揭秘 ET-1：调控卵巢癌 “土壤” 的幕后推手，有望成为治疗新靶点？

时间：2025年2月22日

来源：Journal of Experimental & Clinical Cancer Research 11.4

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为探究 ET-1 对卵巢癌相关细胞外基质（ECM）蛋白的调控作用，研究人员开展 ET-1 在卵巢癌中作用的研究。结果发现 ET-1 影响 Col1 和 FN 表达，且高相关基因表达与患者预后不良有关。推荐阅读，助您了解卵巢癌研究新进展。

在癌症研究的大舞台上，卵巢癌一直是个让人头疼的 “反派”。卵巢癌中，浆液性卵巢癌（SOC）更是 “作恶多端”，它具有很强的侵袭和转移能力，严重威胁着女性的健康。肿瘤微环境（TME）在癌症的发生和发展中起着至关重要的作用，就像是肿瘤生长的 “土壤”，里面有各种各样的 “成员”，比如细胞外基质（ECM，就像是细胞生活的 “脚手架” ）、癌细胞相关成纤维细胞（CAFs）等。这些 “成员” 之间相互协作，为癌细胞的扩散提供了有利条件。

在这个 “土壤” 里，有一种名为内皮素 - 1（ET - 1）的小分子肽，它就像一个 “幕后黑手”，通过与两种 G 蛋白偶联受体（GPCR），即内皮素 A 受体（ETAR）和内皮素 B 受体（ETBR）结合，在癌细胞和基质细胞之间 “搞事情”，推动着 SOC 的发展。同时，β - 抑制蛋白 1（β - arr1）也参与其中，和 ET - 1 一起 “狼狈为奸”。然而，目前大家还不太清楚 ET - 1 在卵巢成纤维细胞对 ECM 蛋白的调节中到底扮演着什么角色。为了搞清楚这个问题，相关研究人员开展了深入研究。

作者[第一作者单位] 的研究人员在《期刊原文名称》上发表了一篇名为《论文原文标题》的论文。他们经过一系列研究得出结论：ET - 1 参与了 ECM 的重塑以及 SOC 的早期发展过程，通过调节 I 型胶原蛋白（Col1）和纤连蛋白（FN）的表达来发挥作用。而且，抑制 ET - 1 信号通路中的 ETAR/ETBR 受体，有可能干扰 CAFs 产生关键 ECM 蛋白的能力，这为治疗 SOC 提供了新的潜在方向。这个研究成果意义重大，就像是在黑暗中为攻克 SOC 点亮了一盏明灯，为后续的治疗研究提供了重要的理论依据。

研究人员为了开展这项研究，运用了多种关键技术方法。他们使用蛋白质免疫印迹法（WB）、定量实时聚合酶链反应（qRT - PCR）来检测相关蛋白和基因的表达情况；通过免疫荧光（IF）和共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）对细胞和组织中的蛋白进行观察和分析；还利用 RNA 测序（RNA - seq）技术来探索基因表达的变化；进行双荧光素酶报告基因检测，研究基因启动子的活性；运用生物信息学分析，研究基因表达与患者预后的关系。这些技术方法就像研究人员手中的 “秘密武器”，帮助他们一步步揭开 ET - 1 在 SOC 中作用的神秘面纱。

下面我们来详细看看研究结果。

ET - 1 促进 I 型胶原蛋白和纤连蛋白表达

研究人员发现，含有 COL1A1 和 FN1 的 myCAF 簇与肿瘤生长、转移以及患者短期生存密切相关。通过使用在线生存分析软件 Kaplan - Meier plotter，他们发现高表达 COL1A1 和 FN1 的 SOC 患者，在疾病 3 + 4 期时，总生存期（OS）和无进展生存期（PFS）都明显更差，这说明这两个基因的表达可以作为肿瘤进展的标志物。接着，研究人员培养了人原代卵巢成纤维细胞（HOFs），并对其进行鉴定，确认它们是真正的卵巢成纤维细胞。HOFs 能表达 ET - 1、ETAR 和 ETBR。当用 ET - 1 刺激 HOFs 时，研究人员惊喜地发现，COL1A1 和 FN1 的 mRNA 水平会随着时间增加，在不同时间达到峰值，而且 Col1 和 FN 蛋白的水平也提高了。这表明 ET - 1 就像一个 “指挥官”，能够促进卵巢癌关键 ECM 蛋白的表达。

阻断 ETA和 ETB受体抑制 Col1 和 FN 的表达

既然 HOFs 上有 ET - 1 的两种受体，研究人员就想看看阻断这些受体有什么效果。他们给细胞使用了 ETAR 拮抗剂（AMB）、ETBR 拮抗剂（BQ788）以及双拮抗剂（BOS）。结果发现，用这些拮抗剂预处理后，ET - 1 介导的 Col1 和 FN 的上调被显著抑制了，尤其是双拮抗剂 BOS 的效果最为明显。这说明 ET - 1 要发挥作用，这两种受体都很关键。研究人员还对 CAFs 进行了研究，发现 ET - 1 能使 CAFs 中 COL1A1 的表达上调，但对 FN1 的影响不明显。不过，用 AMB、BQ788 和 BOS 处理 CAFs 后，这些 ECM 蛋白的产生都受到了有效抑制。这意味着干扰 CAFs 中的 ET - 1 自分泌途径，可能是一种很有前景的治疗策略。

ET - 1 通过 β - arr1 的核功能调节 COL1A1 表达

已知 β - arr1 在 ET - 1 相关功能的核信号传导中起着重要作用，研究人员想知道 ET - 1/β - arr1 是否会在分子水平上影响 COL1A1 的调节。他们首先沉默 HOFs 中的 β - arr1，结果发现 ET - 1 诱导的 COL1A1 表达明显降低，这暗示 β - arr1 参与了 COL1A1 基因的调控。但 ET - 1 诱导的 FN1 表达在 β - arr1 沉默的细胞中并没有显著降低，说明 FN1 的调控还有其他机制。为了进一步确认 β - arr1 的核功能，研究人员进行了拯救实验，分别导入野生型（ARRB1 - WT）和核突变体（ARRB1 - Q394L）的 β - arr1。结果显示，ARRB1 - Q394L 转染的 HOFs 在加入 ET - 1 后，COL1A1 表达下降，而重新表达 ARRB1 - WT 后又能恢复。双荧光素酶报告基因检测也表明，ET - 1 能增加 COL1A1 启动子的活性，但这种活性会被 si - ARRB1 或 BOS 预处理所抑制。免疫荧光分析也证实了这些结果。这一系列实验都表明，β - arr1 就像一个 “基因调控小能手”，在细胞核中调节着 ET - 1 受体依赖的 COL1A1 表达。

β - arr1 引发上调 ECM 相关蛋白编码基因的分子反应

为了验证 ET - 1/β - arr1 轴在基质重塑和促结缔组织增生中的作用，研究人员对转染或未转染 si - ARRB1 的 HOFs 进行了转录组分析。他们发现了许多差异表达基因（DEGs），其中有一组与 ECM 相关蛋白编码基因显著富集。这表明核 β - arr1 能启动一个分子反应，增强 HOFs 中的 ECM 重塑和胶原蛋白沉积。此外，研究人员从数据库中分析发现，ARRB1 在癌基质中的表达明显高于癌上皮，进一步证实了它在 SOC 基质中的重要作用。

ETA/BR阻断在体内降低腹膜转移中 Col1 和 FN 的表达

研究人员分析了之前治疗得到的转移性结节的组织切片和全细胞裂解物。免疫荧光分析显示，AMB 和 BOS 都能显著下调 FN 和 Col1 的表达，BOS 的效果更明显。蛋白质免疫印迹分析也证实了这一点。这说明抑制 ET - 1 受体可以减少癌细胞与 CAFs 之间的相互作用，从而降低 ECM 重塑和卵巢癌细胞转移生长的可能性。

高 EDN1/ARRB1/COL1A1 和 EDN1/ARRB1/FN1 表达与 SOC 患者预后不良相关

研究人员通过分析基因表达水平与患者 OS、PFS 以及癌症分期的关系，发现高 EDN1/ARRB1 表达的患者，在疾病 1 + 2 期和 3 + 4 期时，OS 明显更差；在 3 + 4 期时，PFS 也更差。进一步分析 EDN1/ARRB1 与 COL1A1 或 FN1 的联合表达，发现虽然高表达与 OS 的显著相关性主要在晚期，但在早期和晚期，高 EDN1/ARRB1 表达与 COL1A1 或 FN1 都与 PFS 有明显关联。这表明这些基因表达谱可以作为 SOC 患者有价值的预后标志物。

综合研究结果和讨论部分，这项研究意义非凡。卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤，SOC 更是容易转移，患者预后很差。目前针对肿瘤微环境的研究为癌症治疗带来了新希望，而这项研究发现 ET - 1 信号通路与 CAFs 重塑 ECM 蛋白网络有关，这为理解 SOC 的发展和转移提供了新视角。ET - 1 通过 ETAR 和 ETBR 调节 Col1 和 FN 的表达，并且 β - arr1 在其中起到了关键的核调节作用。此外，研究还发现高表达 EDN1/ARRB1 与 COL1A1 或 FN1 和患者预后不良相关，这为临床判断提供了重要的参考指标。更重要的是，抑制 ET - 1 信号通路有可能选择性地靶向肿瘤支持性 CAFs，影响肿瘤的起始和进展过程。这就像是找到了肿瘤发展的一个 “命门”，为开发治疗 SOC 的新方法提供了理论依据，有望为卵巢癌患者带来新的生机。