的质量和安全仍然是一个重大挑战。最小程度加工的水果极易变质,容易受到微生物污染(Firdous等人,2023年)。由于加工过程简单,新鲜切割的水果可能成为单核细胞增生李斯特菌Listeria monocytogenes)、大肠杆菌Escherichia coli)和沙门氏菌等病原体的生长载体,从而对公共健康构成潜在风险(Yousuf等人,2019年)。最近报道了多起与这些病原体相关的疫情,包括甜瓜中的单核细胞增生李斯特菌沙门氏菌(疾病控制与预防中心 [CDC],2017年;FDA,2023年);以及新鲜切割水果(甜瓜、葡萄和菠萝)和木瓜中的沙门氏菌(CDC,2020年)。
新鲜切割水果的微生物污染可能发生在从农场到消费者的各个加工环节。不同病原体的潜在生长取决于多种因素,如温度、水分活度或水果的pH值。例如,pH值在5.2到5.8之间的新鲜切割甜瓜特别容易受到微生物污染和变质,因为这种pH范围为细菌生长提供了有利条件。相比之下,pH值在3.5到3.8之间的菠萝则不利于细菌存活和繁殖(Ziegler等人,2018年)。尽管如此,某些细菌仍能在更酸性的水果上存活。例如,大肠杆菌 O157:H7和沙门氏菌在4°C、10°C和20°C下储存2天后仍能在新鲜切割的菠萝中存活(Strawn & Danyluk,2010年)。因此,多组分水果沙拉的包装在质量和安全方面带来了额外的复杂性(Muñoz等人,2022年),因为不同水果块之间可能发生交叉污染,从而在某一成分提供的有利条件下促进病原体的繁殖。
为了确保新鲜切割水果的质量和安全,抗菌活性包装成为一种有前景的解决方案。这些系统通过抑制或减缓腐败和病原微生物的生长来延长产品保质期。这可以通过在包装设计中加入挥发性化合物(如精油或其活性成分)并使其在产品周围的空间中缓慢释放来实现。然而,由于这些化合物的挥发性和热不稳定性,这种方法面临诸多挑战:a) 如何高效地将挥发性物质融入包装;b) 如何设计有效的机制来触发其释放。
在这方面,基于挥发性抗菌剂与聚合物主链功能基团的可逆共价结合的刺激响应型抗菌聚合物为上述问题提供了解决方案。
与传统的将挥发性抗菌剂与聚合物混合的方法相比,高蒸气压生物活性分子与固体聚合物基质的可逆共价固定具有多种优势,例如在加工和储存过程中提高活性物质的稳定性,以及提供可控的活性分子释放机制。有多种易于形成和逆转的可逆键,其中通过伯胺和羰基之间的可逆缩合形成亚胺。形成的席夫碱(Schiff base)是一种亚胺,在微酸性介质中可以分解,释放之前附着的挥发性物质。
在这方面,可以使用壳聚糖作为聚合物来设计刺激响应型材料,因为它含有许多伯胺基团,可以与挥发性抗菌醛的羰基形成亚胺。这样,天然存在的具有抗菌特性的挥发性醛可以在壳聚糖中稳定下来,形成可逆的亚胺。席夫碱在微酸性溶液中的水解会激活固定醛的释放。在天然存在的醛中,反式-2-己烯醛trans-2-hexenal)因其广谱抗菌效果和在植物组织中的天然存在而脱颖而出。该醛被联合国粮农组织/世界卫生组织食品添加剂专家委员会(FAO/WHO JECFA)认定为对人体安全,并已证明对多种微生物具有活性(Dong等人,2021年;Heras-Mozos, García-Moreno等人,2021年;Neri等人,2006年)。反式-2-己烯醛是一种α,β-不饱和醛,容易通过与壳聚糖伯胺基团的1,2亲核加成在其羰基碳原子上形成亚胺。然而,这种醛也可以在β碳原子上发生1,4加成或迈克尔加成(Michael addition),形成迈克尔加合物。迈克尔加合物难以逆转,从而阻碍了挥发性物质的释放,进而影响薄膜的抗菌效果。由于1,2加成和1,4加成具有竞争性,我们的团队优化了反式-2-己烯醛-亚胺壳聚糖薄膜的合成,以最大化醛的释放并增强薄膜的抗菌性能。合成过程中需要低反应温度和无需酸催化剂,以获得高程度的壳聚糖席夫碱功能化(Esteve-Redondo等人,2025年)。
在上述背景下,本研究的目的是通过使用创新的响应型包装来提高由葡萄和新鲜切割的菠萝、甜瓜块组成的新鲜切割水果沙拉的保质期和安全性。因此,将经过化学改性的壳聚糖薄膜(含有与反式-2-己烯醛形成的亚胺)整合到聚乳酸(PLA)容器的穿孔双底中,使水果渗出物渗透到双底并激活薄膜,将反式-2-己烯醛释放到包装的空间中。首先,使用Esteve-Redondo等人(2025年)优化的方法在壳聚糖薄膜中形成了亚胺,并通过ATR-FTIR和元素分析进行了表征。然后,通过连续气相色谱监测了化学改性壳聚糖薄膜中反式-2-己烯醛的释放情况,利用沙拉渗出物的酸度作为触发因素来促进亚胺键的水解。最后,在6°C下储存12天后,评估了包装水果沙拉的微生物负荷和主要品质特性。此外,还评估了该创新包装系统对沙门氏菌肠炎亚种Salmonella enterica)、大肠杆菌李斯特菌无害亚种Listeria innocua,作为单核细胞增生李斯特菌的替代菌株)的抗菌效果。最后,使用秀丽隐杆线虫作为模型生物,研究了储存12天后沙拉中吸附的反式-2-己烯醛总量对细胞的潜在毒性影响。

材料

低分子量壳聚糖(脱乙酰度75–85%,分子量范围50–190 KDa)和反式-2-己烯醛(HX)由Sigma Aldrich(西班牙巴塞罗那)提供;37%盐酸(HCl)、96%乙醇(体积/体积)和氢氧化钠(NaOH)由Scharlab(西班牙)提供。大肠杆菌Escherichia coli)、沙门氏菌肠炎亚种Salmonella enterica)和李斯特菌无害亚种Listeria innocua,作为单核细胞增生李斯特菌的替代菌株)来自西班牙典型培养物收藏中心(CECT 434、CECT 4300和CECT 910)。培养基

通过ATR-FTIR和元素分析评估壳聚糖薄膜中的亚胺形成

使用ATR-FTIR研究了反式-2-己烯醛(HX)与改性薄膜(CSHX)中的壳聚糖之间的化学相互作用,这些相互作用的示意图见补充材料中的图S2。未改性的壳聚糖对照薄膜(CS)作为参考。光谱记录在1700–800 cm−1范围内,并以聚合物主链的C6-OH伸缩峰(1025 cm−1)进行归一化。

结论

研究表明,反式-2-己烯醛-亚胺壳聚糖(CSHX)薄膜作为pH响应型材料在微生物保存最小程度加工的水果方面具有潜力。这些功能化薄膜被整合到专门为新鲜切割水果沙拉设计的包装系统中,并证明了在酸性条件下(pH 4)由水果渗出物触发时能够可控地释放反式-2-己烯醛。这种触发机制确保了

CRediT作者贡献声明

帕特里夏·埃斯特韦-雷东多(Patricia Esteve-Redondo):撰写——原始草稿、方法论、研究、数据分析。拉克尔·埃拉斯-莫索斯(Raquel Heras-Mozos):撰写——原始草稿、研究、数据分析。格拉西亚·洛佩兹-卡尔瓦略(Gracia López-Carballo):撰写——原始草稿、监督、方法论、研究、数据分析。拉斐尔·加瓦拉(Rafael Gavara):撰写——审稿与编辑、资源管理、项目协调、研究、资金获取。皮拉尔·埃尔南德斯-穆尼奥斯(Pilar Hernández-Muñoz):撰写——审稿与编辑

未引用的参考文献

疾病控制与预防中心 [CDC],2020年
Ehtesham Nia, Taghipour 和 Siahmansour,2021年
Kasaai, Arul, Chin 和 Charlet,1999年
沙门氏菌疫情调查:哈密瓜,2023年
Swetha 等人,2023年

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的财务利益或个人关系可能影响本文所述的工作。

致谢

作者感谢西班牙科学、创新与大学部(MCIU)通过项目PID2021-123077OB-I00和PDC2022-133169-I00(MCIU/AEI/FEDER,欧盟)提供的财政支持。作者还感谢西班牙政府MCIU/AEI授予IATA-CSIC的Severo Ochoa卓越中心认证(CEX2021-001189-S/MCIU/AEI / 10.13039/501100011033)。

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