NK细胞联合GS化疗重塑晚期胰腺癌动态免疫景观的Ib/II期研究及单细胞测序解析

【编辑推荐】为突破晚期胰腺癌（APC）免疫治疗瓶颈，本研究开展了一项首次人体Ib/II期临床试验，探索异体NK细胞联合吉西他滨+S-1（GS）方案的安全性与疗效。研究证实该联合方案安全性良好（无GVHD/DLT），客观缓解率（ORR）达31.6%，且通过纵向单细胞RNA测序（scRNA-seq）发现响应者外周血中活化NK细胞亚群（c4-ZEB2、c6-IL15等）及效应T细胞（CD8+ Teff、CD4+ Tem）扩增，伴随T细胞克隆扩张。该研究为NK细胞疗法在实体瘤中的免疫调控机制提供了高分辨率动态图谱。

胰腺癌被称为"癌王"，五年生存率不足10%，超过90%的患者确诊时已处于晚期。尽管吉西他滨联合S-1（GS）方案是亚洲人群一线化疗选择，但其疗效有限且易产生耐药性。免疫检查点抑制剂在胰腺癌中疗效甚微，这主要归因于免疫抑制性肿瘤微环境（TME）中致密的基质屏障和功能失调的内源性T细胞。自然杀伤（NK）细胞因其无需预敏化即可杀伤肿瘤细胞的特性，成为极具潜力的替代方案，但其在胰腺癌中的临床转化仍处于早期阶段，动态免疫响应机制尚不明确。

为破解这一困境，Qin Tan、Yifei Li等研究人员在《Signal Transduction and Targeted Therapy》发表了首个评估异体NK细胞联合GS化疗治疗晚期胰腺癌的Ib/II期临床试验成果。研究团队通过单细胞转录组学和T细胞受体（TCR）测序，首次绘制了治疗过程中外周免疫细胞的动态演化图谱，揭示了响应者特有的免疫激活特征。

关键技术方法

研究纳入25例晚期胰腺癌患者，采用剂量递增设计输注（1×10⁹-8×10⁹）异体NK细胞（来源包括外周血和脐带血）。通过10x Genomics平台对7例患者19个纵向外周血单核细胞（PBMC）样本进行单细胞RNA测序（scRNA-seq），并利用CellPhoneDB分析细胞互作。同时，对3例响应者开展批量TCR Vβ谱系测序，通过免疫arch包评估克隆多样性。

临床安全性与有效性

所有剂量水平均未出现剂量限制性毒性（DLT）或移植物抗宿主病（GVHD）。56.0%患者发生≥3级治疗相关不良事件（TRAEs），主要与化疗相关；NK输注相关不良事件均为1-2级（发热16.7%，疲劳12.5%）。19例可评估患者中，客观缓解率（ORR）为31.6%，疾病控制率（DCR）达73.7%。中位无进展生存期（mPFS）为6.6个月，中位总生存期（mOS）为10.8个月。转移性胰腺癌（MPC）亚组的ORR为25.0%，DCR为68.8%，提示联合疗法在晚期患者中具有临床潜力。

单细胞转录谱揭示响应相关免疫特征

对190,041个免疫细胞的scRNA-seq分析鉴定出28个细胞簇，包括NK/T细胞、B细胞、单核细胞等亚群。基因集富集分析（GSEA）显示治疗后样本中炎症反应通路显著激活。响应者外周血中特定NK细胞亚群（c4-ZEB2、c5-IL7、c6-IL15、c10-NCR3、c11-TNFSF8）比例升高，这些亚群高表达促炎因子（IL15、IFNG）及激活相关基因（CD226、NCR1）；而非响应者中抑制性表型亚群（c0-KLRB1、c1-LAG3）扩增。细胞互作分析进一步发现，响应者NK细胞与髓系细胞间毒性信号（如PVR-CD226）增强，而非响应者富集NKG2A/KIR抑制性信号。

T细胞克隆扩张与功能重塑

T细胞亚群分析显示，响应者中CD4⁺效应记忆T细胞（Tem）和CD8⁺效应T细胞（Teff）比例上升，且T细胞抑制受体评分下降。TCR测序发现响应者治疗后T细胞克隆多样性降低，大克隆及超扩增克隆比例增加，表明抗原特异性T细胞应答被激活。其中患者P27基线即存在扩增克隆，治疗后进一步维持，提示预存响应性T细胞库可能与疗效相关。

结论与展望

该研究首次证实异体NK细胞联合GS化疗在晚期胰腺癌中的安全性及初步疗效，并通过多组学分析揭示NK细胞疗法可能通过重塑外周免疫景观——即激活细胞毒性NK亚群、促进T细胞克隆扩张——发挥抗肿瘤作用。研究中发现的免疫特征（如c4-ZEB2 NK细胞、CD8⁺ Teff）在独立乳腺癌队列中同样显示与响应相关，表明其可能作为跨癌种的免疫治疗响应标志物。未来需通过随机对照试验验证联合方案优势，并探索与免疫检查点抑制剂（如抗PD-1）的协同潜力。