目的：本研究以人永生化角质形成细胞株(HaCaT)体外模型，探讨沙棘(Hippophae rhamnoides)对银屑病及非酒精性脂肪肝病(NAFLD)相关脂质代谢紊乱细胞反应的影响，重点聚焦于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路。方法：将HaCaT细胞分为正常对照(NC)组(常规培养)、白细胞介素(IL)-17组(80 ng/L IL-17诱导银屑病模型)、甘油三酯(TG)组(0.15 g/L TG处理诱导脂质蓄积以建立NAFLD相关脂质应激体外细胞模型)、IL-17+TG组(联合诱导)及IL-17+TG+沙棘含药血清(SBCS)组。采用MTT法检测细胞增殖活力，酶比色法测定脂质谱指标，流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期分布，Western blotting检测PI3K/AKT/FoxO1通路关键组分的蛋白水平。结果：与NC组相比，IL-17组细胞增殖增加、凋亡率降低(P<0.05)；TG组TG及低密度脂蛋白(LDL)升高、高密度脂蛋白(HDL)降低(P<0.05)；IL-17组与TG组均出现G2/M期细胞周期阻滞，p-PI3K、p-AKT及p-FoxO1表达上调(P<0.05)；IL-17+TG组上述改变较单一模型组更显著。IL-17+TG+SBCS组较IL-17+TG组显著逆转上述各指标变化(P<0.05)。结论：沙棘对银屑病及NAFLD相关脂质代谢应激的细胞模型具有明显改善作用，其主要机制可能为有效抑制过度激活的PI3K/AKT/FoxO1通路，从而改善脂质代谢及细胞功能。
论文解读：沙棘通过PI3K/AKT/FoxO1信号通路改善银屑病及NAFLD相关脂质代谢应激的体外研究
研究背景与立题依据
银屑病是一种累及多器官系统的系统性炎症性疾病，常伴发糖尿病及非酒精性脂肪肝病（non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD）。NAFLD以肝组织过量脂质蓄积为特征，与肥胖、2型糖尿病及代谢综合征密切相关。银屑病患者中NAFLD患病率约为普通人群的1.5~3倍，两者共享慢性低度系统性炎症特征及磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase, PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B, AKT）/叉头框蛋白O1（forkhead box O1, FoxO1）通路异常活化这一共同病理机制，但目前银屑病合并NAFLD共病的防治及相关天然药物机制研究仍较匮乏。沙棘（Hippophae rhamnoides）含黄酮类、多糖及脂肪酸等活性成分，已被证实具抗炎、抗氧化及改善银屑病样病变和NAFLD脂质紊乱的作用，但其对银屑病–NAFLD共病样细胞模型及PI3K/AKT/FoxO1通路的调控尚待阐明。为此，研究人员建立IL-17与甘油三酯（triglyceride, TG）联合诱导HaCaT细胞的体外双重刺激模型，观察沙棘含药血清（sea buckthorn-containing serum, SBCS）对该模型细胞增殖、凋亡、细胞周期、脂质指标及PI3K/AKT/FoxO1通路的影响。
主要关键技术方法
研究人员采用人永生化角质形成细胞株（HaCaT）为研究对象，以80 ng/L IL-17模拟银屑病相关炎症刺激、0.15 g/L TG模拟NAFLD相关脂质超载刺激，设正常对照（NC）组、IL-17组、TG组、IL-17+TG组及IL-17+TG+SBCS组。SBCS由SD大鼠灌胃沙棘提取物（100 mg/kg，经HPLC标定总黄酮及主要黄酮苷含量）后腹主动脉采血制备。检测指标及方法包括：MTT法测细胞增殖活力；酶比色法检测上清TG、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein, LDL）、高密度脂蛋白（high-density lipoprotein, HDL）；流式细胞术Annexin V-FITC/碘化丙啶（propidium iodide, PI）双染测凋亡、PI染色测细胞周期；Western blotting检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、FoxO1、p-FoxO1蛋白表达（以GAPDH为内参）。数据以均值±标准差表示，多组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）及Tukey HSD事后检验，P<0.05为差异有统计学意义。
研究结果
3.1. Comparison of HaCaT cell proliferation viability in each group（各组HaCaT细胞增殖活力比较）
MTT检测显示，IL-17组细胞活力较NC组显著升高（P<0.05）；IL-17+TG组细胞活力较IL-17组及TG组进一步升高（P<0.05）；IL-17+TG+SBCS组较IL-17+TG组细胞活力显著降低（P<0.05），表明SBCS可抑制双重刺激诱导的角质形成细胞过度增殖。
3.2. Comparison of extracellular lipid levels of HaCaT cells in each group（各组HaCaT细胞外脂质水平比较）
酶比色法结果显示，TG组上清TG、LDL较NC组升高，HDL降低（P<0.05）；IL-17+TG组TG、LDL较IL-17组及TG组进一步升高，HDL进一步降低（P<0.05）；IL-17+TG+SBCS组较IL-17+TG组TG、LDL下降，HDL上升（P<0.05），提示SBCS改善双重刺激下的脂质代谢应激相关指标。
3.3. Comparison of HaCaT apoptosis rate（HaCaT细胞凋亡率比较）
流式细胞术检测显示，IL-17组凋亡率较NC组降低（P<0.05）；IL-17+TG组凋亡率较IL-17组及TG组更低（P<0.05）；IL-17+TG+SBCS组较IL-17+TG组凋亡率显著升高（P<0.05），说明SBCS可部分恢复被双重刺激抑制的细胞凋亡。
3.4. Comparison of the cell cycle distribution of HaCaT cells（HaCaT细胞周期分布比较）
PI染色流式分析显示，各组成G0/G1期比例无显著差异（P>0.05）；IL-17+TG组S期细胞比例显著增加（22.3%升至34.6%），G2/M期比例下降（18.7%降至12.4%），提示S期聚集；IL-17+TG+SBCS组S期比例回落（24.1%），G2/M期比例回升（16.8%），表明SBCS可使双重刺激引起的细胞周期分布趋于正常。
3.5. Comparison of PI3K/AKT/FoxO1 pathway status of HaCaT cells in each group（各组HaCaT细胞PI3K/AKT/FoxO1通路活化状态比较）
Western blotting结果显示，IL-17组及TG组p-PI3K、p-AKT、p-FoxO1较NC组升高（P<0.05）；IL-17+TG组上述磷酸化蛋白水平较IL-17组及TG组进一步升高（P<0.05）；IL-17+TG+SBCS组较IL-17+TG组p-PI3K、p-AKT、p-FoxO1表达显著降低（P<0.05），证实SBCS抑制双重刺激导致的PI3K/AKT/FoxO1通路过度活化。
讨论与结论翻译
本研究中，IL-17诱导HaCaT细胞过度增殖及凋亡受抑成功模拟银屑病细胞模型；TG处理致上清TG、LDL升高及HDL降低，模拟NAFLD相关脂质代谢失调微环境。二者联合诱导产生更显著的增殖增强、凋亡受抑、S期聚集及p-PI3K/p-AKT/p-FoxO1上调。SBCS干预可部分逆转上述异常改变，包括降低细胞活力、促进凋亡、恢复正常细胞周期分布、改善脂质相关指标及下调PI3K/AKT/FoxO1通路磷酸化水平。研究表明沙棘含药血清通过抑制过度激活的PI3K/AKT/FoxO1信号通路，对银屑病及NAFLD相关脂质代谢应激的体外双重刺激细胞模型发挥改善作用，为沙棘用于银屑病合并NAFLD的临床潜在应用提供了实验依据。但本研究为单一角质形成细胞体外模型，未模拟多器官交互及免疫细胞参与，尚需体内实验及肝细胞模型进一步验证。
Conclusion（结论原文浓缩翻译）
综上所述，经IL-17和TG联合诱导建立的银屑病及NAFLD相关脂质代谢应激细胞模型可促进角质形成细胞增殖、抑制凋亡、扰乱细胞周期进程并上调PI3K/AKT/FoxO1通路磷酸化水平。沙棘能够通过抑制PI3K/AKT/FoxO1信号通路的异常激活逆转上述异常改变，该结果为沙棘应用于临床银屑病合并NAFLD患者治疗提供了重要的实验证据。
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